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《药物分析》实验指导讲义实验1药物一般杂质检查一、目的要求1、通过对葡萄糖分析，了解药物的一般杂质检查项目和意义。2、掌握葡萄糖分析中氯化物、硫酸盐、铁盐和重金属限度检查的原理和方法。二、原理《药物分析》书中一般杂质检查方法中的氯化物检查法、硫酸盐检查法、铁盐检查法和重金属检查法的原理。Ag++Cl-→AgCl↓白色凝乳状的沉淀氯化物在硝酸酸性溶液中与硝酸银试液作用，生成氯化银的白色浑浊液，与一定量的标准氯化钠溶液在相同条件下生成的氯化银的浑浊液比较，以判断供试品中氯化物是否超过了限量。Ba2++SO42-→BaSO4↓硫酸钡微粒硫酸盐的检查是利用SO42-与Ba2+在盐酸酸性溶液中生成的硫酸钡的白色浑浊液，与一定量标准硫酸钾溶液在相同条件下生成的浑浊比较，以判断供试品中硫酸盐是否超过了限量。Fe3++6SCN-→[Fe(SCN)6]3-↓红色可溶性的硫氰酸铁配位离子铁盐在酸性溶液中与硫氰酸铵生成红色可溶性的硫氰酸铁配位离子，与一定量标准铁溶液用同法处理后所显的颜色进行比较，以判断供试品中铁盐是否超过了限量。CH3CSNH2+H2O→CH3CONH2+H2S(pH=3.5)Pb2++H2S→PbS↓+2H+硫代乙酰胺在弱酸性（pH=3.5醋酸盐缓冲液）条件下，产生硫化氢，与重金属离子（如Pb2+）生成黄色到棕黑色的硫化物浑悬液，与一定量标准铅溶液经同法处理后所呈颜色比较，判断供试品中重金属含量是否符合限量规定。三、操作1、氯化物样品：葡萄糖0.6g————————︳标准：标准NaCl(aq)6.0mL————︳（标准NaCl(aq)浓度为0.01mgCl-/mL）→用水溶解为25mL→加稀HNO310mL→加水至40mL→加AgNO3溶液1.0mL→加水至50mL→摇匀，暗处放置5min，置黑色背景下-实验台面上，从比色管上方自上向下观察、比较，写出实验现象。实验现象：2、硫酸盐样品：葡萄糖2g————————︳标准：标准K2SO4(aq)2.0mL————（标准K2SO4(aq)浓度为0.1mgSO42-/mL）→用适量水溶解，使成25mL→加稀HCl1mL→30-50℃水浴10min(40℃)→加BaCl2溶液3.0mL→摇匀后定容至50mL，放置10min，置黑色背景下-实验台面上，从比色管上方自上向下观察、比较，写出实验现象。实验现象：3、铁盐样品：葡萄糖2g————————︳标准：标准Fe(aq)2.0mL————︳（标准Fe(aq)浓度为0.01mgFe/mL）→用20mL水溶解→加浓HNO33滴→煮沸5min，放冷→加水至45mL→加NH4SCN（硫氰酸铵）溶液3.0mL，摇匀后定容至50mL→摇匀，置白色背景下-白纸，从比色管上方自上向下观察、比较，写出实验现象。实验现象：4、重金属样品：葡萄糖4g————————︳标准：标准铅(aq)2.0mL————︳（标准铅(aq)浓度为10μgPb/mL）→用水20mL溶解→加醋酸盐缓冲液（pH=3.5）2mL→加水适量，至25mL→加硫代乙酰胺溶液2.0mL→摇匀，放置2min，置白色背景下-白纸，从比色管上方自上向下观察、比较，写出实验现象。实验现象：样品-无色，标准-黄锈色底四、实验记录和结果五、注意点：1、药物杂质检查必须注意按规定的检查条件，严格遵守平行原则。平行原则是指样品与标准必须在同一条件下进行反应与比较。即应尽量选择容积、口径和色泽相同的比色管，在同一光源、相同背景下，以相同的方式(一般是自上而下)观察，所加入的试药种类、用量、加入顺序和反应时间等也应一致。2、药物的杂质检查是限度检查，合格者仅说明其杂质量在药品质量标准允许范围内，并不说明药品中不含该项杂质。3、均采用50mL纳氏比色管，纳氏比色管一共有两根刻度线，下面的是25mL的刻度，上面的是50mL的刻度，实验时请留意。4、所加液体体积为整数的可以使用量筒操作，带有小数点液体的体积，需要用移液管进行操作。