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1首页课程名称：《药物分析》第13周，第24讲次摘要授课题目（章、节）第十五章甾体激素类药物的分析第一节、基本结构与分类第二节、鉴别第三节、特殊杂质检查第四节、含量测定【目的要求】通过本讲课程的学习，掌握甾体激素类药物的结构特点与分析方法之间的关系。掌握甾体激素类鉴别、含量测定原理与方法。熟悉甾体激素类药物的有关物质与检查方法【重点】甾体激素类鉴别、含量测定原理与方法。【难点】甾体激素类鉴别、含量测定原理与方法。内容【本讲课程的引入】甾体激素类steroidhormones是一类具有环戊烷并多氢菲母核的激素类药物。目前临床使用的主要为人工合成品。本章将围绕结构特点、理化性质与分析方法之间的关系重点讲解甾体激素类鉴别、检查、含量测定原理与方法。板书“甾体激素类药物的分析”。【本讲课程的内容】一、基本结构结构特点1．基本结构CC2120ABCD2．典型药物的结构甾体激素类药物主要包括：肾上腺皮质激素性激素：雄性激素及蛋白同化激素孕激素雌激素2OHOCOCH2OHHOOCOCH2CHC6H52皮质酮（肾上腺皮质激素）苯丙酸诺龙（蛋白同化激素）OCOHCH3HOCCHOH黄体酮（孕激素）炔雌醇（雌激素）3．结构特点：甾体母核甲酮基Δ4-3-酮有机卤素α-醇-酮基酚羟基酮基酯基二、鉴别方法（一）化学鉴别法1．与强酸的呈色反应强酸：硫酸、磷酸、高氯酸、盐酸。药物：醋酸可的松、氢化可的松、泼尼松、醋酸泼尼松、泼尼松龙、醋酸泼尼松龙、炔雌醇、炔雌醚、地塞米松磷酸钠、苯甲酸雌二醇、己酸羟孕酮等。2．官能团的呈色反应C17-α-醇-酮基四氮唑盐、斐林试剂C3-酮基、C20-酮基2，4-二硝基苯肼异烟肼、硫酸苯肼（二）制备衍生物测定其熔点（三）紫外分光光度法结构依据：Δ4-3-酮、苯环、其他共轭结构3（四）红外分光光度法（五）薄层色谱法（六）HPLC法：主要用于甾体激素类药物制剂的鉴别（如：醋酸曲安奈德软膏、醋酸氟轻松软膏）。方法：对照品法。一般都规定在含量测定项下的色谱图中，供试品峰的保留时间应与对照品的一致。三、特殊杂质检查其他甾体、硒、有机溶剂残留量、游离磷酸盐（一）有关物质的检查检查意义：其他甾体与甾体激素药物结构相似，也有一定的药理作用而又互不相同。(二）硒的检查硒来源合成中用二氧化硒(SeO2)脱氢。检查方法二氨基萘比色法（三）有机溶剂残留量的检查采用HPLC检查甲醇、丙酮（四）游离磷酸盐的检查采用钼蓝比色法四、含量测定本类药物可以采用比色法、紫外分光光度法、荧光法、GC法、HPLC法等。（一）HPLC法测定对象：甾体激素类药物的原料和制剂。示例：黄体酮的含量测定色谱条件：固定相ODS，流动相甲醇-水（65:35），检测波长254nm，内标物己烯雌酚系统适用性试验：n1000，R符合规定。测定样品：黄体酮原料、注射液。（二）紫外分光光度法具有Δ4-3-酮的皮质激素、雄性激素、孕激素、口服避孕药在240nm附近有最大吸收；具有苯环的雌激素在280nm附近有最大吸收。示例：炔孕酮的含量测定醋酸地塞米松片的含量测定：标示量百分含量=A×100×W×103E1cm1%×20×W×标示量×100%4(三)比色法1.异烟肼比色法：（1）基本原理：C3-酮基及某些其他位置上的酮基都能在酸性条件下与羰基试剂异烟肼缩合，形成黄色的异烟腙，在一定波长下具有最大吸收。（2）讨论溶剂：无水乙醇、无水甲醇酸的种类和浓度以及异烟肼的浓度：摩尔比盐酸:异烟肼2:1，盐酸浓度0.0074mol/L，异烟肼浓度0.00365mol/L水分、温度、光线、氧：吸收度随溶剂中含水量的增高而减低温度升高，反应加速在不使溶剂挥发和吸收水分的情况下，光和氧不影响反应。2.四氮唑比色法（1）基本原理：C17-α-醇-酮基具有还原性，在强碱性溶液中能将四氮唑盐定量地还原为有色formazan，在一定波长处进行比色测定。（2）四氮唑盐：红四氮唑（2，3，5-三苯基氯化四氮唑）蓝四氮唑（3，3‘-二甲氧苯基-双-4，4‘-（3，5-二苯基）氯化四氮唑）（3）影响因素：基团影响溶剂和水分影响碱的种类和加入顺序的影响空气中氧及光线的影响温度与时间的影响3.Kober反应比色法（1）Kober反应:雌激素与硫酸-乙醇共热呈色,用水或稀硫酸稀释后重新加热发生颜色改变,并在515nm附近有最大吸收。五、体内甾体激素类药物分析例竞技运动员体内违禁甾体激素药物的分析见教材5【本讲课程的小结】今天我们主要讲了甾体激素类药物的典型结构特点、理化性质和鉴别含量测定基本原理与方法。希望同学们重点学习。【本讲课程的作业】1.醋酸地塞米松的鉴别方法是A.三氯化铁反应B.水解反应C.柯柏反应D.与碱性酒石酸铜试液反应2.丙酸睾酮《中国药典》规定的含量测定方法为A.非水溶液滴定法B.旋光法C.HPLC法D.紫外分光法3.用HPLC法测定的药物有A.醋酸地塞米松B.丙酸睾酮C.炔雌醇D.硫酸阿托品E.黄体酮4.可用紫外分光光度法测定含量的药物有A.炔雌醚B.醋酸地塞米松片C.醋酸泼尼松龙片D.氢化可的松片E.维生素B1注射剂