华北理工药物分析教案第4章-2药物的定量分析和分析方法验证

1首页课程名称：《药物分析》第6周，第讲次摘要授课题目（章、节）第四章药物的定量分析和分析方法验证第一节、定量分析方法的特点第二节定量分析样品的前处理方法第三节药品分析方法的验证【目的要求】通过本讲课程的学习，掌握容量,光谱和色谱分析法，滴定度与含量计算系统适用性试验内容与要求，样品分析的前处理方法；熟悉分析方法的验证内容，不同前处理方法的适用范围，不同方法对验证内容的要求。【难点】各种分析方法含量计算。【重点】各种分析方法含量计算，分析方法的验证内容。内容【本讲课程的引入】可供药物定量分析的方法主要有容量分析法,光谱分析法和色谱分析法，我们将围绕教学目的分别讲解学习。板书“药物的定量分析和分析方法验证”。写出章节的题目，参照讲稿列出标题；根据需要在每个标题下适当写出需解释的内容或强调重点、难点等。【本讲课程的内容】第一节定量分析方法特点（一）容量分析法1．容量法的特点简便、快速、比较准确，所用仪器普通易得，在药品检验中具有很大的使用价值。也称滴定法:将已知浓度滴定液滴加至，被测药物溶液中,至滴定终点,根据滴定液的浓度,体积和滴定度,计算含量。2．容量分析的计算问题（1）滴定度（T）的计算：在容量分析中，被测物质（B）与标准溶液（A）之间都按一定的摩尔比进行反应的，反应可表示为：aA+bBcC+dDT=MbaB(mg/ml)（2）百分含量的计算①直接滴定法：含量%=V×T/W×100%②间接滴定法：含量%=（V—VB）×T×F/W×100%（二）光谱法1．紫外-可见分光光度法（计算公式详见书149-150页）氟康唑片溶出度检查:取本品(规格:100mg),盐酸溶液(9→1000)1000ml为溶出介2质,经45分钟时,取溶液滤过;取续滤液,在261nmm波长处测定吸光度;另取氟康唑对照品适量,精密称定,加溶出介质溶解并定量稀释制成每1ml中约含0.1mg的溶液,同法测定,计算每片的溶出量2．荧光分析法（计算公式详见书151页）物质受UV或Vis照射激发后能发射出比激发光波长长的荧光;激发光停止照射,荧光随之消失;激发和发射光谱用于定性,荧光强度用于定量（三）色谱法1．HPLC法（计算公式详见书）不得改变：固定相种类,流动相组分,检测器类型可以改变：色谱柱内径,长度,载体粒度，流动相流速,混合流动相各组分的比例柱温;进样量;检测器的灵敏度仪器(RP-HPLC)(1)色谱柱:ODS最常用;粒径一般在3-10m;温度≯40℃(2)检测器:UV(DAD,PDA);Fluor,ELSD,RID,ECD,MS(3)流动相:首选甲醇-水(末端波长检测:乙腈-水),有机相≮5%;pH2-8系统适用性试验(1)色谱柱的理论板数(n)(2)色谱峰的分离度(R)(3)色谱系统的重复性(RSD%)(4)色谱峰的拖尾因子(T)测定法(1)内标法(2)外标法2．GC法（计算公式详见书）色谱柱：常用毛细管柱——熔融石英或玻璃内径一般为0.25mm,0.32mm或0.53mm;柱长5~60m，内壁或载体经交联或涂渍固定液;固定液膜厚0.1~5.0m固定液:甲基聚硅氧烷,苯基甲基聚硅氧烷,聚乙二醇第二节定量分析样品的前处理方法%100%)(RRXBADcA标示量3（一）不经有机破坏的分析方法2．经水解后测定（1）直接回流后测定法：例如三氯叔丁醇的含量测定（银量法）。（2）硫酸水解后测定法：例如硬质酸镁的含量测定（中和法）。3．经氧化还原后测定法（1）碱性还原后测定法：例如泛影酸的含量测定（银量法）。（2）酸性还原后测定法：例如碘番酸的含量测定（银量法）。（3）利用药物中可游离的金属离子的氧化性进行含量测定：例如含锑和含铁的药物，在酸性溶液中可游离出具有氧化性的Sb5+、Fe3+去氧化碘化钾，析出的碘可用硫代硫酸钠滴定（间接碘量法）。（二）经有机破坏的分析方法1．湿法破坏（1）HNO3-HClO4法：本法破坏能力强，反应比较激烈。（2）HNO3-H2SO4法：本法是用于大多数有机物质的破坏。（3）硫酸-硫酸盐法：本法常用于含砷药物的破坏。