5、试剂位置的放置。取用试剂时，哪里拿的瓶子要放回原处，取出的试剂不要倒回原瓶，防止污染试剂，便于其他同学取用。每条台子只有1套试剂，大家可以先做离自己近的试剂的实验。6、水浴锅的用法：先添加适量的自来水，保持锅中水的高度与需要水浴的溶液高度平齐即可。然后插上电源，打开绿色开关，有个旋钮开关，不要动那个。可以看到红色的数字显示，是现在的温度，然后调节第二个按键至需要水浴的温度，如硫酸盐中的40℃，就可以了。后面实验需煮沸的一般设到80℃就可以煮沸了，用后要先关开关，再拔电源，然后等水凉后，把水浴锅中的水倒掉，面板擦拭干净，防止生锈。注意试验中不要把锅烧干了，还有就是后面的排水口，加热时不要同时排水。实验前可先把水浴锅打开，2个水浴锅，一个设定40℃，另一个设定80℃，节约实验时间。7、分析天平的用法：带好药匙和洗净的比色管，比色管用水擦干净，用称量纸称好后倒入比色管中，记录称量数字，注意不要把药品洒落在称量盘中，用后要用天平的刷子清洁天平，台面用纸或干抹布擦干净，天平室不要带入水。8、值日问题，打扫公共区域，垃圾倒干净，椅子摆整齐。自己的台面自己清理干净。蒸馏水倒掉。实验2药物特殊杂质检查一、目的要求1、掌握葡萄糖分析中砷盐限度检查的原理和方法2、了解某些药物中特殊杂质的检查意义，并掌握其操作方法二、实验原理《药物分析》中一般杂质检查方法中的砷盐检查法及某些药物中特殊杂质检查方法的原理。本实验采用古蔡（Gutzeit）法检查药物中微量的砷盐，其原理为金属锌与酸作用生成新生态的氢，与药物中微量砷盐反应生成具有挥发性的砷化氢，遇溴化汞试纸，产生黄色至棕色的砷斑，与一定量标准砷溶液所生成的砷斑比较，判断供试品中砷盐含量是否符合限量规定。利用乙酰水杨酸结构中无酚羟基，不能与高铁盐作用，而水杨酸则可与高铁盐反应呈紫(堇)色，与一定量水杨酸对照液生成的色泽比较，从而控制游离水杨酸的限量。药用乙醚性质不稳定，遇光或受热即变质，在空气中会慢慢氧化成过氧化物或乙醛，加热易爆炸、刺激性更强，且微量的杂质即可增加全麻诱导和维持的困难，事后并发症更多，因此，药用乙醚中过氧化物的检查非常重要。I2遇淀粉显色，判断供试品中是否有过氧化物存在。三氯甲烷在光照下能被氧化成氯化氢和有剧毒的光气。酸度增加，对金属有强烈的腐蚀性。而且碳酰氯毒性很强，对人和动物的黏膜及呼吸道有强烈刺激作用，具有窒息性，侵入组织则产生盐酸。在第一次世界大战时曾被用作毒气。碳酰氯水解溶于水后形成盐酸，利用酸碱中和的方法，来判断氯仿中酸度和碳酰氯是否超过限量。甲醇沸点是64.7℃，乙醇是78℃，因此是生产很难完全分离，而甲醇有较强的毒性，对人体的神经系统和血液系统影响最大，它经消化道、呼吸道或皮肤摄入都会产生毒性反应。乙醇主要做不同浓度的消毒剂，还可用于酒的主要成分、基本有机化工原料和汽车燃料等，因此，控制乙醇中的甲醇限量非常重要。甲醇在磷酸溶液中，被高锰酸钾氧化成甲醛，用偏重亚硫酸钠除去过量的高锰酸钾,甲醛与变色酸在浓硫酸存在下，先缩合，随之氧化，生成对醌结构的蓝紫色化合物。三、操作步骤1、葡萄糖中的砷盐检查：废液回收样品：葡萄糖2g置试砷瓶中→加水5mL溶解→加稀硫酸5mL与溴化钾溴试液0.5mL→80℃水浴加热20min（始终保持有过量溴存在，必要时再补加适量溴化钾溴试液，并随时补充蒸散的水分）→放冷，加浓盐酸4mL与水适量使成28mL标准：取标准砷溶液2.0mL置试砷瓶中→加蒸馏水21mL与浓盐酸5mL→加碘化钾试液5mL与酸性氯化亚锡试液5滴→置室温放置10min→加锌粒1.5g，迅速将瓶塞（瓶塞上已安装好醋酸铅棉花及2张溴化汞试纸的试砷管）塞紧→保持反应温度在25-40℃之间（视反应快慢情况而定，但不超过40℃）1h→取出溴化汞试纸，将生成的砷斑与标准砷溶液（0.001mgAs/mL）比较，颜色不得更深，结果附于实验报告上。醋酸铅棉花的装法：用铅丝和镊子把原来管里的棉花取出来，然后取大概铅丝粗细的棉花，用镊子弄的蓬松些，不要太紧，也不要太松，位置在管中部即可。