华北理工药物分析课件02药物的鉴别试验

第二章药物的鉴别试验Identificationtestofdrugs鉴别：判定真伪检查：安全性、有效性、均一性含量测定：有效成分的定量药品检验工作的主要内容BasicregularityofdruginspectionIdentificationtestofdrug第一节、鉴别试验的内涵第二节、鉴别试验的项目第三节、鉴别试验的方法第四节、鉴别试验的条件药物的鉴别试验目的：根据药物的分子结构特征，采用物理、化学、或生物学方法，判断(鉴别)药物真伪。适用性：仅用于证实贮藏在有标签容器中的药物是否为其所标示的药物，并非对未知物化学结构的确证鉴定。要求：方法专属，每个品种一般2～3项不同类型的鉴别试验。第一节、鉴别试验的内涵PrinciplesofIdentificationTest一、性状和物理常数二、鉴别项下规定的试验一般鉴别：区分药物的类别专属鉴别：区分个别的药物单体(同类或相同母核)第二节、鉴别试验的项目ItemsinIdentificationTest原料药鉴别制剂鉴别一、性状和物理常数性状(呈现状态)：反映了药物特有的物理性质。外观溶解度物理常数Characters/DescriptionPhysicalConstants外观：指药物的聚集状态、晶型、色泽以及臭、味等。如ChP对维生素B1的描述为“本品为白色结晶或结晶性粉末；有微弱的特臭，味苦；干燥品在空气中迅即吸收约4%的水分”。对于链霉素片的描述为“本品为糖衣片或薄膜衣片，除去包衣后，显白色至微带黄绿色”。溶解度：不同溶剂中的溶解特性；一定程度上反映了药品的纯度。物理常数：内在物理特征；既可鉴别，也可反映纯净的程度。性状和物理常数熔点固体熔化成液体的温度熔融同时分解的温度自初熔至全熔的一段温度物理常数（PhysicalConstants）玻璃毛细管测定法：“初熔”：开始局部液化，出现明显液滴时的温度。“全熔”：全部液化时的温度。熔点及其测定法性状和物理常数第一法：测定易粉碎的固体药品(一端熔封)毛细管放入：传温液加热至较规定熔点低限约低10℃时升温速率：1.0~1.5℃/min；熔融分解2.5~3.0℃/min；重复测定3次，取平均。第二法：测定不易粉碎的固体药品(如脂肪、脂肪酸、石蜡、羊毛脂等)(两端开口，吸入熔融样品，冷冻凝固测定)升温速率：0.5℃/min，供试品在毛细管中开始上升时的温度。第三法：测定凡士林或其他类似物质熔点及其测定法性状和物理常数比旋度：在一定波长与温度下，偏振光透过长1dm且每1ml中含有旋光性物质1g的溶液时测得的旋光度。用表示。应用：鉴别药物检查纯度含量测定(制剂)性状和物理常数e.g.VitC熔点190～192℃，+20.5～21.5,葡萄糖注射液的含量测定吸收系数：在给定的波长、溶剂和温度等条件下，吸光物质在单位浓度、单位液层厚度时的吸收度称为吸收系数。摩尔()与百分吸收系数()。中国药典用：%1cm1E%1cm1E依据同类药物的结构、性质进行的真伪鉴别。无机药物：其阴、阳离子的特殊反应;有机药物：共有母核、官能团特征反应。特点：确定(区分)类别，不能够确定个别品种。常见一般鉴别试验：丙二酰脲类、托烷生物碱类、芳香第一胺类、有机氟化物类、有机酸盐、无机金属盐类、无机酸盐、etcGeneralidentificationtest二、一般鉴别试验有机氟化物鉴别方法：取供试品约7mg，照氧瓶燃烧法进行有机破坏，用水20ml与0.01mol/L氢氧化钠溶液6.5ml为吸收液，俟燃烧完全后，充分振摇，取吸收液2ml，加茜素氟蓝试液0.5ml，再加12%醋酸钠的稀醋酸溶液0.2ml，用水稀释至4ml，加硝酸亚铈试液0.5ml，即显蓝紫色，同时做空白对照试验。F-+OHOOOHCH2+Ce3+pH4.3NCH2COOHCH2COOHFOOOOCH2CeNCH2COOHCH2COOH茜素氟蓝蓝紫色配合物水杨酸盐•鉴别方法一：取供试品的稀溶液，加三氯化铁试液1滴，即显紫色。•反应原理：本品在中性或弱酸性条件下，与三氯化铁试液生成配位化合物，在中性时呈红色，弱酸性时呈紫色。•鉴别方法二：取供试品溶液，加稀盐酸，即析出白色水杨酸沉淀；分离，沉淀在醋酸铵试液中溶解。+FeCl3OOHOH+FeOOOOHH2O+3HCl依据：特定药物分子中的特殊性质、特征基团或官能团的专属反应或测定进行的真伪鉴别。Specificidentificationtest三、专属鉴别试验C17位上有α-醇酮基，与四氮唑反应e.g.醋酸泼尼松PrednisoloneAcetate取本品约1mg，加乙醇2ml使溶解，加10％氢氧化钠溶液2滴与氯化三苯四氮唑试液1ml，即显红色方法分类化学鉴别法光谱鉴别法生物学法HPLC、GC鉴别法薄层色谱鉴别法纸色谱鉴别法呈色反应鉴别法紫外光谱鉴别法红外光谱鉴别法沉淀生成反应鉴别法色谱鉴别法气体生成反应鉴别法测定生成物的熔点荧光反应鉴别法第三节、鉴别试验方法IdentificationTestMethods专属性强，耐用性好，灵敏度高，操作简便、快速。