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18遗传病的诊断DiagnosisofGeneticDisease遗传病的诊断前言遗传病的常规诊断分子诊断遗传病的常规诊断一、遗传疾病诊断的主要内容病史采集症状与体症家系分析染色体检查生化检查二、对已出现症状的患者的诊断明确的临床诊断确定其遗传规律三、携带者的检出携带者携带有隐性致病基因，本人表现正常的个体；携带有显性致病基因，但没有外显的正常个体；携带有致病基因，迟发个体；染色体平衡易位或倒位的个体。携带者的检出临床水平细胞水平酶与蛋白质水平基因水平四、产前诊断遗传学检查细胞培养、染色体检查、分子诊断等；生化检查特殊蛋白质、酶、代谢底物、中间产物和终产物等；物理诊断B超、X线、胎儿镜、电子监护等。需产前诊断的对象：夫妇之一有染色体畸变，特别是平衡易位携带者，或者夫妇染色体正常，但出生过染色体异常的患儿的夫妇；35岁以上的高龄孕妇；夫妇之一有开放性神经管畸形，或出生过这种畸形患儿的夫妇；夫妇之一有先天性代谢缺陷，或出生过这种患儿的夫妇；X连锁遗传病基因携带者孕妇；原因不明的习惯性流产的孕妇；羊水过多的孕妇；夫妇之一有致畸因素接触史的孕妇；具有遗传病家族史，又系近亲婚配的孕妇。虽然具备了上述条件，但如果出现先兆流产、妊娠时间过长、有出血倾向者，则不宜做产前诊断，另外应拒绝仅要求仅做胎儿性别的检查。取胎儿细胞和羊水方法有：羊膜穿刺法绒毛取样法脐带穿刺胎儿镜检查孕妇外周血胎儿细胞富集分子诊断一、分子诊断学的发展从第一代遗传标志（RFLP）第二代遗传标志（STR）第三代遗传标志（SNP）二、分子诊断的策略和常用技术基因诊断的策略基因突变的检测mRNA检测基因连锁检测基因诊断的基本技术核酸杂交聚合酶链反应DNA测序基因芯片技术其它常用的技术PCR-RFLPPCR利用一对或数对特异性引物，将目标DNA扩增；酶切利用某些限制性内切酶消化PCR产物，如PCR产物中含有相应的酶切位点序列，DNA链则被切开；电泳利用琼脂糖凝胶或聚丙烯酰胺凝胶分离酶切后的PCR产物，根据电泳图谱判断结果。PCR-ASO：使用只有几十个核苷酸的探针，检测被检DNA中的同源序列。由于探针比较短，当被检DNA序列与探针不完全互补，甚至只要有一个碱基的差异，杂交分子就不能稳定形成，因此该方法的灵敏度非常高，特异性也非常好。PCR-ASOPCR-SSCP当双链DNA变性为两条单链后，各自会在中性条件下形成各自特定的空间构象，因而在电泳时将在不同的位置上出现各自电泳条带。如果DNA序列发生变化，甚至只有一个碱基变化，空间构象也有可能发生变化，电泳条带也随之变化。PCR-SSCP三、分子诊断技术的应用基因诊断在遗传病中的应用例如：镰状细胞贫血的基因诊断酶解正常人DNA和患者DNA，用标记的珠蛋白基因为探针作Southern杂交镰状细胞贫血的基因诊断限制性内切酶MstⅡ切割的序列是CCTNAGG（其中N是任何一种核苷酸），切割正常DNA产生1.1kb珠蛋白的DNA片段；若切割患者DNA时，由于AT破坏了MstⅡ的位点，便形成1.3kb珠蛋白的DNA片段。例如：血友病A的基因诊断PCR技术与RFLP相结合的方法。首先用PCR技术将包含突变DNA的片段扩增出来，然后用识别该位点的限制酶来酶解，电泳后直接检测多态性位点的状态。基因诊断在肿瘤中的应用ras基因突变的检测ras基因突变的检测可采用PCR-ASO方法进行，已知ras基因突变的热点在12、13及61密码子。p53基因的检测目前常用PCR法进行检测p53突变的热点是外显子5-8，一般可先选用外显子5-8的引物进行扩增，其后再进行突变位点的详尽分析，甚至测序。另一初步检测p53基因突变的方法为PCR-SSCP，然后测序。DNA分型DNA分型也分子诊断的重要内容，特别是在研究检测HLA类型、T细胞受体类型等方面具有重要意义，而分型的结果对研究疾病关联的基因类型和疾病易感性基因等方面具有较大的价值。帕金森病基因诊断的研究进展家系研究连锁基因的研究4号染色体相连锁的呈常染色体显性遗传的PD（PARKI）6号染色体相连锁的呈常染色体隐性遗传的少年型PD（PARK2）2号染色体相连锁的呈常染色体显性遗传的PD（PARK3）散发性PD遗传易感性的研究四、疾病分子诊断的展望未来的分子诊断主要发展方向胚胎着床前诊断—在囊胚8个细胞期，通过对其中一个细胞的染色体核型分折和原位杂交，从而将人类的遗传缺陷控制在最早期阶段；母体外周血中胎儿细胞分析技术；对常见病、多发病如心血管系统疾病、糖尿病、精神疾病、神经系统疾病、恶性肿瘤、哮喘、近视眼等进行分子诊断。五、疾病分子诊断所带来的问题准确性稳定性复杂性基因歧视TheEnd