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硅胶柱层析分离SOP材料与仪器玻璃仪器：色谱柱、三角烧瓶、量筒、玻璃棒、烧杯、胶头滴管固定部分：万能夹、双顶丝收集样品：自动收集器或试管（带试管架）第一部分准备阶段第1步认真读题签3遍，注意指令中数量要求，避免发生称量错误。第2步观察实验环境，注意给出的材料与仪器。第3步在大脑中将装置图重现出来，并注意第一步操作。第二部分实验部分第1步涮洗玻璃仪器。对所有用到的玻璃仪器都应是干燥的。将实验中需要的玻璃仪器取出→用自来水及洗涤剂清洗（如果竞赛时间不够，这步可能会省略，注意现场提示）→再用蒸馏水冲洗3次（用洗瓶中蒸馏水）→用洗瓶中乙醇冲洗2次（清洗液倒入废液缸，不要倒入水池中）→用吹风吹干（电吹风或气流干燥器），干净干燥后，备用。第2步吸附剂硅胶处理1.称取硅胶：（1）如果指令中有称取量，则直接称取；（2）如果指令中没给出用量，而给出样品量，则样品与硅胶通常用量比为1:30‾60g（如果指令中提示样品分离难易程度，可依此选择，难分离者则硅胶用量增多）色谱分离硅胶通常为100‾200目。（3）具体步骤：将天平调平→将合适的干燥烧杯置天平上→扣重→轻轻加入硅胶（避免粉尘洒落到天平或实验台上，接近称样量时再轻轻抖腕），记录取量→取下烧杯→关闭天平（如果后续还需要称量，此时先不拔电源）2.按给出洗脱剂的条件配制洗脱剂按比例先计算用量，用合适的量筒取溶剂，置合适的锥形瓶中配制（注意锥形瓶不能过小，避免振摇混合不均匀）（注意试剂瓶盖放的位置；试剂瓶标签方向；洒在实验台上；放平观察是否到刻度；如果不到刻度，用干净干燥补一、色谱柱安装（20分）1.选择合适色谱柱：色谱柱为内径均匀、下端（带或不带活塞）缩口的硬质玻璃管。2.将色谱柱固定在铁架上（或铁架台）上，垂直、稳定。3.端口或活塞上部铺垫适量脱脂棉或玻璃纤维。4.色谱柱规格：高度与直径比（15:1‾（20:1）二、硅胶填装（20分）1.柱色谱硅胶：颗粒大小均匀，通常直径为0.07‾0.15mm的颗粒。2.干法装柱：将硅胶通过漏斗装入柱内，中间不应间断，形成一细流慢慢加入管内。也可用橡皮槌轻轻敲打柱硅胶柱使硅胶装填连续均匀、紧密。柱装好后，打开下端活塞，然后倒入洗脱剂洗脱以排尽柱内空气，并保持一定液面。3.湿法装柱：将最初准备使用的洗脱剂装入柱内，打开下端活塞，使洗脱剂缓慢流出。然后把硅胶慢慢连续不断地倒入柱内（或将硅胶与适量洗脱剂调成混悬液慢慢加入柱内，），硅胶依靠重力和洗脱剂的带动，在柱内自由沉降，此间要不断把流出的洗脱剂加回柱内保持一定的液面，直至把硅胶加完并在柱内沉降不再变动为止。然后在硅胶上面加一小片滤纸或少许脱脂棉。根据加样量控制洗脱剂液面至一定高度。三、上样（液体）（20分）1.湿法上样：用少量溶剂（最好就是展开剂，如果展开剂的溶解度不好，则可以用一极性较大的溶剂，但必须少量）将样品溶解后，再用胶头滴管转移得到的溶液，沿着层析柱内壁均匀加入，用少量溶剂洗涤后，再加入。2.干法上样：如样品不溶于装柱时用的洗脱剂，将样品溶于易挥发的溶剂中，并加入适量硅胶（不超过柱中硅胶全量的1/10）与其拌匀，除尽溶剂，将拌有样品的硅胶均匀加到柱顶（始终保持洗脱剂有一定的液面），再覆盖一层硅胶即可,上样时注意沿着柱内壁慢慢加入，始终保持硅胶上端表面平整；上样量为硅胶的1/60‾1/30。四、洗脱剂配制及加入、洗脱（20分）（1）洗脱剂的确定：可通过薄层色谱筛选，一般TLC展开时Rf值为0.2‾0.3的溶剂系统是最佳的洗脱系统，采用梯度洗脱法洗脱。（2）洗脱剂组成：可用单一溶剂、混合溶液，通常一般不超过三种溶剂。（3）流速控制：先打开柱下端活塞，保持洗脱剂流速1‾2滴/秒，上端不断添加洗脱剂（可用分液漏斗控制添加速度与下端流出速度相近）（4）洗脱：采用梯度洗脱，洗脱剂的洗脱能力由弱到强逐步递增。五、器材整理1.完成分离后，将吸附剂从柱子用取出，涮洗色谱柱，归位。2.将接收馏分的小三角烧瓶或试管编号，进行TLC色谱，合并相同馏分。3.将所用玻璃仪器涮洗归位。