实验前一定要检查装置的气密性，气密性是本实验的关键，塞子与装置要匹配。2、乙酰水杨酸中游离水杨酸的检查：50mL纳氏比色管中样品：乙酰水杨酸0.1g→加乙醇5mL溶解后→加蒸馏水适量使成50mL标准：水杨酸对照液1.0mL→加乙醇5mL，加蒸馏水适量使成50mL→加新制的硫酸铁铵指示液1mL→摇匀，比较观察。乙酰水杨酸不易溶解于水（瓶壁不能有水），有水可用乙醇荡洗下。先加乙醇，再加水。实验现象：3、麻醉乙醚中过氧化物的检查：总容量不超过15mL的具塞比色管中分出乙醚层，回收废液样品：乙醚5mL→加新制的碘化钾淀粉溶液8mL→强力振摇1min→暗处放置30min→两液层均不得染色，按实验结果判断。实验现象：4、氯仿中酸度与碳酰氯（COCl2）的检查：分出氯仿层，回收废液蒸馏水20mL→加酚酞指示液4滴→滴加0.01moL/L氢氧化钠溶液滴定，边滴边振摇至显淡红色（红色稍微深些，过一段时间，会被空气氧化变为无色）→分为二等分，分置甲、乙两个比色管中→甲管精密加氯仿20.0mL→振摇混合→用0.01moL/L氢氧化钠液滴定，边滴边振摇至重显淡红色与乙管一致，并能持久15min不褪，消耗0.01moL/L氢氧化钠液不得超过0.2mL。要有滴加的初读数和终读数，每一排一根滴定管就可以了。实验现象：5、乙醇中甲醇的检查样品：精密吸取乙醇检品溶液1mL→加磷酸溶液0.2mL（4滴）与0.5%高锰酸钾溶液0.25mL（5滴），标准：精密吸取标准甲醇溶液1mL30-35℃保温15min→滴加10%焦亚硫酸钠溶液至无色→缓缓加入硫酸（3→4）溶液5mL（反应会放热，比色管置于放有冷水的烧杯中，要注意沿管壁滴加、边滴加边摇晃，不要一次都倒进来）→1%变色酸溶液0.1mL（2滴）→沸水水浴（100℃）加热20min以上→比色观察，写出实验结果实验现象：四、实验报告的写法五、注意事项：1、本次实验中会使用到标准砷，溴化钾溴，浓硫酸，乙醚，氯仿等有毒腐蚀易燃品，取用时请注意安全。2、要注意试剂的位置，今天用的试剂很多，大家哪里拿好要放回哪里，取用比较方便。溴化钾溴试剂、浓盐酸、酸性氯化亚锡和硫酸（3→4）在通风厨中，要注意带手套。回收试剂为砷溶液、乙醚、氯仿，在通风柜中。取用溴化钾溴试液和浓盐酸要尽量快，盖好塞子放回原处，注意不要弄到其他地方。3、称量用到2种药品，葡萄糖与乙酰水杨酸，注意标签。4、刻度吸管、移液管、量筒的不同用途。实验三气相色谱法测定残留溶剂一、实验目的通过本次实验，了解气相色谱法（GC）的原理及仪器构造掌握用GC测定3种残留溶剂（丙酮、正己烷、乙酸乙酯）的方法二、实验原理详见《仪器分析》“气相色谱法”章节三、仪器结构实验时会具体讲解请大家参考《仪器分析》书进行预习四、实验操作实验前带教老师进好已知浓度的对照品实验时每组同学进一个未知浓度的待测样品按照“外标一点法”计算样品中3种溶剂的浓度计算公式参加《药物分析》第四章中定量分析方法特点→色谱分析法中的内容五、分离条件请同学们现场记录六、计算结果实验四容量法测定阿司匹林肠溶片含量一、目的要求通过本实验掌握两步滴定法测定阿司匹林肠溶片的原理和操作。二、原理阿司匹林肠溶片除了加入少量酒石酸或枸橼酸稳定剂外，制剂工艺过程中又有可能有水解产物（水杨酸、醋酸）产生，这些酸均会消耗NaOH滴定液，导致测定结果偏高，因此不能采用直接滴定法，而采用先中和与供试品共存的酸，再将阿司匹林在碱性条件下水解后测定含量的两步滴定法。第一步中和用NaOH滴定液中和可能存在的全部游离酸，阿司匹林也同时成为钠盐，消耗的NaOH滴定液体积可以不计。第二步水解定量加入过量的NaOH滴定液，水解阿司匹林。第三步测定用H2SO4滴定液滴定剩余的NaOH滴定液，由水解时消耗的碱量计算阿司匹林含量，滴定结果用空白试验校正。三、操作精称本品8片，求平均片重。置于研钵中，研细成粉后，用70mL中性乙醇分4次研磨（10、20、20、20mL）均匀，用玻棒、漏斗引流移入100mL容量