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实验5AMES试验检验遗传毒性和霉菌的接种（1）顶青霉和黑曲霉的三点接种；（2）蓝色犁头霉的八字接种；（3）AMES试验检测遗传毒性。材料和仪器（1）试管2支，5~10mL水/试管。（2）PDA，100mL+1.6g琼脂/瓶。（2）底层琼脂培养基，150mL+2.4g琼脂/瓶，112℃30min。（3）上层半固体培养基，融化，3.5mL/试管，7支，121℃20min。菌种：顶青霉、黑曲霉各2块皿底标记等距离的三点平板与火焰平行，相距5cm接种针灭菌后沾无菌水后取菌（孢子）防止无意过火杀菌菌种应该轻柔点接在平板表面。倒PDA平板三点接种要点28℃倒置培养7天，不要移动1、青霉和曲霉的三点接种是否接种成功？是否污染？是否三点？菌落特征。平板底部标记“八”字蓝色犁头霉“＋”“－”菌株“八”字型接种28℃倒置培养7天观察个体形态2、蓝色犁头霉的八字接种•Ames试验鼠伤寒沙门氏菌回复突变试验。•用途：检测药物对细菌的致突变作用。•检测原理：his-在含微量组氨酸的平板上发生有限次数分裂，形成肉眼不可见的微小菌落。如果分裂时发生回复突变，his-→his+，则继续分裂形成可见菌落。无外界因素影响，his-菌株自发突变仅形成少量可见菌落。加入待测物，如果形成更多可见菌落，则说明待测物能够诱发回复突变，即待测物对鼠伤寒沙门氏菌具有致突变作用，也可能对人有遗传毒性。3、Ames试验检测遗传毒性材料和仪器1.菌种：TA98。2.仪器：恒温振荡培养箱，恒温培养箱，水浴锅等。3.待测试剂：油性染发剂，水性染发剂，4-硝基-O-苯二胺（4-NOPD）。4.培养基：（1）牛肉膏蛋白胨液体培养基。（2）底层琼脂培养基，150mL+2.4g琼脂/瓶，112℃30min。（3）上层半固体培养基，融化，3.5mL/试管，121℃20min。TA98菌悬液融化底层琼脂培养基，150mL/瓶，冷却至50℃融化上层半固体培养基（7支/组），45℃保温倒底层平板7块，20mL/皿，冷凝底层×7步骤TA98菌悬液融化底层琼脂培养基，150mL/瓶，冷却至50℃融化上层半固体培养基（7支/组），45℃保温倒底层平板7块，20mL/皿，冷凝底层×7步骤迅速将带菌上层倒入底层平板上，铺匀检测×7TA98菌悬液融化底层琼脂培养基，150mL/瓶，冷却至50℃融化上层半固体培养基（7支/组），45℃保温倒底层平板7块，20mL/皿，冷凝底层×7步骤迅速将带菌上层倒入底层平板上，铺匀检测×7用镊子，无菌操作将沾有待测物的纸片粘在检测平板中央水样×1油性染发剂×2水性染发剂×24-NOPD×2TA98菌悬液融化底层琼脂培养基，150mL/瓶，冷却至50℃融化上层半固体培养基（7支/组），45℃保温倒底层平板7块，20mL/皿，冷凝底层×7步骤迅速将带菌上层倒入底层平板上，铺匀检测×7用镊子，无菌操作将沾有待测物的纸片粘在检测平板中央水样×1油性染发剂×2水性染发剂×24-NOPD×237℃培养48h观察结果，计数和拍照结果水4-NOPD