（4）其它湿法：硝酸-硫酸-高氯酸法；硫酸-过氧化氢法；硫酸-高锰酸钾法。2．干法破坏（1）钠熔法：加无水碳酸钠高温炽灼，进行有机破坏。本法适用于湿法不易破坏完全的有机药物。（2）氧瓶燃烧法：本法是将有机药物放在纯氧中燃烧，是一种破坏最完全的方法，适用于有机卤素药物的有机破坏。含待测元素的有机药物在充满氧气的燃烧瓶中充分燃烧，有机结构:彻底分解为CO2和H2O待测元素:转化为不同价态的氧化物(或无氧酸)被吸收于适当的吸收液中(多以酸根离子形式存在)(1)仪器装置：铂丝:1mm;2/3，瓶:硬质玻璃(石英玻璃)10-20mg——500ml，200mg——1000-2000ml燃烧产物与吸收液氟——HF:水氯——HCl:水-氢氧化钠4溴——Br2+HBr:水-氢氧化钠-二氧化硫碘——I2(+HIO):水-氢氧化钠(二氧化硫)硫——SO3(+SO2):水-过氧化氢磷——P2O5→H4P2O7,(HPO3)n:水-硝酸(煮沸)第三节药品质量标准分析方法验证（一）准确度(accuracy)准确度系指用该法测定的结果与真实值或参考值接近的程度，一般用回收率来表示1．含量测定方法的准确度2．杂质定量测定的准确度（二）精密度(precision)精密度系指在规定的条件下，同一均匀样品，经过多次取样测定所得结果之间的接近程度。1．精密度表示方法（1）标准差（Standarddeviation，SD）（2）相对标准差（relativestandarddeviation，RSD）容量法RSD＜0.2%(n=5)；2．重复性、中间精密度及重现性（1）重复性：在相同条件下，有一个分析人员测定所得结果的精密度称为重复性。（2）中间精密度：在同一个实验室，不同时间由不同分析人员用不同设备测定结果的精密度，称为中间精密度。（三）重现性：在不同实验室由不同分析人员测定结果的精密度，称为重现性。（三）专属性在其他成分(杂质,降解产物,辅料等)可能存在下,方法能正确测定出被测物的特性。1．鉴别反应应能与可能共存的物质或结构相似化合物区别，不含被分析的样品，以及结构相似或组分中的有关化合物，均应呈负反应。2．含量测定和杂质测定色谱法和其他方法，应附代表性图谱，亦说明专属性。图中应标明各组份的位置，色谱法中的分离度应符合要求。（四）检测限(Limtofdetection,LOD)检测限是指试样中被测物能被检测出的最低浓度或量。51．常用的方法（1）非仪器分析目视法：用已知浓度的被测物，试验出能被可靠地检测出的最低浓度或量。（2）仪器分析测定方法：①紫外分光光度法：LOD=f×3S空=C样/A样×3S空②荧光分光光度法：LOD=f×3S空=C样/（F样-F空）×3S空③HPLC法和GC法：可用已知浓度样品测出的信号与空白样品测出的信号进行比较，计算出能被可靠地检测出的最低浓度或量。一般用S/N=2或3来表示。（五）定量限（Limitofquantitation,LOQ）定量限是指样品中被测物能被定量测定的最低量，其测定结果应具有一定准确度和精密度。（六）线性线性是指在设计的范围内，测试结果与试样中被测物浓度直接呈正比关系的程度。如UV法：要求浓度点为n=5；吸收度A一般在0.3～0.7；相关系数r=0.999。如HPLC法：要求浓度点为n=5～7；相关系数r=0.999。(七)范围范围是指能达到一定精密度、准确度和线性、测试方法适用的高低浓度或量的区间。（八）耐用性耐用性是指在测定条件有小的变动时，测定结果不受影响的承受程度，为常规检验提供依据。【本讲课程的小结】今天我们主要讲了容量,光谱和色谱分析法，滴定度与含量计算系统适用性试验内容与要求，样品分析的前处理方法；分析方法的验证内容。希望同学们认真学习。6【本讲课程的作业】1．相对标准差表示的应是A．准确度B．回收率C．精密度D．纯净度E．限度2．药物分析方法的效能指标有A．检测限B．耐用性C．准确度D．专属性E．代表性3．对药物中杂质进行检查时，要求所用的检查方法应具有A．耐用性B．专属性C．检测限D．准确度E．线性与范围