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浙江大学网络教育精品资源共享课1《药物分析》课程学习重点难点中国药典（见第1章）基本内容：《中国药典》由一部、二部、三部及其增补本组成，分别包括“凡例、正文、附录和索引”四部分基本内容。凡例：凡例是为正确使用《中国药典》进行药品质量检定的基本原则，是对《中国药典》正文、附录及与质量检定有关的共性问题的统一规定。正文：正文为药品质量标准，内容有：品名、结构式、分子式、含量限度、性状、鉴别、检查、含量测定、类别、规格、贮藏等项目。附录：附录主要收载制剂通则、通用检测方法和指导原则。索引：《中国药典》索引：一部有中文、汉语拼音、拉丁名、拉丁学名四种索引；二部、三部各有中文、英文两种索引。药品分析方法的验证（见第1章）方法验证内容有：准确度、精密度、专属性、检测限、定量限、线性、范围和耐用性。准确度：指用该方法测定的结果与真实值或参比值接近的程度，一般用回收率表示。精密度：指在规定的测试条件下，同一个均匀供试品，经多次取样测定所得结果之间的接近程度，一般用标准偏差（SD）或相对标准偏差（RSD）表示。有重复性、中间精密度和重现性三浙江大学网络教育精品资源共享课2个层次。专属性：指在其他成分（如杂质）可能存在下，采用的方法能准确测定出被测物的特性。检测限：指在实验条件下，试样中被测物能被检出的最低量，无需准确定量。一般以信噪比2:1或3:1时的相应浓度或注入仪器的量确定检测限。定量限：指在实验条件下，试样中被测物能被定量测定的最低量，其测定结果必须具有一定的准确度和精密度。一般以信噪比10:1时的相应浓度或注入仪器的量确定定量限。线性：指在设定的被测物浓度（或量）范围内，测试结果（响应值）与试样中被测物浓度或量呈正比关系的程度。用最小二乘法进行线性回归，以回归方程（y=bx+a）、相关系数（r）表示。范围：指能达到一定精密度、准确度和线性，测试方法适用的高低限浓度或量的区间。耐用性：指在测定条件有小的变动时，对同一样品测定结果不受影响的承受程度。典型药物的鉴别、区别试验（见第2章）对于药物的鉴别试验，应依据药物的结构特征-理化性质-分析方法这条主线开展学习。典型的鉴别试验有重氮化-偶合反应、三氯化铁反应、丙二酰脲反应等。重氮化-偶合反应这是具有芳伯氨基或潜在芳伯氨基的药物，如芳胺类、磺胺类、苯并二氮杂卓类药物的常用鉴别试验，主要试剂为亚硝酸钠、盐酸和碱性β-萘酚，最终产物为橙黄至猩红色沉淀的偶氮染料。（1）鉴别反应的原理：游离芳伯氨基在盐酸性溶液中与亚硝酸钠作用，生成重氮盐，进而与碱性β-萘酚作用，生成橙黄至猩红色沉淀。（2）注意：具有游离芳伯氨基、潜在芳伯氨基（一般为酰胺键，需水解后才有反应）、浙江大学网络教育精品资源共享课3无芳伯氨基药物之间的区别。直接能反应的药物如：苯佐卡因、盐酸普鲁卡因、盐酸普鲁卡因胺、磺胺异噁唑、磺胺嘧啶、磺胺甲噁唑等。水解后才有反应的药物如：对乙酰氨基酚、醋氨苯砜、氯氮卓、奥沙西泮等。没有重氮化-偶合反应但结构类似的药物如：盐酸丁卡因，结构中含芳仲胺，在酸性溶液中可与亚硝酸钠反应，生成N-亚硝基化合物的乳白色沉淀，可与具有芳伯氨基的同类药物区别。三氯化铁反应具有酚羟基结构的药物，可与三氯化铁试液反应生成有色物质，该类鉴别反应常用于水杨酸类、苯乙胺类、四环素类等药物的鉴别。苯甲酸类药物也可与三氯化铁反应，但产生有色沉淀，可与之区别。（1）水杨酸及其酯类药物的鉴别：在中性或弱酸性条件下，药物与三氯化铁试液反应，生成红色（中性）或紫色（弱酸性）配位化合物。注意结构区别：具有游离酚羟基结构的药物，如水杨酸、二氟尼柳、对氨基水杨酸钠、双水杨酯等均可与三氯化铁试液直接反应，呈显紫色。而酚羟基被酯化的药物，如阿司匹林、贝诺酯等，则需在适当条件下水解后才能与三氯化铁试液反应，呈显紫色。（2）苯乙胺类药物的鉴别：肾上腺素、盐酸异丙肾上腺素、重酒石酸去甲肾上腺素等苯乙胺类药物的分子结构中含有1个或2个酚羟基，可与Fe3+离子配位显色（紫色或紫红色）。