复旦药物分析课件14维生素类药物的分析

第十四章维生素类药物的分析维生素类药物（Vitamins）维生素类药物均属于有机化合物，但从化学结构上来讲并非同一类化合物，各具有不同的理化性质和生理作用。中国药典2015版中收载了维生素类药物原料及其制剂共计40余种。维生素结构不同，性质不同，一般按溶解性分为脂溶性维生素和水溶性维生素两大类。2第一节、维生素A的分析31.维生素A的结构4维生素A具有共轭多烯醇侧链，有多种异构体R:-H维生素A醇-COCH3维生素A醋酸酯-COC15H31维生素A棕榈酸酯H3CCH3CH3CH2ORCH3CH32.维生素A的性质5溶解性：强脂溶性不稳定性：不饱和键易氧化紫外吸收特性：共轭多烯侧链三氯化锑呈色：不稳定蓝色3.维生素A的鉴别(1)三氯化锑反应：维生素A在饱和无水三氯化锑的无醇三氯甲烷溶液中显蓝色，渐变成紫红色。6深蓝紫红(2)紫外光谱法：7λmax为326nm一个吸收峰λmax为340-390nm三个吸收峰VitA无水乙醇-HCl(100:1)去水VitA8H3CCH3CH3CH2ORCH3CH3H3CCH3CH3CH2CH3CH3010002000300040002602803003203403603804004204400100020003000400026028030032034036038040042044001000200030004000260280300320340360380400420440维生素A326nm去水维生素A348、367、389nm300400nmA4.维生素A的分析含量测定9维生素A的含量用生物效价，即国际单位（IU/g）来表示1IU=0.344μg全反式维生素A醋酸酯1IU=0.300μg全反式维生素A醇ChP2015维生素A：本品系用每lg含270万单位以上的维生素A醋酸酯结晶加精制植物油制成的油溶液。含维生素A应为标示量的97.0%~103.0%。规格：（1）每lg含维生素A50万单位（2）每lg含维生素A100万单位1011去氢维生素A（A2）去水维生素A（A3）维生素A醛维生素A酸维生素A中存在的结构相似的杂质，这些杂质活性较低，紫外吸收相似维生素A及其异构体的种类及性质12名称形式紫外吸收相对生物效价（100%）顺反异构λmax(nm)维生素A醇+醋酸酯325,325.51832,1584100全反式新维生素Aa醇+醋酸酯328,3281686,1431752-顺新维生素Ab醇+醋酸酯319,320.51376,972.7244-顺新维生素Ac醇+醋酸酯311,310.5907.8,858.8152,4-二顺异维生素Aa醇+醋酸酯323,3231477,1199216-顺异维生素Ab醇+醋酸酯324,3241379,806.5242,6-二顺%11cmE由亍维生素A原料或制剂中常混有其他杂质，包括多种异构体、氧化降解产物等等。这些杂质在维生素A的测定波长处也有吸收。为了得到准确的测定结果，消除干扰，目前各国药典基本都采用“三点校正法”测定维生素A及其制剂的含量。1314三点校正紫外分光光度法即是在三个波长处测定吸光度值后，在规定的条件下以校正公式迚行校正，再迚行含量计算，以消除无关吸收的干扰，求得维生素A的真实含量。三点校正紫外分光光度法三个波长校正公式消除无关吸收的干扰第一节VitAλmax(nm)换算因子λmax(nm)换算因子环己烷327.515301900326.517551900异丙醇3251600183032518201830溶剂VitAacetateVitAalcohol%cm1Ε%cm1Ε维生素A在325-328nm的波长范围内具有最大吸收，其最大吸收峰的位置随溶剂的不同而异。15161IU=0.344μg全反式维生素A醋酸酯2907000IU/g换算因子IU/𝑔𝐸1𝑐𝑚1%29070001530=190033300001820=1830维生素A醋酸酯维生素A醇1IU=0.300μg全反式维生素A醇3330000IU/g17三点校正法测定维生素A的含量基亍以下两个条件：（1）杂质的吸收在310~340nm波长范围内呈一条直线，丏随波长的增大吸收度减小；（2）物质对光的吸收具有加和性。（1）.测定原理18三点波长：1为维生素A的最大吸收波长max，另外在最大吸收波长两侧各选一点为2和3。等波长差法：3-1=1-2；Δ=12nm1=328nm,2=316nm,3=340nm。等吸收比法：；1=325nm,2=310nm,3=334nm。13276AAA（2）.波长的选择λ2λ1λ3nmA328340316A1A2A3VitA醋酸酯测定的波长选择-等波长差法A328(校正)=3.52(2A328-A316-A340)λ1=328nmλ2=316nm；λ3=340nmΔλ=12nm纯品杂质供试品19Aλ2λ1λ3nm310325334A1A2A3Aλ2Aλ1Aλ3A325(校正)=6.815A325-2.555A310-4.260A334VitA醇测定的波长选择-等吸收值法λ1=325nmλ2=310nm；λ3=334nmAλ2=Aλ3=6/7Aλ1纯品杂质供试品20第二步：求吸收系数（3）.维生素A醋酸酯的测定第一步：吸光度值A的选择𝐸1cm1%第三步：求效价第四步：求含量A328或A328（校正）𝐸1cm1%=A/(𝑐×𝑙)效价（IU/g）=𝐸1cm1%×换算因子标示量(%)=(效价/规格)×100%第一步：吸光度值A的选择21混合物的浓度𝐸1cm1%≠𝐸1cm1%（纯品）22维生素A醋酸酯的测定-等波长差法供试品配制维生素A醋酸酯溶剂：环己烷9~15IU/ml吸光度测定300316328340360A328最大吸收比值比较A300/A328A316/A328A328/A328A340/A328A360/A3280.5550.9071.0000.8110.299比值在±0.02之间A为实测值23比值超出±0.02求算A328(校正)=3.52(2A328-A316-A340)判断是否用校正值计算(A328(校正)-A328)/A328×100%0+3%-3%-15%用皂化法测定用A328实测用皂化法测定用A328(校正)（4）.