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实验一显微镜的使用及微生物形态的观察一、目的1．学习普通光学显微镜的使用方法（本实验学习低倍镜和高倍镜的使用）。2．通过对教学生物标本玻片或曝气池活性污泥的观察，认识微生物的形态。二、实验器材1．教学生物标本玻片或曝气池活性污泥。2．显微镜、目测微尺、物测微尺、载玻片、盖玻片等。三、实验步骤(一)显微镜的结构和各部分的作用图8—1所示，是微生物检验常用的显微镜，其构造分机械和光学两部分。机械部分主要包括：1．镜筒镜筒长度一般是160mm。它的上端装有接目镜，下端有回转板。回转板上一般装有3个接物镜。2．载物台载物台是放置标本的平台，中央有一圆孔。使下面的光线可以通过。两旁有弹簧夹，用以固定标本或载玻片。有的载物台上装有自动推物器。3．调节器镜筒内旁有两个螺旋，大的叫粗调节器，小的叫细调节器，用以升降镜筒。调节接物镜与所需观察的物体之间的距离。光学部分主要包括：1．接目镜一般使用的显微镜具有2—3个接目镜，其上常刻有“5×”、“l0×”或“15×”等数字及符号，意即使用时可放大5倍、l0倍或15倍。观察微生物时常用放大l0倍或15倍的接目镜。2．接物镜接物镜装在回转板上．可分低倍镜、高倍镜和油镜3种，其相应的放大倍数常是10、40(或45)l00(或90)。通常显微镜的放大倍数等于接物镜与接目镜放大倍数的乘积。例如，用放大40倍的接物镜(高倍镜)与放大10倍的接目镜时所得的物象的放大倍数为40×10＝400，如果用放大15倍的接目镜则放大倍数为40×15＝600。接目镜装在镜筒上端，在使用过程中并不经常变动，所以通常所谓的低倍镜、高倍镜或油镜的观察主要是指使用不同的接物镜而言的。油镜的放大倍数最大(90或100)。放大倍数这样大的镜头，焦距就很短，直径就很小，所以自标本玻片透过的光线，因介质密度(从玻片至空气，再进入油镜)不同，有些光线因折射或全反射，就不能进入境头，致使射入的光线较少，物象显现不清。所以为了不使通过的光线有所损失，须在油镜与玻片中间加入和玻璃折射率（n=1.52）相仿的镜油(香柏油，n=1.515)。因为这种接物镜使用时须加镜油，所以我们称它为油镜(图8—2)。一般的低倍镜或高倍镜使用时不加油，所以也称干镜。使用低倍镜和高倍镜时，一般作活体的观察，不进行染色。在观察细小动物时，低倍镜主要用来区别动物的种类和看出它们的活动状态，而高倍镜则可看清动物的结构待征，低倍镜容易看到标本的全貌，油镜在大多数情况下是用来观察染色的涂片。3．集光器集光器在载物台的下面，用来集合由反光镜反射来的光线。集光器可以上下调整，中央装有光圈，用以调节光线的强弱。当光线过强时，应缩小光圈或把集光器向下移动。4．反光镜反光镜装在显微镜的最下方至集光器。(二)显微镜使用和保护的方法1．低倍镜的使用法(1)置显微镜于固定的桌几上，窗外不宜有障碍视线之物。(2)拨动回转板，把低倍镜移到镜筒正下方，和镜筒连接而对直。(3)拨动反光镜向着光线的来源处。同时用眼对准接目镜(选用适当放大倍数的接目镜)仔细观察，使视野完全成为白色，这是光线已经通到镜里的表示。(4)把载玻片放到载物台上，要观察的标本放到圆孔的正中央。(5)将粗调节器向下旋转，同时眼睛注视接物镜，以防接物镜和载玻片相碰。当接目镜的尖端距载玻片约0.5cm时停止旋转。(6)把粗调节器向上旋转，同时左眼向接目镜里观察。如标本显出，但不十分清楚，可用细调节器调节，至标本完全清晰为止。(7)假如因旋转粗调节器太快，致使超过焦点，标本不能出现时，不应在眼睛注视接目镜的同时向下旋转粗调节器，必须从第(5)步做起，以防因没有把握的旋转，使接目镜与载玻片碰触。(8)在观察时，最好两眼都能同时睁开一面看一面画出所看到的物象。2．高倍镜的使用法(1)使用高倍镜以前，先用低倍镜检查，把要观察的标本放到视野正中。(2)拨动回转板使高倍和低倍两镜头互相对换。当高倍镜移动到载玻片时，往往镜头十分靠近载玻片。这时必须注意是否因高倍镜靠近的缘故而使载玻片也随着移动。如果载玻片有移动的现象，则应立刻停止推动回转板，把高倍镜退回原处，再按照使用低倍镜的方法，校正标本的位置，然后旋动调节器，使镜筒稍微向上，再对换高倍镜头。(3)当高倍镜已被推到镜筒下面时，向镜内观察所显现的标本，往往不很清楚，这时可旋转细调节器，上下移动，但不要过分移动。3．油镜的使用法(此节在实验三中学习)(1)如用高倍镜放大，倍数还不够，则须采用油镜。用油镜以前，先用高倍镜检查，把要观察的标本放到视野正中。(2)用油镜时，在载玻片上加一滴镜油，然后拨动回转板对换高倍镜和油镜，使油镜头尖端和油接触，而后向接目镜观察。假如不清晰，可稍微转动调节器，但切记不要用粗调节器。(3)用过油镜后，必须用擦镜纸或软绸将载玻片和油镜所粘着的油拭净。必要时，可略蘸二甲苯少许，揩拭镜头，最后用擦镜纸或软绸擦干。4．显微镜的保护法(1)显微镜应放置在干燥的地方，使用时须避免强烈的日光照射。(2)接物镜或接目镜不清洁时，应当用擦镜纸或软绸揩擦。(3)用完显微镜后，应当立即放到镜匣中。(三)显微镜观察(1)低倍镜观察1)在选定的接目镜下，利用低倍镜，确定目测微尺一格的长度(单位以µm计)。2)观察教学生物标本玻片或所制备的微生物标本玻片，画出所见的形态草图。3)记下观察所用接目镜和接物镜的放大倍数和算出显微镜的放大倍数。(2)高倍镜观察1)改用高倍镜观察，画出微生物的形态草图，并与用低倍镜所看到的比较，注意其不同点。2)记下显微镜的放大倍数。四、记录序号玻片名称放大倍数形态草图五、思考题1．使用显微镜时，哪些地方须特别注意?2．使用低倍镑时，显微镜的放大倍数一般最大可达多少?使用高倍镜时显微镜的放大倍数是怎样呢?在什么时候才需要使用油镜?