搜索
内容提要1•概述•脂质体的组成与结构•脂质体的理化性质和特点•脂质体的制备•脂质体的质量评价•脂质体的作用机制和给药途径•提高脂质体靶向性策略概述•脂质体（Liposome）–系指将药物包封于类脂质双分子层内而形成的微型泡囊（vesicle）–别称：类脂小球、液晶微囊2•脂质体的发展–1961，英国科学家AlecD.Bangham，高浓度的磷脂自发形成–1971，Rymen等将脂质体作为药物载体–1988，FDA批准了第一个脂质体制剂（阿霉素脂质体）–两性霉素B、柔红霉素等上市–新型脂质体的研究（长循环、靶向）–阿霉素PEG-脂质体3•Alza/先灵葆雅•复旦张江Caelyx里葆多4•国内外已上市的脂质体品种5药名商品名生产厂商适应症地区阿霉素DoxilSequus艾滋病、癌症欧美两性霉素BAmbisomeNextar严重真菌感染24个国家两性霉素BAmphocilSequus严重真菌感染亚欧两性霉素BAbelcetLiposome严重真菌感染24个国家阿糖胞苷DepocytDepotech急性粒细胞白血病阿霉素（长循环）CaelyxAlza/Schering-Plough癌症紫杉醇力扑素南京绿叶思科癌症中国阿霉素里葆多复旦张江癌症中国•脂质体的分类–按结构和粒径分•小单室脂质体（SUVs）0.02-0.08μm•大单室脂质体（LUVs）0.1-1μm•多室脂质体（MLVs）1-5μm•多囊脂质体（MVLs）5-50um–按电荷分•中性、负电荷、正电荷–按性能分•一般、特殊功能6•多囊脂质体–其结构不同于传统脂质体–具有多重内室的双分子层壁紧密堆砌填充在一起形成的微球–非同心单层脂质双分子层囊泡构成–可包封药物水溶液的体积达95%–水溶性药物包封率高–小分子水溶性药物、核苷酸、多肽、蛋白质•多囊脂质体–磷脂、胆固醇、三油酸甘油酯–Depofoam•Pacira和Skyepharma公司•阿糖胞苷•硫酸吗啡脂质体的研究领域模拟细胞膜的研究制剂的可控释放和体内靶向给药在体外培养中将基因和其他物质向细胞内传递9脂质体的组成和结构•脂质体的材料–磷脂•天然–卵磷脂–脑磷脂–大豆磷脂–磷脂酰乙醇胺（PE）•合成–二棕榈酰-DL-α-磷脂酰胆碱（DPPC）–磷脂酰丝氨酸（PS）–二肉豆蔻酰卵磷脂（DMPC）–硬脂酰胺（SA）10–胆固醇•调节膜流动性•又称“流动性缓冲剂”•低于相变温度时，减少膜有序排列，增加流动性•高于相变温度时，增加膜有序排列，减少流动性11磷脂的亲水端呈弯曲的弧形，形似“手杖”，与胆固醇分子的亲水基团相结合，形成“U”形结构，两个“U”形结构相对排列，构成双分子层结构。12•脂质体的结构1314脂质体的性质和特点15•脂质体的理化性质–相变温度（PhaseTransitionTemperature）•当升高温度时，脂质体双分子层中疏水链可从有序变为无序排列，从而使脂膜的物理性质发生一系列变化，可由“胶晶”转变为“液晶”，膜的横切面增加，双分子层厚度减小，膜流动性增加，反生这种转变时的温度称之。•影响因素：–脂质种类»二肉豆蔻磷脂酰胆碱（14C）24℃»二棕榈酸磷脂酰胆碱（16C）41℃»二硬脂酰磷脂酰胆碱（18C）58℃–胆固醇的用量（50%使脂质体膜相变消失）–药物、离子–脂质体的荷电性•正电荷：十八胺•负电荷：磷脂酸（PA）、磷脂酰丝氨酸（PS）•中性：不含离子•表征：Zeta电位（ζ）–粒径•大小•分布16•脂质体的特点–剂型特点•生物相容性好，无免疫原性，可血管内给药•适合包封的药物较多•可同时包封水溶性和脂溶性的药物•非共价包裹药物，易于在体内释放•方便进行表面修饰，达到主动靶向17–作用特点18•靶向性和淋巴定向性–单核吞噬细胞，被动靶向（i.v）–肌内、皮下、腹腔注射，进入淋巴结•缓释性•脂质体可以降低药物的消除速度，延长药物作用时间•细胞亲和性和组织相容性•降低药物毒性•保护药物提高稳定性–局限性及解决办法19•RES吞噬作用–Ploxamer、Tween、PVA表面修饰（亲水性修饰）–PEG化磷脂•稳定性差–冻干制品•主动靶向性差–表面修饰脂质体的制备•薄膜分散法–Bamgham首次报道–最常用的方法多室脂质（磷脂等）脂溶性药物有机溶剂（氯仿、二氯甲烷）旋转蒸发薄膜缓冲液（PBS等）可含水溶性药物水合脂质体超声、均质、过膜单室脂质体21•特点22