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《贵阳地区市售牛奶中营养物质含量调查与评估》结题报告洪亮主要内容一、课题的提出二、课题研究的目的和意义三、主要研究方法和对象四、研究的主要步骤五、结论六、研究的主要成果七、附件一、课题的提出随着人民生活水平的提高，饮食更加注重营养性，因而全国不同品牌牛奶及其他液体奶制品的消费量有了很大提高，市场对奶制品的需求也愈来愈多，所以其质量问题也显得越来越重要，到底不同品牌牛奶中的营养物质（例如维生素）的含量是否与其广告宣传中含量那么高，所以对其营养质量的保证以及有效的牛奶中维生素含量检测手段的建立已经成为有关部门科技工作者和消费者共同关心的话题。对贵阳地区市售不同品牌的牛奶、不同液体奶制品中维生素含量的调查，建立分析过程中同时色谱分离食品基体中的水溶性和脂溶性维生素的快速灵敏检测方法填补国内空白。二、课题研究的目的和意义v目的：用高效液相色谱仪进行检测，调查不同牛奶中各种维生素含量差别，在测定过程中探究牛奶中维生素一次性测定得到一次性分离的新方法。v意义：建立一种简便、快速、稳定的牛奶中维生素含量测定的方法，使之达到预处理简单，分离度高，检出限低，不仅提高检测效率，而且准确性和重复性好，能具备推广应用的实际意义。三、主要研究方法和对象v主要研究的实验对象：针对贵阳地区市售不同品牌的牛奶及其他液体奶制品（例如市售鲜奶、纯牛奶、维生素AD钙奶，酸奶及特浓牛奶等）中维生素的含量应用现代分析仪器―高效液相色谱仪进行检测。v主要的研究方法：1.在测定过程中探究牛奶中全部脂溶性维生素或水溶性维生素一次测定得到一次性分离的新方法，建立一种简便、快速、稳定的牛奶中维生素含量测定的方法。2.研究牛奶样品质量控制及其工艺流程，分析其工艺是否对牛奶成品中维生素的含量有所影响。三、主要研究方法和对象3.建立试剂震荡离心法分离牛奶中的蛋白质来取代高温回流皂化反应。四、研究的主要步骤1、样品前处理：在市面上采购不同厂家生产的不同类型的奶制品，分类冷藏保存。2、不同实验的方法：首先考察维生素A、D、E在不同波长处的紫外吸收发现：在272nm处3种脂溶性维生素仍然具有明显的吸收峰，所以本检测方法采用272nm单一波长检测。然后以甲醇：异丙醇为流动相时，不同流动相比例（90：10、95：5、85：15）进行优化实验，最终确定最佳流动相比例，即在甲醇：异丙醇（90：10）条件下，维生素A、D、E及杂质都能完全分离。最后由于牛奶中蛋白含量较高,需要加入溶剂进行沉淀蛋白处理。分别利用甲醇、乙醇、乙腈三种有机溶剂进行处理。以2份按国标方法处理的牛奶中维生素A、D、E检测结果的平均值为考察指标，考察不同蛋白沉淀溶剂的沉淀蛋白效果和脂溶性维生素提取效果。四、研究的主要步骤高效液相色谱法同时测定牛奶中维生素A、D和E含量：准确量取3份10mL牛奶样品于50mL聚丙烯塑料离心管中，加入等体积乙腈,加盖在振荡器中震荡30min，然后以8000r/min速率离心20min,将上清液经无水硫酸钠干燥后转移至在35℃水浴下旋转蒸发至近干,用甲醇定容至1mL，过0.45µm滤膜后，取20µL注入高效液相色谱仪进行检测。五、结论v本研究采用有机试剂对蛋白质的沉淀作用，有效沉淀牛奶中的蛋白质，通过高效液相色谱法对沉淀后牛奶中酯溶性维生素进行测定，建立了无需皂化-高效液相色谱测定牛奶中脂溶性维生素A、D、E的方法。为酯溶性维生素的样品前处理方式和有效化学成分的研究提供一定理论参考依据，更全面、更合理的确定牛奶的营养成分，从而规范市场上营养物质的标识，评价市售牛奶的质量。v本项目撰写学术论文篇，达到了合同要求。六、研究的主要成果1、建立试剂震荡离心法分离牛奶中的蛋白质来取代高温回流皂化反应。2、建立紫外分光光度计对酯溶性维生素进行不同波段的扫描，寻找酯溶性维生素的最佳吸收波长，并对不同维生素性质进行研究，最终确定三种酯溶性维生素的最佳吸收波长。3、建立高效液相色谱法，采用外标计算法，对不同厂家、不同时间生产的奶制品中酯溶性维生素含量进行测定，对其结果进行相关性分析。4、建立高效液相色谱-双波长法同时测定不同奶制品中维生素A、维生素D、维生素E三种营养成分的分析方法。5、发表学术论文1篇(中文核心期刊)。七、附件v本课题发表的论文：v《无需皂化-高效液相色谱法同时测定牛奶中维生素A、D和E》，食品工业，2014，12（38）：258-260。