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17．叶绿素的提取及理化性质的鉴定66叶绿素的提取及理化性质的鉴定17叶绿素是植物吸收太阳光能进行光合作用的主要色素，高等植物叶绿体中主要含叶绿素a和叶绿素b。叶绿素是一个双羧酸的酯，在碱的作用下可发生皂化反应，产生叶绿酸钾。在酸性条件下，卟啉环中央的镁离子可以被H+取代，产生褐色的去镁叶绿素。叶绿素中的Mg++也可以被其它金属离子，如Cu++或Zn++等取代，此时叶绿素仍保持绿色。叶绿素在光照下会发出暗红色的荧光。实验目的：1．了解叶绿素的分子结构、理化性质及其生物学功能。2．学习提取叶绿素并对其理化性质进行分析的基本方法。实验内容：利用叶绿素能溶于有机溶剂的特性，用丙酮将叶绿素从叶中提取出来，再运用一些简单的物理和化学方法鉴定叶绿素的理化性质。实验步骤：1．叶绿素的提取▲将新鲜菠菜（Spinacia）叶片洗净擦干，去叶柄及叶脉。称取样品8g，剪碎置研钵内，加入8cm3丙酮及少许固体碳酸钠，迅速研磨成匀浆；然后再加入20cm3丙酮充分研磨。▲在一玻璃漏斗底部垫一小团脱脂棉，将匀浆通过脱脂棉过滤至已装有20cm3石油醚的分液漏斗中，再用少量的丙酮冲洗叶片残渣及研钵，合并滤液。▲沿分液漏斗的壁小心加入40cm3蒸镏水，轻轻摇动，使色素转移到上面的石油醚层静置数分钟，待分层清楚后弃去下面的丙酮一一水层。如发生乳化现象可加入2－3cm3饱和NaCl溶液。▲在分液漏中再加入40cm3蒸镏水，轻轻摇动，以洗去石油醚中残留的丙酮，共洗两次。然后将叶绿素的石油醚提取液放入具塞锥形瓶中，置暗处或用黑纸包好备用。2．叶绿素理化性质的观察▲光对叶绿素的破坏作用分别在两支具塞试管中注入2cm3叶绿素的石油醚提取液，盖紧塞子。一支置暗处，一支置强光(如太阳光)下，2－3h后，观察比较两者的变化差异，或在分光光度计的663nm处图17.1叶绿素分子式17．叶绿素的提取及理化性质的鉴定67比较二者的吸光度值的差异，将结果记录在实验报告中。▲叶绿素的皂化反应在一支试管中先加入2cm3叶绿素石油醚提取液，再加入2cm3新配制的30％KOH－甲醇溶液，用力摇动混匀后静置，待分层清楚后观察各层的变化，将观察结果记录在实验报告中。▲去镁叶绿素的形成在一支试管中加2cm3叶绿素石油醚提取液，然后小心加入3cm36mol/dm3HC1，摇动混匀后静置，待分层后观察各层的变化，记录观察结果。▲铜的取代作用在一支试管中加入3cm3叶绿素丙酮提取液，然后加入3cm36mol/dm3HC1，摇匀后再加入一小块醋酸铜结晶，将试管在水溶中微微加热，观察溶液的颜色变化，记录观察结果。▲叶绿素的荧光在一支试管中加入2cm3叶绿素石油醚提取液，在与入射光(如窗口的自然光)相垂直的方向观察叶绿素荧光，记录观察结果。综合分析：1．叶绿素在植物光合作用过程中起什么作用？2．提取叶绿素时加入Na2CO2的作用是什么？加多了可能出现什么问题？实验报告17．叶绿素的提取及理化性质的鉴定68姓名：学号：组（桌）号：▁▁▁▁▁▁▁▁▁▁▁▁▁▁▁▁▁▁▁▁▁▁▁▁▁▁▁▁▁▁▁▁▁▁▁▁▁▁▁叶绿素理化性质的分析鉴定植物材料：实验日期：处理方法和试剂反应结果结果分析▁▁▁▁▁▁▁▁▁▁▁▁▁▁▁▁▁▁▁▁▁▁▁▁▁▁▁▁▁▁▁▁▁▁▁▁▁▁▁