复旦药物分析课件07苯乙胺类拟肾上腺素药物的分析

第七章苯乙胺类拟肾上腺素药物的分析1第一节结构与性质2具有烃胺侧链，属于芳烃胺类药物。多数在苯环上有12个羟基取代基。代表药物3肾上腺素盐酸麻黄碱盐酸克伦特罗盐酸多巴胺性质：1.酚羟基特性邻苯二酚或苯酚结构，可与重金属离子络合呈色；易被氧化呈色。43.具有旋光性具有手性碳原子，具有光学活性。4.紫外特征吸收2.弱碱性具有烃胺侧链（仲氨），显弱碱性。能与酸成盐。第二节鉴别试验1、与铁盐的反应(酚羟基)：在0.1mol/L盐酸中与Fe3+显翠绿色，加氨试液后，显紫色或紫红色2、甲醛-硫酸反应本类药物与甲醛硫酸反应生成具有醌式结构的有色物质53、还原性反应4、双缩脲反应：氨基醇结构与硫酸铜的反应盐酸麻黄碱+硫酸铜→蓝紫色+乙醚)(222][or棕色聚合聚合物放置肾上腺素红　肾上腺素OIOH极微红色无色同样条件下去甲肾上腺素反应速度极慢or5、与亚硝基铁氰化钠的反应（Rimini试验）脂肪伯氨+丙酮＋碳酸氢钠＋亚硝基铁氰化钠→6、吸收光谱特征红紫色第三节、特殊杂质与检查310nmA2.0mg/mlHCl0.05mol/L测的溶液溶液样品一、酮体杂质的检查二、光学纯度的检查方法：HPLC或HPCE以高压电场作为驱动力，以毛细管为分离通道，依据样品中各组分之间淌度和分配行为上的差异而实现分离的一种液相分离技术。是经典电泳技术和现代微柱分离技术相结合的产物。三、有关物质的检查方法：HPLC法第四节、含量测定一、非水溶液滴定法非水溶剂中进行的酸碱滴定法。主要用来测定有机碱及其氢卤酸盐、磷酸盐、硫酸盐、有机酸盐等。非水溶剂：酸性溶剂-测定有机弱碱，冰醋酸碱性溶剂-测定有机弱酸，DMF两性溶剂-兼测酸、碱，甲醇惰性溶剂-甲苯、丙酮等(一)基本原理：在水中碱性较弱，不能顺利地进行中和滴定。在酸性非水介质中（如HAc中），则能显示出较强的碱性，滴定突跃增大，可以顺利地进行中和滴定。当HA酸性较强时，反应不能定量完成，必须除去或降低HA的酸性，使反应顺利地完成。BH+A-+HClO4BH+ClO4+HA游离碱类盐被置换出的弱酸因此，要根据不同情况采用相应测定条件。(二)一般方法供试品+冰醋酸+醋酐结果高氯酸滴定液滴定以空白试验校正溶剂：冰醋酸－醋酐；指示剂：结晶紫或电位法；滴定剂：高氯酸注意：氢卤酸盐药物若用结晶紫指示终点需用醋酸汞消除干扰；含氨基的药物如果需加入醋酐，应在加入冰HAc溶解放冷后再加醋酐，防止氨基被乙酰化。1.适用范围：主要用于Kb＜10-8的有机碱盐的含量测定。对碱性较弱的杂环类药物，只要选择合适的溶剂、滴定剂和终点指示的方法，可使pKb为8～13的弱碱性药物采用本法滴定。Kb为10-8～10-10时，宜选冰醋酸作为溶剂；药物的Kb为10-10～10-12时，宜选冰醋酸与醋酐的混合溶液；Kb＜10-12时，应用醋酐作为溶剂。另外，在冰醋酸中加入不同量的甲酸，也能使滴定突跃显著增大，使一些碱性极弱的杂环类药物获得满意的测定结果。(三)问题讨论2.酸根的影响：无机酸类，在醋酸介质中的酸性以下列排序递减：高氯酸＞氢溴酸＞硫酸＞盐酸＞硝酸（1）氢卤酸盐的测定：消除HX干扰的方法：①加Hg(Ac)2；②或者采用醋酐作溶剂，电位法指示终点。2B·HX+Hg(Ac)2→2B·HAc+HgX2过量(1～3倍)不影响测定结果（2）硫酸盐类药物测定硫酸是二元酸，在水溶液中能完成二级解离，生成SO42-，但在非水介质中，只显示一元酸解离为HSO4，即只供给一个H+，所以硫酸盐类药物在冰醋酸中，只能滴定至硫酸氢盐，因此可以用高氯酸滴定液直接滴定。NCH(OH)NCH3OCHCH2HNCH(OH)NCH3OCHCH2H++SO42-.NCH(OH)NCH3OCHCH2HH+.ClO4.HSO4+--NCH(OH)NCH3OCHCH2HH+.ClO4+--.ClO4+3HClO4+(C20H24N2·H+)2SO4+3HClO4→(C20H24N2·2H+)·2ClO4-+(C20H24N2·2H+)·HSO4-·ClO4-（3）硝酸盐的测定硝酸在冰醋酸介质中酸性不强，滴定反应可以进行完全。但是硝酸具有氧化性可以破坏指示剂使其变色，使指示剂无法指示终点。