复旦医学遗传学实验课件06遗传病分析3:培养细胞的染色体制备

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遗传病分析3培养细胞的染色体制备定义在细胞的生长周期中,中期染色体的长短、大小、恒定性正适合我们对其进行分析、研究。因此利用人工的方法,使大部分分裂细胞处于中期而不向后期转化,并获得之,经处理,制片后观察分析。器材细胞株普通光学显微镜冰载玻片酒精灯试剂0.25%胰旦白酶液0.075MKCL秋水仙素固定液(冰醋酸/甲醇1:3)Giemsa染液操作1.收集细胞前6h,培养细胞中加5ug/ml秋水仙素2滴,混匀后继续培养2.0.25%胰旦白酶液消化细胞,并收集细胞于离心管中3.离心1800转/min×10min,弃上清,取沉淀4.加0.075MKCL低渗液4ml,充分打匀细胞,室温静置20min5.再加入固定液1ml,并与原有的低渗液充分混匀,室温静置5min6.离心,弃上清,取沉淀操作7.加固定液5ml,轻轻打匀,室温静置30min8.离心,弃上清,取沉淀9.加少量固定液,制成染色体悬液10.取1-2滴染色体悬液,滴加在冰玻片上,迅速吹片,酒精灯下烤干玻片11.Giemsa染色5min,自来水冲洗,待干后,显微镜下观察光镜100倍下人染色体G带照片注意浓度与时间秋水仙素、低渗临用时新鲜配制固定液、染液固定液的比例制片和染色

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