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第五章水的卫生细菌学——与饮用水的健康卫生有关的细菌学知识主要内容5-1水中细菌及其分布5-2水中的病原细菌5-3大肠杆菌和生活饮用水的细菌标准5-4水的卫生细菌学检验5-5水中微生物的控制方法5-6水中的病毒及其检验饮用水中可能存在哪些病原菌？如何从细菌学的角度判断饮用水是卫生的？——细菌学标准如何进行试验？采取什么措施可以保证饮用水是卫生健康的？第一节天然饮水中的细菌及其分布包括雨雪水、河流湖泊水、地下水、海水提问：雨雪中的细菌数量种类与什么有关？直接与空气的洁净程度间接由地面的洁净程度•提问：河流、湖泊中的细菌数量种类与什么有关？受纳污水的种类及数量环境影响因子例如，受到医院污水、垃圾污染的，病原菌数量将会很大，受到农业土壤污染的藻类数量将会猛增。由于细菌不喜欢阳光、好附着在固体上，因而水底和岸边的细菌数量高于水面和河、湖中央的细菌。提问：地下水饮用时的卫生程度与什么有关？深度及地表水污染程度由于土壤层层过滤，一般细菌很少提问：海水中有能引起人体疾病的细菌（病原菌）吗？为什么？没有；海水中含盐量很高（一般3.2~4%）•目前大多数城市集中供水水源为江河湖泊，难免受到各种污染包括病原污染，病原菌的监测与控制责任重大。第二节水中的病原细菌水中的细菌只有很少的一部分是病原菌（或称致病菌）其中只有更少的病原菌能经食道进入肠道引起疾病，为什么？口中溶菌酶；正常胃酸pH3.2。此类水中病原菌若经水传播，在消化道滋生导致疾病—肠道传染病一、伤寒沙门氏菌病症：伤寒或副伤寒。乙级传染病（不用隔离）表现：持续发烧，牵涉到淋巴组织，脾脏肿大，躯干上出现红斑，胃肠壁溃疡产生腹泻。14世纪、15世纪、16世纪，每一次伤寒都随战争而爆发，病死率达40％到50％，20世纪初，英国医生赖特研制出伤寒疫苗，伤寒从此销声匿迹。伤寒沙门氏菌（1）生理生态种类：伤寒沙门氏菌、副伤寒沙门氏菌和乙型副伤寒沙门氏菌。大小：0．5~0．8×1~3．5um特征：周生鞭毛，革兰氏阴性，无芽孢和荚膜在地面普通水中可生存1～3周，井水中可生存约１周，在粪坑及污水中可生存1～2个月。（2）致病机理通过内毒素致病(内毒素是其细胞壁的成分，化学成分为脂多糖，当细菌死亡分裂时会释放到环境中。)必须由口进入人体伤寒杆菌小肠淋巴结上繁殖进入血液和各种脏器细菌死亡时，内毒素进入血液循环破化白血球，使白血球释放出热原性物质进入大脑热原性物质破坏大脑的体温调节机制持续发热、脏器炎症、腹泻昔日治疗伤寒特效药氯霉素，如今几乎对伤寒无效，预防为主二、痢疾杆菌——细菌性痢疾(与阿米巴痢疾不同)（乙类传染病），症状为急性腹泻，通常大便中有血及粘液，某些病例中有发烧。（1）生理生态种类：痢疾杆菌(痢疾志贺氏菌)、副痢疾杆菌大小革兰氏染色芽孢、荚膜、鞭毛症状痢疾杆菌0．4~0．6×1．0~3．0um阴性无重症副痢疾杆菌0．5×1．0~1．5um阴性无较轻，通常又称肠炎•37℃能耐20天，加热到60℃能耐10min，对1％的石炭酸，可抵抗半小时。•传播方式：食物和饮用水内毒素损害了人体肠道细胞，引起肠道痉挛、腹泻等症状。“极易耐药，预防为主”（2）致病机理•病症：霍乱（“最可怕的瘟疫”）•甲级传染病（法定隔离）•重—呕吐、“米汤样”大便、腹疼和昏迷等，严重的常常在症状出现后12h内死亡，死亡率极高。•轻—只造成腹泻。三、霍乱弧菌Vibriocholeraebacteriainfectbetween100,000and300,000peopleeachyear.（1）生理生态形态：微弯曲杆状大小：0.3~0.6×1.0~5.0um特征：一根较粗的鞭毛传播方式：水及食物，与病人或带菌动物接触革兰氏染色则为阴性红色（2）致病机理外毒素霍乱弧菌小肠中大量繁殖破坏肠细胞膜肠细胞大量脱水、电解质失衡腹泻或休克、死亡由口进入人体释放出外毒素•霍乱18世纪传入，流行百次，1952年绝迹。