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附录1.光学显微镜的使用与维护附录1.光学显微镜的使用与维护光学显微镜是生物科学研究的重要工具，也是植物生物学实验教学过程中最常用的工具。光学显微镜通过特殊的光学成像原理把被观察的物体放大几百倍甚至上千倍，从而使我们能够对一些微小的生物以及生物体的很多细微结构进行仔细的观察。从事生物学研究，必须了解光学显微镜的基本构造和性能，并掌握正确的使用方法。1.光学显微镜的构造普通光学显微镜由光学部分和机械部分两部分组成。光学部分包括：物镜、目镜、聚光器和反光镜等；机械部分包括：镜台、镜座、镜头转换器、粗调节器和细调节器等。物镜是显微镜中最重要的光学部件，它决定显微镜像的质量、分辨力和放大倍数。物镜都安装在物镜转换器上，普通有低倍镜（4×，10×）、高倍镜（40×，45×）和油镜（90×，95×，100×）三种。使用低倍镜和高倍镜时，物镜与标本间的介质是空气，使用油镜时，物镜与标本间的介质是香柏油或液体石蜡。目镜位于镜筒的上方，它的功能是将物镜形成的中间像进一步放大，使之便于观察，但它并不能提高显微镜的分辨力。聚光器装在镜台下，其作用是将光线聚焦于标本之上，增强照明度。聚光器内部有孔径光栏可以调节开口的大小，且聚光器本身可以升降。反光镜是普通显微镜的取光设备，一面是凹镜，一面是平镜，镜体可在弧弓上自由翻转以调整位置，使光线射向聚光器。现代很多类型显微镜更多地采用人工光源，即内置式灯光照明，因此不再需要反光镜。镜台（载物台）是放置标本的地方，镜台上有压片夹用以固定标本。现代显微镜多采用推进尺固定标本，并可使标本前、后、左、右移动。粗调节器和细调节器能使镜筒或镜台升降，用于调节物镜与标本的距离，以得到最清晰的图像（调焦）。现代显微镜粗细调节器多采用共轴式，在轴上有锁环。观察时，制片放在镜台上，由反光镜反射、并经聚光器集中的光线透过制片，将制片上的结构在物镜中产生放大的倒的实像，此像落在目镜的焦距内，又为目镜放大，这样，眼睛最终看到的是放大的倒的虚像。显微镜的放大倍数由目镜、物镜和镜筒长度共同决定，镜筒长度一般为160mm（少有170mm），物镜和目镜上则直接刻有放大的倍数，物体最后被放大的倍数为目镜放大倍数与物镜放大倍数的乘积。如：物镜是40×，目镜是10×，则物体最后放大倍数是40×10＝400×。2.显微镜的使用步骤(1)把显微镜放在桌上，稍偏向身体的左方，离桌子边缘约3厘米的位置，右侧放记录本或绘图纸等。(2)在使用显微镜观察切片前，首先要调节好光源。在实验室中可利用灯光或自然光，但不能利用直射的太阳光，以免损伤眼睛及制片。为了迅速而正确地对光，先用低倍镜(这里指的是10×物镜)，开大光圈，在目镜上观察附图1.1附录1.光学显微镜的使用与维护和转动反光镜，寻找最光亮的部分，同时必须使整个视野（就是在显微镜中所能看到的范围）的光线均匀。如果靠近灯光，可取凹面的反光镜，如果离光源较远，可用平面的反光镜。(3)把制片（切片）放在显微镜的镜台上，把需要观察的部分移到物镜下面，然后用压片夹压紧。(4)通过目镜进行观察，观察时应睁开双眼，用左眼看目镜。(5)在开始观察时，为避免物镜压坏制片，可以先从侧面注视物镜与制片间的距离，同时逐渐降落镜筒，使之靠近盖玻片，然后通过目镜观察，慢慢转动粗调节器，使镜筒逐渐上升，直到看清制片中的影像为止。