常用方法：化学法，光谱法，色谱法和生物学法。中药材鉴别方法：还有显微鉴别法和特征图谱或指纹图谱鉴别法。制剂的鉴别：尽可能与原料药相同；必须：排除辅料干扰；多组分或微量成分，须用更灵敏、专属的方法。特殊性质：采用特定方法。如手性、晶型等。药物的鉴别方法要求指供试品溶液中加入适当的试剂溶液，在一定条件下进行反应，生成易于观测的有色产物。（1）三氯化铁呈色反应：用于酚羟基或水解后产生酚羟基（2）异羟肟酸铁反应：多用于芳酸及其酯类、酰胺类（3）茚三酮呈色反应：用于AA和结构中含有氨基糖单元的药物（4）重氮化-偶合显色反应：用于芳伯氨基或潜在芳伯氨基（5）氧化还原显色反应及其它颜色反应多巴胺等酚性药物与三氯化铁试液呈色加碱溶液后的变色反应1.呈色反应鉴别法一、化学鉴别法2.沉淀生成反应鉴别法（1）与重金属离子的沉淀反应维生素B1与碘化汞钾生成淡黄色沉淀[B]·H2HgI4。（2）与生物碱沉淀剂的反应丙二酰脲类药物与硝酸银反应NHNOONaOR1R2+AgNO3+Na2CO3NHNOOAgOR1R2++NaHCO3NaNO3NHNOOAgOR1R2NNAgOOAgOR1R2+AgNO3+Na2CO3++NaCHO3NaNO3常用的荧光发射形式：（1）药物本身可在可见光下发射荧光；（2）药物溶液加硫酸后，在可见光下发射荧光；（3）药物和溴反应后，于可见光下发射出荧光；3.荧光反应鉴别法（4）药物和间苯二酚反应后，发射出荧光及药物经其它反应后，发射荧光。（1）大多数的胺（铵）类药物、酰脲类药物以及某些酰胺类药物，可经强碱处理后，加热，产生氨（胺）气。（2）化学结构中含硫的药物，可经强酸处理后，加热，发生硫化氢气体。（3）含碘有机药物，经直火加热，可生成紫色碘蒸气；含醋酸酯和乙酰胺类药物，经硫酸水解后，加乙醇可产生醋酸乙酯的香味。4.气体生成反应鉴别法1、紫外光谱鉴别法（1）规定：最大/最小吸收波长；（2）规定：一定浓度供试液，最大吸收波长和吸收度；（3）规定：吸收波长和吸收系数法；（4）规定：几个吸收波长，和吸收度比值；（5）规定：经化学处理后产物的光谱特性。二、光谱鉴别法氟胞嘧啶紫外光谱鉴别本品8µg/ml的盐酸溶液(9→100≈0.1mol/L)，最大吸收波长286nm，吸光度约为0.57，最小吸收波长244nm。供试品与对照品(或红外标准图谱)的一致性，指纹特性。2、红外光谱鉴别法aba:A晶型;b:B晶型(有效晶型)e.g.棕榈氯霉素的石蜡糊片IR谱氯羟去甲安定红外光谱鉴别氯羟去甲安定的测定：“取本品，经干燥后用溴化钾压片法测定其红外光吸收图谱中3440cm-1，3220cm-1，1695cm-1，1614cm-1，1324cm-1，1132cm-1以及828cm-1波数附近处有吸收”。无定型（无水）无水型1三水合物无水型2氨苄西林四种结晶态粉末x-射线衍射鉴别衍射角（2）、相对强度、面间距3、其他光谱法：NIRNMRMSAASx-rayetcTLC，GC，HPLC，联用鉴别，etcsr混sRsR相同浓度的供试品与对照品比较，主斑点：应一致；供试品溶液与对照品溶液等体积混合，供试品与混合液主斑点：应一致结构相似的其它药物与供试品溶液的主斑点比较：应区分项下两种溶液等体积混合，应显示两个清晰分离的斑点：应区分三、色谱鉴别法TLC中药材七叶莲中常春藤皂苷元与齐墩果酸的定性鉴别HPLC法鉴别四、显微鉴别法灵芝孢子的电镜扫描照片灵芝破壁孢子的电镜扫描照片Electronscanningmicroscope泽泻内皮层细胞牡丹皮草酸钙簇晶茯苓菌丝山药淀粉粒山茱萸果皮表皮细胞地黄薄壁组织六味地黄丸中药材的显微特征图DNAtestingforamurderinvestigation,1987五、生物方法利用药效学和分子生物学的技术，进行药物的鉴定moldtestkitreportairtest9,moldtestkitEnvironmental六、中药的指纹图谱/特征图谱鉴别法特定条件下的全部相关成分图谱/特定条件下主要已知成分的图谱三七总皂苷1：NotoginsenosideR1;2～11:GinsenosideRg1,Re,Rf,Rb1,Rg2,Rc,Rb2,Rb3,RdandRg3一、溶液的浓度二、溶液的温度三、溶液的酸碱度四、试验时间五、方法验证：灵敏、专属、耐用第四节、鉴别试验的条件1、反应灵敏度和空白试验鉴别试验的灵敏度（sensitivity）最低检出量（minimumdetectablequantity）最低检出浓度（minimumdetectableconcentration）空白试验（blanktest）：在与供试品鉴别试验完全相同的条件下，除不加供试品外，其它试剂均同样加入而进行的试验。（二）提高反应灵敏度的方法1.加入与水互不相溶的有机溶剂提取浓集在鉴别试验中，如生成物具有颜色并颜色很浅时，可利用加入少量与水互不相溶的有机溶剂，浓集有色生成物，使其在有机溶剂中颜色变深，易于观测。2.改进观测方法如将目视观测溶液的颜色，改为可见分光光度法；将观测生成沉淀改为比浊度法等。