（3）四环素类抗生素的鉴别：本类抗生素分子结构中具酚羟基，遇三氯化铁试液即呈色。（4）苯甲酸及其盐类药物的鉴别：在中性或碱性溶液中，苯甲酸钠与三氯化铁试液生成赭色沉淀；丙磺舒生成米黄色沉淀。丙二酰脲类反应此为巴比妥类药物的一般鉴别试验，银盐法和铜盐法。（1）银盐法：在碳酸钠溶液中，巴比妥类药物与过量硝酸银溶液反应，生成白色二银盐沉淀。（2）铜盐法：在吡啶溶液中，巴比妥类药物与铜吡啶试液作用，形成紫色或紫色沉淀，含硫巴比妥（如硫喷妥）呈绿色，可与之区别。硫色素反应浙江大学网络教育精品资源共享课4此为维生素B1的专属反应。在碱性溶液中，维生素B1（1）TLC法检查药物中杂质时，有以下几种方法：杂质对照品法；供试品溶液自身被铁氰化钾氧化生成硫色素，溶于正丁醇（或异丁醇等）中，显蓝色荧光。紫外光谱法鉴别药物常用的测定方法有：①测定最大吸收波长，或同时测定最小吸收波长；②规定一定浓度的供试液在最大吸收波长处的吸光度；③规定吸收波长和吸收系数；④规定吸收波长和吸光度比值；⑤经化学处理后，测定其反应产物的吸收光谱特性；以上方法可结合起来使用，以增加方法的专属性。杂质检查（见第3章）一般杂质检查指药物中氯化物、硫酸盐、铁盐、重金属、砷盐、水分、炽灼残渣等项目的检查。重点掌握氯化物、重金属、砷盐、炽灼残渣等杂质检查原理、反应条件、适宜浓度、限量计算等。中国药典收载的重金属检查方法：第一法为硫代乙酰胺显色法(pH3.5)；第二法为三酸处理后硫代乙酰胺显色法(pH3.5)，第三法为硫化钠试液显色法（碱性溶液）。中国药典收载的砷盐检查方法：古蔡氏法和Ag(DDC)法。掌握检查中所加试剂碘化钾、酸性氯化亚锡、醋酸铅棉花、溴化汞试纸等作用，两种方法的异同点。炽灼残渣的炽灼温度：一般700～800℃，残渣留作重金属检查时，温度控制在500～600℃。恒重操作：炽灼至恒重的第二次及以后各次称重均应在规定条件下继续炽灼30min后进行，恒重是指在规定条件下连续两次炽灼后称重的差异在0.3mg以下的重量。残留溶剂测定方法：中国药典规定GC法，定量方法（外标法、内标法、标准加入法）。特殊杂质检查通常采用色谱法进行检查，如TLC法和HPLC法，少数采用光谱法检查。浙江大学网络教育精品资源共享课5稀释对照法；杂质对照品法与供试品溶液自身稀释对照法并用；对照药物法；以试验条件下显色剂对杂质的检出限来控制杂质限量。（2）HPLC法检查药物中杂质时，有以下几种方法：内标法；外标法；加校正因子的主成分自身对照法；不加校正因子的主成分自身对照法；面积归一化法（3）紫外-可见光谱法：利用药物与杂质的紫外吸收特性差异进行检查。如肾上腺素中肾上腺酮的检查，酮体在310nm有最大吸收，而药物在此波长处无吸收，规定一定浓度供试溶液的吸光度不得超过某一值来控制酮体的限量。（4）红外光谱法：主要用于检查药物种低效或无效晶型杂质。如甲苯咪唑中无效A晶型的检查。（5）原子吸收光谱法：主要用于药物中金属杂质的检查。如甲芬那酸中铜的检查、维生素C中铜的检查。计算题类型与计算原理药物分析中的计算题主要有两类：杂质限量计算和药物含量计算。杂质限量计算（见第三章）基本公式如下：杂质限量=杂质最大允许量样品供试量×100%（1）式中杂质最大允许量由以下几种方法得到：①在一般杂质检查中，采用杂质对照品对照法进行检查时，用杂质对照溶液的浓度（C）与体积（V）的乘积来表示，杂质对照溶液的浓度一般是固定的（按药典规定）。②在特殊杂质检查中，常用色谱法检查，如薄层层析、高效液相色谱，杂质对照液浓度根据样品不同而不同，杂质的最大允许量由杂质对照液浓度与进样（或点样）体积的乘积来表示，但若杂质对照液和样品供试液的点样（或进样）体积一致，则体积就不用考虑，直接用对照液浓度表示。③在光谱分析中，一般需要通过计算获得杂质最大允许量。百分吸收系数法：由方法规定的样品溶液在某一波长处的吸光度值（A）除以杂质纯品在该波长处的百分吸收系数（E）值，而获得供试溶液中杂质的浓度（C=A/E）。