搜索
实验3空气中细菌的检测与消毒剂消毒效果评价目的要求1.掌握沉降平板法的原理。2.掌握消毒效果的评价方法，了解常用消毒剂的使用范围和适用浓度。器材和试剂1．培养基及试剂普通营养琼脂培养基、50℃液态灭菌普通营养琼脂培养基、1：500的84消毒液、无菌生理盐水2．其他灭菌100ML三角烧瓶（含玻璃珠）、灭菌平皿、无菌1ml、10ml吸管、灭菌试管、消毒棉签、灭菌5×5空心规格板、火柴、蜡笔、试管架、喷雾器、酒精灯、恒温水浴箱。步骤和方法一、空气中细菌的检测1.沉降平板法的原理：利用微生物气溶胶粒子受重力作用沉降到敞开的营养琼脂平板上，对空气中细菌进行采样计数。2.方法：1）于室内四角及中央各放营养琼脂平板（或血琼脂平板）一个，于同一时间揭开皿盖，暴露20分钟。置370C孵育24h。2）计数5各平板菌落总数并算出每立方米空气中所含细菌数。参考表1作出评价。50000N每立方米空气中的细菌数=AtA:所用平皿面积（cm2）。T：暴露于空气的时间（分钟）。N：培养后，平皿上菌落数。表1居室内空气卫生细菌学评价参考标准夏季标准（个/m3）冬季标准（个/m3）空气评价细菌总数绿色和溶血性链球菌细菌总数绿色和溶血性链球菌清洁空气＜1500＜16＜4500＜24污染空气＞1500＞36＞7000＞36二、物体表面消毒及效果评价：1.消毒前的采样：选择可能被污染的对象（如桌面、墙面）放上灭菌5×5空心规格板，取一支无菌棉签用生理盐水浸湿，在规格板的空心处，有顺序的涂擦，然后将棉签放入盛有25ml生理盐水的三角烧瓶中，制成原液，充分混匀，备用。2.消毒后的采样：选择与消毒前污染程度差不多的部位，用装有84消毒液的喷雾器喷雾消毒，待干（20分钟左右），用上述同样方法采样，并制成原液备用。3.将消毒前后的样品用无菌生理盐水做1：10、1：100、1：1000、1：10000的倍比稀释4．用无菌操作的方法取不同稀释度液体1ml注于直径90mm的无菌平皿，每个稀释度做两个平行样，做一个空白对照，然后加入已融化并冷却至50℃的营养琼脂15ml,立即在平面上向同一方向平稳转动，使之混匀，待凝固后翻转平板。1ml标本中活菌数=全平板cfu×稀释倍数5.菌落计数方法：1）平板菌落计数时，可用肉眼观察，必要时用放大镜检查，以防遗漏。记下各平板上的菌落数后，应求出同一稀释度的平均菌落数，供下一步计算时应用。2）在求同一稀释度的平均数时，若其中一个平板有较大片状菌落时，则不宜采用，而应以无片状菌落生长的平板作为该稀释度的平均菌落数。3）若片状菌落不足平板一半，而其余中菌落数分布均匀，则计数后乘2代表全平板菌落数，然后再求该稀释度的平均菌落数。6.不同稀释度平均菌落数的确认：1）应选择平均菌落数在30-300之间的稀释度，乘以稀释倍数报告之（见表例1）。2）若有两个稀释度其生长之菌落数均在30-300，则应视二者之比如何来决定，若其比值小于2，应报告平均数。若其比值大于2则报告其中较小的数字（见表例2和3）。3）若所有平均菌落数均大于300，则应按稀释度最高的平均菌落数乘以稀释倍数报告之（见表例4）。4）若所有稀释度的平均菌落数均小于30，则应按稀释度最低的平均菌落数乘以稀释倍数报告之（见表例5）。5）若所有稀释度的平均菌落数均不在30-300之间，其中一部分大于300或小于30时，则以最接近30或300的平均菌落数乘以稀释倍数报告之（见表例6）。6）若所有稀释度的菌落数均不可计数，则以最高稀释倍数无法计数报告之（例7）。表2稀释度选择及细菌总数报告方法例子稀释液及菌落数相邻稀释度菌落数在菌落总数报告方式10-110-210-330-300间的比值（cfu/ml）（cfu/ml）11,36516420—16，40016，000或1.6*10422,760295461.637，75038，000或3.8*10432,890271602.227，10027，000或2.7*1044不可计4，650513—513，000510，000或5.1*105527115—270270或2.7*1026不可计30512—30，50031，000或3.1*1047不可计不可计不可计—10-3无法计数7)所有稀释度均未见菌落：则报告小于10，而不报告0.6.菌落数报告方式：①菌落数＜100时按实数报告，未见菌落数者报告为小于10.②菌落数＞100时，采用两位有效数字，在两位有效数字后面的数值，以四舍五入法计算，也用10的指数表示。③在报告菌落数为“无法计数”时，应注明待检标本的稀释倍数。具体报告方式见表。根据消毒前后的菌落数，求出消毒前后细菌减少的百分比。消毒前菌落数-消毒后菌落数消毒前后细菌减少的百分比=×100%消毒前菌落数根据计算结果，评价该次消毒的效果。一般以90%以上为很好，80～%为良好，70～%为较好，60～%为一般，60%以下为不合格。