–大部分药物–脂溶性药物与膜材共同溶解在有机溶剂中–水溶性药物溶解在水合介质中–制成的为多层脂质体，通过均质或过滤的方法制成单室脂质体•逆向蒸发法脂质有机溶液药物水溶液旋转蒸发胶态减压蒸发脂质体单室脂质体1:3或1:6超声乳化W/O乳剂缓冲液（PBS等）除去游离药物23•特点24–适合包裹水溶性药物、大分子生物活性物质–有机相：水相=2：1或4：1–超声乳化–超声时间和强度以形成的单相体系在静置30min内不重新分相为准•注入法乙醇注入法乙醚注入法25•特点26–工艺简单–不适合大分子物质–乙醚注入法对热敏感的药物易发生不稳定–粒度不均匀–乙醇注入法中，乙醇不易除净，影响稳定性•冷冻干燥法–适合热敏药物–不使用有机溶剂–冻干保护剂：2%-5%•超声波分散法–单室脂质体•复乳法–W/O/W复乳除去有机溶剂–多囊脂质体–适合水溶性药物，提高包封率–缓释27•主动载药法–种类•硫酸铵梯度法•pH梯度法•醋酸钙梯度法•离子载体–先制备好空白脂质体，然后载药–适用于弱酸弱碱药物–包封率高28•硫酸铵梯度法•HCl29•pH梯度法LiposomeExternalPhaseDXR•HCl调节pH至碱性DXRpH为酸性[DXRH+][H+]+DXR30•脂质体与未包封药物分离–柱色谱法•凝胶柱色谱•葡聚糖凝胶（SephadexG50）31–透析法•透析袋•适合小分子药物，大分子药物不适用–离心法•取决于脂质体的粒径–超滤膜过滤法32脂质体的质量评价33•脂质体的形态和粒径•包封率•载药量•突释和渗漏率•体外释放度•磷脂氧化程度•有机溶剂残留•体内行为评价•脂质体的形态和粒径–脂质体的粒径和分布（粒径仪）–形态（透射电镜TEM）磷钨酸染色冷冻透射电镜35•包封率和载药量–凝胶柱色谱–离心法–透析法–超滤法包封率=脂质体中包封的药量×100%系统中包封和未包封的药量总和载药量=脂质体中包封的药量×100%脂质体的总重量35•突释和渗漏率–突释效应：在体外释放试验中，液体介质中未包封的药物或脂质体表面吸附的药物会快速释放，称为突释–0.5h内释放要求低于40%–渗漏率渗漏率=脂质体在液体介质中储存一定时间内泄漏的药量×100%储存前脂质体包封的药量=𝑊总游−𝑊始游𝑊包𝑊包−𝑊贮36𝑊包×100%=×100%•体外释放度–透析法4540353025201510503705102025MTOreleasepercentage(%)15Time(h)•磷脂氧化程度–磷脂的氧化：•单个双键的耦合•氧化产物的形成•乙醛的形成及键断裂–氧化指数•双键耦合的指标•氧化指数=𝐴233nm（要求0.2）A215nm38•有机溶剂残留–中国药典附录–ICH规定（人用药物注册技术要求国际协调会议）•体内行为评价–药物动力学–正常动物体内的分布–荷瘤小鼠体内分布39脂质体的作用机制和给药途径•脂质体与细胞的相互作用–膜间转运（脂交换）–接触释放–吸附–内吞–融合40•给药途径–静脉注射–肌内和皮下注射–口服–眼部–肺部–经皮–鼻腔41提高脂质体靶向性途径•长循环脂质体–表面亲水修饰•Poloxamer•Tween–PEG化脂质体EPR效应（Enhancedpermeabilityandretentioneffect)：肿瘤细胞的增强渗透滞留效应正常组织中的微血管内皮间隙致密、结构完整，大分子和脂质颗粒不易透过血管壁，而实体瘤组织中血管丰富、血管壁间隙较宽、结构完整性差，淋巴回流缺失，造成大分子类物质和脂质颗粒具有选择性高通透性和滞留性，这种现象被称作实体瘤组织的高通透性和滞留效应，简称EPR效应42•脂质体膜表面结合特异性成分–掺入糖脂制成多糖被复脂质体•唾液糖蛋白•半乳糖苷–掺入免疫球蛋白制成免疫脂质体•单克隆抗体–吸附法–脂质蛋白融合法–交联法43•热敏脂质体–相变温度生理温度–加热靶部位，使脂质体在靶部位迅速释放–混合的磷脂酰胆碱产生理想的相变温度–一般理想的相变温度42-44℃44•pH敏感脂质体–肿瘤间质液的pH正常组织细胞间质液pH–膜材•普通脂质•pH敏感类脂–N-十六酰L-高半胱氨酸（PHC）5.0-6.57.4SNOOO45泡囊•泡囊（Niosomes）：类脂质体–两亲性的非离子表面活性剂组成–脂质体的替代品–注意与胶束的区分–载体材料•膜材•膜添加剂：胆固醇、负电荷磷脂二鲸蜡基磷酸盐–制备方法•同脂质体