731部队—鼠疫杆菌、霍乱弧菌、伤寒杆菌、炭疽杆菌等等——生化武器•伤寒沙门氏菌、痢疾杆菌、霍乱弧菌•这三种致病菌是水中最为常见的致病菌，都属于肠道传染病菌，其它病原菌如变形杆菌、肠炎耶尔氏菌、沙雷氏菌引起的症状较轻通常为肠炎。肠道细菌传染病主要由病人带菌的粪便污染水体而传播。真菌一般通过接触或食物传播，不通过水传播四、寄生虫（了解）寄生虫——引起疾病的原生动物(原虫）和后生动物（蠕虫）寄生虫种类繁多传播方式：虫卵通过病人粪便污染水体（一）原虫引起人体疾病的原生动物又叫原虫，通过饮水引起疾病的原虫见下表。类别名称病症机理肉足纲变形虫赤痢阿米巴阿米巴痢疾寄生于肠道中，破坏肠细胞粘膜鞭毛纲贾第鞭毛虫腹泻、营养不良吸附与肠道外壁，妨碍肠道中的营养物吸收纤毛纲袋形虫小袋虫痢疾寄生于肠道中，破坏肠细胞粘膜孢子纲孢子虫腹泻、营养不良吸附与肠道外壁，妨碍肠道中的营养物吸收兰氏贾第鞭毛虫兰氏贾第鞭毛虫(Giardialamblia)是一种常寄生于人体十二指肠和腔肠的多鞭毛虫，属六鞭虫科(Hexamitiade)、贾第鞭毛虫属(Giardia)。人感染贾第鞭毛虫后以腹泻为主要症状，也有部分患者排包囊而无症状。包囊在环境可存活较长时间，水中可存活两个月以上。本病主要通过粪便排出的包囊污染饮水、食物及食具而经口感染，也可经粪-手-口途径感染。近20年来此病在欧美许多国家曾多次暴发流行，兰氏贾第鞭毛虫在我国分布广泛，所致疾病也不断有报道。隐孢子虫隐孢子虫是一种肠道原虫。患隐孢子虫病的动物或人的粪便如果污染了饮水或饮水水源，则可导致隐孢子虫病的暴发流行。1993年美国威斯康星州Milwaukee城因自来水厂处理不当而暴发403000余人感染的隐孢子虫病，其中4000余人住院，112人死亡，是美国有史以来最大的一次水传疾病。隐孢子虫卵囊能抵抗多种消毒剂，1mg／L臭氧处理5min或1．3mg／L二氧化氯处理lh后，可使90％以上的卵囊丧失活性，而80mg／L的氯和80mg／L的一氯胺要作用近90min，才能使90％的卵囊失活。（二）蠕虫引起人体疾病的后生动物又叫蠕虫，通过饮水引起疾病的蠕虫见下表名称寄生部位虫名病症水中传染方式肠道姜片虫消化不良血管血吸虫腹泻、高烧吸虫类肝脏的胆道肝吸虫肝硬化肠道消化不良绦虫类脑猪肉绦虫牛肉绦虫癫痫线虫类肠道蛔虫营养不良、急性阑尾炎、肠梗阻病人粪便中虫卵水中病原微生物的危害发展中国家每年有1220万五岁以下的儿童因儿童病死亡，超过300万人死于腹泻，其中多数是由于饮用了受微生物污染的水引起的。世界卫生组织(WHO)资料显示，水生性疾病的威胁在第三世界发展中国家仍然存在，每天可断送25000人的生命，这种微生物污染源包括多种有害的细菌、病毒、寄生虫，可造成伤寒、霍乱、肝炎、小儿麻痹症、痢疾、感冒等疾病。饮用水生物稳定性的研究出厂水是安全的，到达用户的水可能不安全了细菌在管网中再生长如何控制细菌再生长？加氯消毒——消毒副产物（致癌）控制有机物（碳源）、营养物（磷）、使用新型管材等新型消毒方法（紫外线、二氧化氯）防治饮用水传染病的关键是严防水源被粪便污染。如何知道饮用水是否受到粪便污染呢？检测肠道病原菌数量第三节大肠菌群和生活饮用水标准通常不直接检测——水中存在病原菌的可能性很小，其他各种细菌的种类却很多，要排除一切细菌而单独直接检出某种病原菌来，在培养分离技术上较为复杂，需较多的人力和较长的时间。间接病原菌测定：测定水中是否有肠道正常细菌的存在——若检出，则表明水被粪便所污染，则有肠道病原菌的可能。•通常检测大肠菌群（作为肠道正常菌的代表）的存在及数量。一、大肠菌群作为卫生指标的意义选择代表肠道病原菌卫生指标的原则有:该种细菌生理特性与肠道病原菌类似，因而它们在外界生存时间一致；该种细菌在粪便中数量较多，容易检出；检验技术简单。肠道正常细菌有三类：大肠菌群、肠球菌、产气荚膜菌。