(6)需要观察制片中某一部分的细微结构时，可先在低倍镜下找到最合适的地方，并将其移到视野的中央，然后转动镜头转换器，转用高倍镜(40×)观察。当换到高倍镜后，应该就可以看到制片中的影像，如果不太清楚，可以转动细调节器使影像清晰可见。(7)需要用油镜观察时，要先将物镜移开，在要观察的部位加一滴香柏油或液体石蜡，然后将油镜放正，并慢慢转动粗调节器，降下镜筒，使镜头浸入油滴中。可下降至几乎与制片接触，但切不可压及制片，以免损坏镜头。然后，用左眼在目镜上观察，向上微微转动粗调节器，使镜筒上升，当视野中出现有模糊的影像时，改用细调节器向上转到，直至影像清晰为止。使用显微镜过程中要注意以下几个问题：(1)自显微镜柜中取出显微镜时，要用右手握住执手，左手托住镜座，小心地放到桌面上，不可单手拎着移动。(2)任何旋钮转动有困难时，绝不能用力过大，而应查明原因，排除障碍。如果自己不能解决时，要向指导教师说明，帮助解决。(3)保持显微镜的清洁，尽量避免灰尘落到镜头上，否则容易磨损镜头。同时要尽量避免试剂或溶液滴到显微镜上，特别是用高倍物镜观察时，镜头很容易被染料或试剂沾污，一旦被沾污，应立即用擦镜纸擦拭干净。由于光学玻璃比一般玻璃的硬度小，易于损伤。因此擦拭光学透镜只能用专用的擦镜纸，不能用棉花、棉布或其它物品擦拭。擦时要先将擦镜纸折叠为几折，从一个方向轻轻擦拭镜头，每擦一次，擦镜纸就要折叠一次，以免沾在擦镜纸上的灰尘损伤透镜，使镜面出现一条条的划痕。(4)每次实验结束时，应将物镜转成“八”字形垂于镜筒下，然后降下镜筒，避免物镜镜头下落时与聚光器相碰撞。显微镜应存放于阴凉干燥的地方，若放在潮湿处，一旦镜片上着生霉菌，就会腐蚀镜片，且很难除去。附图1.2附图1.3附录1.光学显微镜的使用与维护3．显微测微尺的使用在使用显微镜进行观察时，有时需要测量不同细胞、细胞器或微生物体的大小，这时就需要使用显微测微尺显微测微尺有目镜测微尺和镜台测微尺两种。目镜测微尺是一块可放在目镜内的圆形小玻片，在它的中央刻有精确的刻度，一般分50小格或100小格，每5个小格之间有一长线隔开。当使用不同目镜和物镜进行观察时，由于它们的放大倍数不同，因此目镜测微尺每小格所代表的实际长度也不一样。镜台测微尺是在中央部分刻有精确等分线的载玻片，尺长一般为1mm，每小格的长度是0.01mm，专门用于校正目镜测微尺每格的长度。使用时首先要对目镜测微尺进行标定。标定的方法是将镜台测微尺置于显微镜的载物台上，使刻度面朝上。取出目镜，旋开透镜，将目镜测微尺放在目镜的隔板上，使刻度向下，然后旋上目镜透镜，将目镜放回镜筒内。然后在低倍镜下看清镜台测微尺，转动目镜，使目镜测微尺的刻度平行于镜台测微尺的刻度，移动镜台测微尺使两种测微尺在某一区间内的两对刻度线完全重合，计算出两对重合线间各自所占的格数，根据下列公式计算出目镜测微尺每格所代表的实际长度：两对重合线间镜台测微尺格数×10目镜测微尺每小格长度（μm）=——————————————————两对重合线间目镜测微尺格数目镜测微尺每格的长度标定好以后，就可以移去镜台测微尺，换上需要观察的显微制片，调节焦距使物像清晰，通过转动制片或目镜测微尺，测出所要测量的细胞、细胞器或微生物体所占的格数，将此结果乘以每小格所代表的长度，即可求出单个细胞、细胞器或微生物体的大小。附图1.4