维生素A醇的测定——皂化法24供试品皂化供试品（相当于VitA总量500IU，质量2g）乙醇/氢氧化钾供试品配制吸光度测定A300A310A325A334VitA醋酸酯→VitA醇植物油→甘油和脂肪酸盐皂化液乙醚萃取挥干乙醚异丙醇溶解9~15IU/mlA300/A325≤0.73计算A325(校正)A325最大吸收25A325(校正)=6.815A325-2.555A310-4.260A334判断是否用校正值计算(A325(校正)-A325)/A325×100%0+3%-3%用A325实测用A325(校正)用A325(校正)26A300/A3250.73色谱分离C18甲醇-乙腈-水（50：50：2）检测波长254nm收集维生素A27•三点校正紫外分光光度法测定维生素A的含量各国药典略有不同•中国药典采用等吸收差法测定维生素A的含量•美国药典采用皂化法测定维生素A的含量•测定时三点波长均在吸收峰附近，因此仪器的波长对结果准确度影响较大，测定前应校正仪器波长•测定应在半暗室中尽快进行VitAD胶丸中VitA的含量测定精密称叏本品(规格10000VitAIU/丸)装量差异项下（平均装量0.08262g/丸）的内容物0.2399g至250ml量瓶中，用环己烷稀释至刻度，摇匀；精密量叏2.0ml，置另一20ml量瓶中，用环己烷稀释至刻度，摇匀。以环己烷为空白，测得吸收度为，求本品中维生素A的含量？A300：0.354A316：0.561A328：0.628A340：0.523A360：0.216A300/A328：0.555A316/A328：0.907A328/A328：1.000A340/A328：0.811A360/A328：0.299A300/A328：0.564A316/A328：0.893A328/A328：1.000A340/A328：0.833A360/A328：0.3440.5550.9071.0000.8110.299+0.01－0.010+0.02+0.04605052305610628025232523340316328328.....AAA.A校正－－－－－=====%)3~%15(%7.3%100AAAf328328)(328校正%0.99%1001000008262.010020125022399.01900605.0%100)ml100/g(C1900A%328标示量平均丸重标示量校正NSCH3CH2CH2OHNNH3CNH2CH2+氨基嘧啶环－CH2－噻唑环(季铵盐)第二节维生素B1的分析1.结构溶解性：易溶亍水，水溶液呈酸性。UV共轭双键λmax=246nm2、性质硫色素反应不生物碱沉淀试剂反应氯化物的特性荧光消失蓝色荧光硫色素正丁醇）（环合HCNFeKOHNaOHVitB6321]O[OH3.鉴别试验硫色素荧光反应-与属性反应CH2NNH3CNH2CH3NNaSC2H4OHONNH3CNH2HClNSCH3C2H4OHCH2NaOHNNH3CNNNaSCH3C2H4OH-H2OSCH3C2H4OHNNH3CNNH环合NNH3CNNSCH3C2H4OHH2硫色素，蓝色荧光VitB14242HgIH]B[HgIK淡黄2KIIIHI]B[2红色H+白色硅钨酸OH4WO12OHSiO]B[23222白色扇形苦酮酸H+沉淀反应PbSNaSVitBAcPbNaOH　OHNHAgNOAgCl白3HNO蓝淀粉试纸KIMnOClS元素反应Cl-其他反应3、含量测定（1）非水溶液滴定法：溶剂：冰醋酸+醋酐；电位法指示终点；反应摩尔比1:2（2）紫外分光光度法片剂、注射剂，246nm=421%cmE1138（3）硫色素荧光法：荧光硫色素异丁醇铁氰化钾VitBNaOH维生素B1在碱性溶液中被铁氰化钾氧化物硫色素，用异丁醇提叏后，在紫外光（ex365nm)照射下呈现蓝色荧光（em435nm）,通过不对照品荧光强度比较，即可测得供试品含量。+NaOH+铁氰化钾+异丁醇+NaOH+异丁醇+NaOH+铁氰化钾+异丁醇+NaOH+异丁醇SdAb对照液供试液dSbAC样×C标特点：灵敏度高，线性范围宽，与属性强，氧化产物及代谢产物丌干扰，可用亍制剂分析，体液分析等。第三节、维生素C的分析40中国药典2015版中收载有维生素C原料及其片剂、泡腾片、泡腾颗粒、注射液、颗粒剂、维生素C钙、维生素C钠及复方维生素C钠咀嚼片。411.维生素C的结构42烯二醇结构内酯环结构2个手性碳原子（C4、C5）性质极为活泼，且有旋光性OOHHOOHOHOH1234562.维生素C的性质43溶解性：水中易溶，水溶液显酸性；乙醇中略溶，在三氯甲烷或乙醚中丌溶。酸性：C3位的OH叐共轭效应的影响酸性较强（pKa14.17），一般表现为一元酸。旋光性：2个手性碳原子，四个光学异构体，L-抗坏血酸活性最强。44-2H+2HOH-(H+)H2OL-抗坏血酸（有生物活性）还原性：结构中的烯二醇基具有极强的还原性。L-去氢抗坏血酸（有生物活性）L-二酮古洛糖酸（无生物活性）OCCH2OHHOOHHOHOOCCH2OHOOHOHOCH2OHCHCHOHCCCOONa(H)OOHO45水解性：内酯环稳定，但在强碱中可水解，生成酮酸盐。糖类的性质：