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一、口腔粘膜脱落细胞采集注意：为了保证样本不被食物或者饮料污染，取样前30min内请勿进食和饮水。1、洗净双手；2、取出棉签；3、手持棉签，伸进口腔，从口腔内侧颊粘膜处（腮帮子内侧）反复擦拭40次以上（不时旋转棉棒），取出棉签；4、从试管盒中取出试管，打开管盖，将棉签头部伸入管中，用力掰断，将棉签头部留在管内，并扣紧管盖。二、口腔拭子基因组DNA提取（天根Kit，DP322）使用前，请先在缓冲液GD和漂洗液PW中加入无水乙醇，加入体积请参照瓶上的标签。1.处理材料：将在面颊内擦拭过的棉签转置于2ml离心管中，用剪刀将棉签部分从其杆上剪下，加入600ul缓冲液GA。注意:如果需要去除RNA，可加入4μlRNaseA(100mg/ml)溶液(客户自备，目录号:RT405-12)，振荡15sec，室温放置5min。 2.加入40ulProteinaseK溶液，涡旋10sec混匀，56°C放置20min，其间每7min涡旋混匀数次。 3.加入600ul缓冲液GB，充分颠倒混匀，70°C放置10min。此时溶液应变清亮，简短离心以去除管盖内壁的液滴，然后挤压去除拭子，将尽可能多的裂解液转移至新的离心管中。 注意1:加入缓冲液GB时可能会产生白色沉淀，一般70°C放置时会消失，不会影响后续实验。如溶液未变清亮，说明细胞裂解不彻底，可能导致提取DNA量少和提取出的DNA不纯。 注意2:如果由于拭子上细胞数少导致提取的基因组DNA少于1μg，可以在添加缓冲液GB的同时添加CarrierRNA(客户自备，目录号:RT416)。 4.加300ul无水乙醇，充分颠倒混匀，简短离心以去除管盖内壁的液滴。 注意:加入无水乙醇后可能会出现絮状沉淀，但不影响DNA提取。 5.将上一步所得溶液和絮状沉淀都加入一个吸附柱CR2中(吸附柱CR2放入收集管中)，12,000rpm(~13,400×g)离心30sec，倒掉收集管中的废液，将吸附柱CR2放回收集管中。 注意：第4步液体总体积超过800ul，分两次转移。6.向吸附柱CR2中加入500μl缓冲液GD(使用前请先检查是否已加入无水乙醇)，12,000rpm(~13,400×g)离心30sec，倒掉收集管中的废液，将吸附柱CR2放回收集管中。 7.向吸附柱CR2中加入600μl漂洗液PW(使用前请先检查是否已加入无水乙醇)，12,000rpm(~13,400×g)离心30sec，倒掉收集管中的废液，将吸附柱CR2放回收集管。8.重复操作步骤7。9.12,000rpm(~13,400×g)离心2min，倒掉废液。将吸附柱CR2室温放置数分钟，以彻底晾干吸附材料中残余的漂洗液。注意:这一步的目的是将吸附柱中残余的漂洗液去除，漂洗液中乙醇的残留会影响后续的酶反应(酶切、PCR等)实验。10.将吸附柱CR2转入一个干净的离心管中，向吸附膜中间位置悬空滴加20-50μl洗脱缓冲液TB，室温放置2-5min，12,000rpm(~13,400×g)离心2min。注意:洗脱缓冲液体积不应少于20μl，体积过小影响回收效率。为增加基因组DNA的得率，可将离心得到的溶液再加入吸附柱CR2中，室温放置2min，12,000rpm(~13,400×g)离心2min。洗脱液的pH对于洗脱效率有很大影响。若用ddH2O做洗脱液应保证其pH值在7.0-8.5范围内，pH值低于7.0会降低洗脱效率;且DNA产物应保存在-20°C，以防DNA降解。DNA浓度及纯度检测得到的基因组DNA片段的大小与样品保存时间、操作过程中的剪切力等因素有关。回收得到的DNA片段可用琼脂糖凝胶电泳和紫外分光光度计检测浓度与纯度。DNA应在OD260处有显著吸收峰，OD260值为1相当于大约50μg/ml双链DNA、40μg/ml单链DNA。OD260/OD280比值应为1.7-1.9，如果洗脱时不使用洗脱缓冲液，而使用ddH2O，比值会偏低，因为pH值和离子存在会影响光吸收值，但并不表示纯度低。琼脂糖凝胶电泳1、配置琼脂糖凝胶（1%）（以配置100ml琼脂糖凝胶为例）1)称取1g琼脂糖，倒入锥形瓶中；2）加100ml1*TAE，摇晃均匀，放入微波炉中加热至琼脂糖完全溶解（其间可取出锥形瓶摇几次，以促进琼脂糖溶解）；3）取出锥形瓶，待瓶身温度降至50度左右时（不烫手），加入1-2ul荧光染料，摇匀；4）倒入制胶板中，插上梳子，待其凝固。2、电泳1）从胶板上取下凝胶，在1*TAE中浸泡使胶孔中充满1*TAE（可直接在电泳槽中加样，也可把凝胶取出加样）；2）将PCR产物与6*LoadingBuffer充分混匀；3）将混合液加至凝胶孔中（注意留出加marker的孔）；4）加marker（根据片段大小选择合适大小的marker）；5）选择合适的电压开始电泳（一般选择160V，10-15min）；6）停止电泳，在凝胶成像仪上观察并拍照。