物流开题报告毕业论文参考

物流开题报告毕业论文参考二、研究方法：1、在视网膜ir模型中检测bdnf基因的表达。采用视神经血管钳夹法建立视网膜ir模型，夹闭视网膜血供60分钟，分别于再灌注后3小时、24小时、48小时、7天处死大鼠，摘取眼球，显微镜下剥离视网膜，提取视网膜总rna，利用反转录多聚酶链反应(rt-pcr)及实时荧光定量pcr(real-timepcr)测定bdnf基因表达变化。2、抑制trpc通道时检测bdnf蛋白的表达。建立大鼠视网膜ir模型，于视网膜缺血术前30分钟，右眼通过玻璃体腔注射trpc拮抗剂skf96365为实验组，左眼注射溶剂pbs为阴性对照组，分别于再灌后3小时、6小时、12小时、24小时、48小时、72小时处死大鼠，摘取眼球，显微镜下剥离视网膜，提取视网膜总蛋白，蛋白质免疫印迹(westernblot)检测bdnf在视网膜组织中的蛋白表达水平。3、抑制trpc通道时检测bdnf基因的表达。将sd大鼠分为4组，分别进行如下处理：第一组，对眼球进行假手术，只行视神经分离术，不行视网膜缺血手术;第二组，建立视网膜ir模型;第三组于视网膜缺血术前30分钟，通过玻璃体腔注射pbs溶液，然后再建立视网膜ir模型;第四组于视网膜缺血术前30分钟，通过玻璃体腔注射注射skf96365，然后再建立视网膜ir模型。所有大鼠于再灌注后24小时处死，摘取眼球，显微镜下剥离视网膜，提取视网膜总rna，real-timepcr测定bdnf基因表达变化。三、研究结果rt-pcr及real-timepcr结果显示bdnfmrna在再灌注后3小时开始出现升高，24小时出现表达高峰，是对照组的1.4倍(p四、小结在ir模型中，bdnf基因的时间表达谱早于trpc6(trpc6的mrna水平在再灌后是12小时开始升高)，提示bdnf可能位于trpc6介导的细胞保护作用的上游。当trpc通道受到抑制时，bdnf的基因水平和probdnf蛋白水平都升高，表明bdnf的转录和翻译水平都有提高，但mbdnf没有变化，提示trpc通道反馈性影响bdnf翻译后修饰的过程。第二部分probdnf-p75ntr信号通路在视网膜ir模型诱导的rgcs损伤中的作用：一、研究目的探索p75ntr信号通路在视网膜ir诱导的rgcs损伤中的作用。二、研究方法使用荧光金(fluorogold，fg)通过上丘注射对活体sd大鼠rgcs进行逆行标记，在充分标记后(7天)，建立视网膜ir损伤模型，于视网膜缺血术前30分钟通过右眼玻璃体腔注射p75ntr信号通路拮抗剂tat-pep5进行干预，且同时左眼注射溶剂dmso为阴性对照，分别于再灌后24小时、48小时、72小时、7天处死大鼠，常规心脏灌流取视网膜，平铺后荧光显微镜下行rgcs计数，对结果进行统计分析。三、研究结果统计分析结果显示，在再灌注后48小时，玻璃体腔注射p75ntr信号通路拮抗剂tat-pep5组较之注射溶剂dmso对照组显著增加rgcs的数目(p四、小结在ir模型中probdnf-p75ntr信号通路可能参与抑制trpc通道诱导的促进rgcs死亡的过程。结论本研究提示bdnf可能是trpc6通道蛋白保护视网膜ir模型诱导的rgcs免受损伤的上游通路，当trpc通道受到抑制时，能反馈性影响bdnf转录后翻译修饰的过程，导致probdnf量的累积，提高与p75ntr受体结合率，从而诱导促进rgcs死亡。这一发现有助于增进我们对青光眼发病机制的认识和研究，并为临床上进行药物干预和治疗提供新的思路和途径。