大肠菌群与伤寒杆菌、副伤寒杆菌、痢疾杆菌等病原菌生理特性相似，基本符合以上三个原则，所以大肠菌群可以作为水的卫生细菌学指标。大肠菌群二、大肠菌群的形态和生理特性生存环境碳源特征培养温度特征菌落特征大肠杆菌大肠埃希氏杆菌产气杆菌枸椽酸盐杆菌副大肠杆菌大肠菌群大肠埃希氏杆菌——其他大肠杆菌相似好氧或兼性菌G-，无芽孢大小0.5～0.8µm×2～3µm，两端钝圆的杆菌生长温度10～46℃，适宜温度37℃，适宜pH值为7能分解葡萄糖、甘露醇、乳糖等多种碳水化合物能产酸产气，所产生的二氧化碳和氢气比之为1：1。在品红亚硫酸钠培养基上所形成的菌落特征大肠埃希氏杆菌：紫红色，金属光泽，直径2～3mm枸椽酸盐杆菌：紫红色或深红色产气杆菌：淡红色中间较深，直径4～6mm副大肠杆菌：无色透明三、生活饮用水细菌卫生标准国家标准——《生活饮用水卫生标准》GB5479-85卫生部——《生活饮用水卫生规范》-2001建设部——《城市供水水质标准》-2005国家标准——《生活饮用水卫生标准》GB5479-2006国家标准——《生活饮用水卫生标准GB5479-2006》组成标准中对生活饮用水的水质要求共106项（85年标准仅35项），包括:水质常规指标38项、消毒剂常规指标4项及水质非常规指标64项。微生物指标：总大肠菌群、菌落总数等毒理指标：砷、镉、铬、铅、三氯甲烷等感官性状与一般化学指标：浊度、pH、铝等放射性指标国家标准——《生活饮用水卫生标准GB5479-2006》适用范围国家标准——《生活饮用水卫生标准GB5479-2006》适用范围国家标准——《生活饮用水卫生标准》GB5479-2006菌落形成单位Colonyformingunit最可能数MaximumpossibleNumber国家标准——《生活饮用水卫生标准》GB5749-2006细菌总数100(CFU/mL)总大肠菌群每100mL水样中不得检出耐热（粪）大肠菌群每100mL水样中不得检出大肠埃希氏菌每100mL水样中不得检出游离余氯在与水接触30分钟后应不低于0.3mg／L，管网末梢水不应低于0.05mg／L(适用于加氯消毒)四个标准的比较项目TBC（CFU/mL）总大肠菌群粪大肠菌群GB5749-2006100每100mL水样中不得检出每100mL水样中不得检出城、乡供生活饮用的集中式给水和分散式给水GB5749-851003个/L无城、乡供生活饮用的集中式给水和分散式给水卫-2001100每100mL水样中不得检出每100mL水样中不得检出城市集中式给水建-200580第四节水的卫生细菌学检验细菌总数（TBC）的测定总大肠菌群粪大肠菌群细菌总数是指1mL水样在营养琼脂培养基中，于37℃经24小时培养后，所生长的细菌菌落的总数。它是判断饮用水、水源水、地表水等污染程度的标志。一、细菌总数（TBC）的测定制作培养基平板定量接种水样37℃下培养24h计数菌落测定过程水样的采集采集细菌学检验水样，必须按照无菌操作进行；从采样到检验不超过2h；10℃以下冷藏不超过6h。采样器皿必须经过灭菌；自来水采样应该用酒精灼烧水龙头/酒精消毒，放水3min后取样；江河湖库水样沉入水下10-15cm，瓶口向水流上游取样。用作细菌检验的器皿、培养基等均需按方法要求进行灭菌，以保证所检出的细菌皆属被测水样所有。制备营养琼脂培养基。营养琼脂培养基成分为：蛋白胨10g，牛肉浸膏3g，氯化钠5g，琼脂15g，蒸馏水1000mL。测定过程以无菌操作方法用1ml灭菌吸管吸取混合均匀的水样(或稀释水样)注入灭菌平皿中，倾注约15ml已融化并冷却到45℃左右的营养琼脂培养基，并旋摇平皿使其混合均匀。每个水样应做两份（平行样），还应另用一个平皿只倾注营养琼脂培养基作空白对照。待琼脂培养基冷却凝固后，翻转平皿，置于37℃恒温箱内培养24小时，然后进行菌落计数。用肉眼或借助放大镜观察，对平皿中的菌落进行计数，求出1mL水样中的平均