因此采用非水溶液滴定法测定硝酸盐时，一般不用指示剂法而用电位法指示终点。3.滴定剂的稳定性水的膨胀系数是0.21×10-3/CHAc膨胀系数是1.1×10-3/C，较大，体积随温度变化较大，且还具有挥发性。测定样品与标定标准溶液时温度不同，应对浓度进行校正。)(0011.010101ttNN配制时，根据HAc和HClO4含水量，加入计算量的醋酐4、终点指示方法最常用的指示剂是结晶紫，少量电位法紫蓝蓝绿绿黄绿黄（碱性区）—————→（酸性区）终点的颜色应用电位法校准。二、溴量法1）原理：Br2+2KI→2KBr+I2I2+2Na2S2O3→2NaI+Na2S4O62)操作要点①游离溴及碘极易挥散，操作过程中防逸失②不能加入太过量的溴液，以防酚羟基氧化或溴化。③平行条件作空白，校正操作中溴及碘挥发。CHCH2NHCH3OHOH+3Br2CHCH2NHCH3OHOHBrBr+3HBr20三、亚硝酸钠法具有芳伯氨基药物，在酸性条件下与NaNO2反应生成重氮盐，根据消耗NaNO2量，计算出含量。盐酸克伦特罗分子结构中含有芳伯胺基，可用此法测定含量。21四、紫外分光光度法与比色法五、高效液相色谱法六、体内药物分析22盐酸克伦特罗的测定：液质联用仪由以下几部分组成数据及供电系统━━━━┳━━━━━╋━━━━━━┓进样系统离子源质量分析器检测器┗━━━━━╋━━━━━━┛真空系统LC/MS系统构成++样品与溶剂脱离及电离EIESIAPCILC/MS接口离子源质量分析器检测离子HPLC数据系统质谱离子识别QuadrapoleTimeofFlightFourierTransform…+++++++离子检测++-++++++-+++2017/5/2325毛细管2-4kV离子从液滴表面蒸发出来--+++-+++++-含各种离子的液滴--++++-----+++--++++-----+++-随着液滴的挥发,电荷密度增大,离子集中到液滴表面++-+-+++-++-+-+++-适合液相色谱的软离子化方法-电喷雾电离(ESI):电喷雾离子化分为三个过程:1.形成带电液滴2.溶剂蒸发和液滴碎裂3.形成气相离子2017/5/2326大气压化学电离(APCI)大气压化学电离可分为以下两个步骤:–快速蒸发–气相化学电离(电晕放电)xxxH+M1)离子化过程优先生成溶剂离子xxxH+M2)溶剂离子与样品分子反应生成离子簇电晕放电针X=溶剂分子xxMM=样品MH+xxxxXH+xxH+MH+3)离子传送到质量分析器并实现离子分离毛细管2017/5/23四极杆质谱仪三级(重）四极杆质谱仪液相色谱串联质谱快速测定猪肝中的β-受体激动剂残留29专属性猪肉中克伦特罗、沙丁胺醇、土霉素、四环素残留量的HPLC同时测定方法研究32样品的提取与净化：准确称取10.0g绞碎的猪肉样品于50mL离心管中，加入5.0mL0.01mol/LEDTA-2Na和5.0mL0.3%磷酸溶液，混匀2min，超声提取15min后加1.0mL高氯酸（1:1），混均1min，于4000r/min离心15min，收集上清液。残渣中再加入5.0mL0.01mol/LEDTA-2Na、5.0mL0.3%磷酸溶液、1.0mL高氯酸（1:1），混匀1min，超声提取10min，于4000r/min离心10min，合并上清液备用。分别用10mL甲醇、10mL蒸馏水先后淋洗C18柱，流速为1.0mL/min。将上述提取液全部过C18柱，流速0.1mL/min富集，先用6mL蒸馏水淋洗柱，流速0.2mL/min，再用甲醇洗脱，流速0.2mL/min，收集洗脱液15mL于离心管中，于40℃水浴中氮气吹干，用0.1mL0.01mol/L盐酸溶解残渣，混匀30s，4000r/min离心10min，上清液供液相色谱测定。34色谱条件：流动相：乙腈∶0.02mol/LKH2PO4+30μmol/LEDTA-2Na(pH=3.5)梯度洗脱，0min（12∶88）→6min（22∶78）；流速：1.0mL/min；柱温：40℃；DAD检测器波长编程：196nm(0～2.8min)，360nm(2.8～8.5min)，210nm(8.5～15min)；进样量：10μL