杂质对照品对照法：根据杂质对照溶液浓度（C对）与其吸光度值（A对），以及方法规定的样品溶液在某一波长处的吸光度限量值（A样），采用单点对照法计算供试溶液中杂质的浙江大学网络教育精品资源共享课6浓度（C样=A样/A对×C对制剂通常要求计算相当于标示量的百分含量，由以上（2）、（3）、（4）式计算得到的是）。注意：按公式（1）计算时，分子分母单位应一致，常需换算（1g=1000mg=1000000µg）。药物含量计算分为原料药含量计算和制剂含量计算（见第4章），根据分析方法的不同，分为容量法（见第5章）、光谱法（见第6章）、色谱法（见第7章）三种。基本公式如下：（1）原料药含量计算：容量法：药物含量%=滴定液体积V×滴定度T×滴定液浓度校正因子F样品取样量W×100%（2）光谱法：有两种方法计算样品溶液浓度:①对照溶液对照法：样品液浓度C=样品液吸光度A×对照液浓度C对照液吸光度A此式中，样品液浓度C的单位与对照液浓度单位一致。②百分吸收系数E值法：样品液浓度C（%）=样品液吸光度AE此式中，样品液浓度C为百分浓度，单位为%（g/100ml），即每100ml中含多少克。药物含量%=样品液浓度C×样品稀释倍数F样品取样量W×100%（3）注意：上式中，分子、分母单位可能不同，须将两者换算成相同单位。色谱法：有内标法和外标法计算之分。①外标法：样品液浓度C=样品液峰面积A×对照液浓度C对照液峰面积A②内标法：样品液浓度C=样品液峰面积A×内标溶液浓度C内标溶液峰面积A×校正因子F（校正因子F=内标溶液峰面积×样品对照溶液浓度样品对照溶液峰面积×内标溶液浓度）药物含量%=样品液浓度C×样品稀释倍数F样品取样量W×100%（4）（2）制剂含量计算：以上（2）、（3）、（4）式中“样品取样量”为原料药取样量，若为制剂，该取样量就是片粉取样量或注射液取用体积（1ml相当于1g）。浙江大学网络教育精品资源共享课7所取片粉中药物的百分含量，乘上平均片重（一般片剂取10片或20片称重后研细，再称取适量片粉，即样品取用量），得每片实际含量，再除以标示量（即片剂的规格），即得相当于标示量的百分含量：相当于标示量%=药物含量×平均片重标示量×100%（注意分子分母单位的一致性）如果为注射剂，由以上（2）、（3）、（4）式计算得到的是每100ml注射液中药物的含量，再除以规格（质量/ml），即得相当于标示量的百分含量：相当于标示量%=药物含量（mg/ml）标示量（mg/ml）×100%计算题是药物分析课程教学的重要内容，几乎所有的药物分析考试中均有计算题，计算题量不多，但试卷中比重较大，失分也较大，希望引起同学注意。最好平时多练习，不懂时也可电话联系，当面交流可能比书面自己看效果更好。滴定度与当量关系（见第5章）滴定度是容量分析计算中常遇到的问题，必须搞清楚其定义与计算方法。定义：滴定度是指每1ml规定浓度的滴定液所相当的被测药物的质量（mg）数。滴定度（T）的确定：T需根据被测物与滴定液的反应摩尔比来计算，如1摩尔被测物与x摩尔滴定液相当。则T=滴定液摩尔浓度（mol/L）×被测物摩尔量（分子量M）/x。典型滴定反应中，被测物与滴定剂摩尔比：溴酸钾法滴定异烟肼（氧化还原）：3摩尔异烟肼与2摩尔溴酸钾相当，T=3M/2×mol/L。溴量法滴定司可巴比妥钠（加成反应）：1摩尔司可巴比妥钠与1摩尔溴（Br2）相当，T=M×mol/L。溴量法滴定盐酸去氧肾上腺素（取代反应）：1摩尔盐酸去氧肾上腺素与3摩尔溴（Br2）相当，T=M/3×mol/L。溴量法滴定盐酸肼屈嗪（氧化还原）：1摩尔盐酸肼屈嗪与2摩尔溴（Br2）相当，T=M/2×mol/L。浙江大学网络教育精品资源共享课8碘酸钾法滴定卡托普利（氧化还原）：6摩尔卡托普利与1摩尔碘酸钾相当，T=6M×mol/L。铈量法滴定硝苯地平（氧化还原）：1摩尔硝苯地平与2摩尔硫酸铈相当，T=M/2×mol/L。高