柞木防治尿路结石机理的初步研究

柞木防治尿路结石机理的初步研究前言项目名称：柞木防治尿路结石机理的初步研究合同号：合同经费：试验方法和材料01动物实验体外模拟实验02动物实验高血尿酸模型通过“酵母膏+乙胺丁醇”连续灌胃3周健康成年实验Wister大鼠实验动物动物实验正常组：不给任何药物；模型空白组：酵母膏+乙胺丁醇；模型+柞木高剂量组：酵母膏+乙胺丁醇+高剂量柞木；模型+柞木中剂量组：酵母膏+乙胺丁醇+中剂量柞木；模型+柞木低剂量组：酵母膏+乙胺丁醇+低剂量柞木；模型+别嘌呤醇对照组：酵母膏+乙胺丁醇+别嘌呤醇。正常组和模型组大鼠同等条件下均正常喂养。实验分组与给药动物实验灌胃乙胺丁醇灌胃酵母膏灌胃柞木灌胃别嘌呤醇动物实验称取柞木100g，置入大烧杯中，加去离子水浸泡5h后，煎熬2次，每次1.5h，保留提取液约300ml，每毫升滤液相当于0.3g生药。用于动物实验灌胃。体外模拟实验：需将提取液离心，弃去沉渣，按提取液体积的20%加入壳聚糖凝絮剂以除去溶液中的粗粒子，磁力搅拌0.5h，放置过夜，离心，弃去沉渣，上层清液用0.45um的微孔滤膜过滤，滤液置冰箱中备用。柞木大鼠等效剂量：6.4（折算系数）x30g/60kg＝3.2g/kg柞木提取液动物实验1）酵母膏15g/kg/d：称量酵母膏60g，加入20ml蒸馏水，配成浓度为1.5g/ml的酵母膏溶液。2）乙胺丁醇0.125g/kg/d：将2粒盐酸乙胺丁醇胶囊溶于40ml蒸馏水中，配成0.0125g/ml的乙胺丁醇溶液。3）柞木高剂量6.4g/kg/d。4）柞木中剂量3.2g/kg/d。5）柞木低剂量1.6g/kg/d。6）别嘌醇片75mg/kg/d：将3片别嘌醇片溶于20ml蒸馏水中配成15mg/ml溶液。试剂配制动物实验①血液：所有大鼠3周后处死，立即从大鼠髂血管抽取血液5ml，37℃水浴30min，2000-2500r/min离心15min，血清分装后-20℃保存待检，用于检测血尿酸和血清肌酐和尿素氮。②尿液：实验结束前用代谢笼收集24小时尿量，用于检测尿尿酸。③大鼠双肾标本：大鼠处死后，切除大鼠双肾，10%中性福尔马林固定，用于常规HE石蜡切片，观察肾组织的病理改变。标本采集及指标检测动物实验大鼠尿液收集尿液采血大鼠肾脏体外模拟实验柞木能否络合钙的体外实验。实验分为二组：一组为柞木提取液+氯化钙+去离子水；另一组为枸橼酸纳溶液+氯化钙+去离子水。每一组溶液总量为2ml，氯化钙为0.2ml。实验方案体外模拟实验表1：柞木煎剂+氯化钙+去离子水编号123456氯化钙（ml）0.20.20.20.20.20.2柞木提取液0.10.20.40.81.60去离子水1.71.61.41.00.21.8表2：枸橼酸纳溶液+氯化钙+去离子水编号123456氯化钙（ml）0.20.20.20.20.20.2枸橼酸纳溶液0.10.20.40.81.60去离子水1.71.61.41.00.21.8实验方案试验结果与分析各组大鼠尿液中尿酸的测定与对照组相比，*P0.05;与模型组相比，#P0.05试验结果与分析各组雄性大鼠血液中尿酸含量、尿素氮及肌酐含量的测定与对照组相比，*P0.05;与模型组相比，#P0.05试验结果与分析各组雌性大鼠血液中尿酸含量、尿素氮及肌酐含量的测定与对照组相比，*P0.05;与模型组相比，#P0.05试验结果与分析各组大鼠24h尿量的测定与对照组相比，*P0.05;与模型组相比，#P0.05试验结果与分析各组大鼠血液中钙含量的测定与对照组相比，*P0.05;与模型组相比，#P0.05试验结果与分析各组大鼠HE染色结果（×400）正常对照组模型组模型+柞木低剂量组模型+柞木中剂量组模型+柞木高剂量组模型+别嘌呤醇组试验结果与分析枸橼酸钠络合钙试验：通过加入不同浓度的枸橼酸钠溶液，随着枸橼酸钠浓度的增加，离子钙的浓度越来越低，但随着柞木提取液浓度的增加，而离子钙的浓度却没有减少，提示柞木提取液在体外不能铬合钙，故没有体外溶解含钙结石的效果。编号A1A2A3A4A5CK氯化钙（ml)0.20.20.20.20.20.2柞木提取液0.10.20.40.81.60去离子水1.71.61.41.00.21.8离子钙含量%0.570.951.231.641.101.84编号B1B2B3B4B5CK氯化钙（ml)0.20.20.20.20.20.2枸橼酸钠溶液0.10.20.40.81.60去离子水1.71.61.41.00.21.8离子钙含量%1.981.671.561.451.231.84结论研究动物实验发现：通过酵母膏+乙胺丁醇构建高血尿酸大鼠模型，造模成功，柞木提取液能提高24h尿量，降低尿尿酸、血尿酸，通过降低尿尿酸、血尿酸和增加尿量，可以预防和治疗尿酸结石。柞木提取液能降低尿素氮和肌酐，病理学检查显示，柞木高中低剂量治疗组中，中剂量肾细胞形态较为正常，炎性细胞浸润较少，肾小管结构较为清晰，说明柞木提取液能够保护高血尿酸症引起的大鼠肾损伤，其保护肾功能机理，可能与通过降低血尿酸水平有关。结论柞木提取液能显著降低血清钙含量，可以预防结石的产生，其机制可能与钙离子-内皮损伤-炎症反应有关，此推论有待于进一步的研究。研究中发现雌性大鼠的造模及治疗结果显示，各组大鼠尿尿酸水平、血尿酸水平波动较大，可能与雌鼠激素分泌波动有关，有待进一步研究尿酸、雌激素及柞木之间是否存在关联。体外实验中，提示柞木提取液在体外不能铬合钙，故不能体外溶解含钙结石。经费使用情况购卖试剂耗材支付5200元，用于购卖相关检测试剂盒、试剂和一次性耗材等。生化检测及病理学检查支付33000元，用于尿尿酸、血尿酸、尿素氮、肌酐、血钙和离子钙等。购卖实验用Wistar大鼠支付16800元。根据项目经费使用原则和实际使用经费情况，课题经费使用合理。课题考核指标完成情况1.提出柞木对尿酸结石具有预防和治疗作用，机理是通过降低尿尿酸、血尿酸和增加尿量，降低血清钙含量。2.发表核心期刊论文篇，其中北大中文核心期刊篇，科技核心期刊篇。谢谢聆听！