二、离心技术•离心技术(centrifugalmethod)是根据物质颗粒在一个实用离心场中的行为而发展起来的,它是分离细胞器和生物大分子物质一种必备的手段,也是测定某些纯品物质的部分性质的一种方法。目前这一方法在在生物化学和分子生物学方面的应用已经十分广泛。•离心机(centrifuge)是实施离心技术的装置。离心机可分为制备型离心机和分析型离心机。前者主要用于分离生物材料,每次分离样品的容量可以很大,这是我们经常使用的;后者主要用于研究纯品大分子物质,包括某些颗粒体如核蛋白体等物质的性质,每次分析的样品容量很小,根据待测物质在离心场中的行为,能推断其纯度、形状和相对分子质量等性质。本章将着重介绍离心技术的基本原理、离心机的主要类型、超速离心技术及其在生化方面的应用。1、基本原理•离心是利用离心机产生的离心力(centrifugalforce)来分离具有不同的沉降系数的物质。离心机所产生的离心力,通常用下列方程式计算:•F=ω2rm•式中F是离心力,ω是角速度,r指旋转半径,m是物质颗粒的质量。•离心力常用地球引力的倍数表示,因而被称为相对离心力RCF,或者用数字×g表示,g为重力常数。例如25000×g,则表示相对离心力为25000。相对离心力•可用下列公式计算:•RCF=ω2r/g=ω2r/980•因转头旋转一次等于2n弧度,故转头的角速度以离心机转头每分钟旋转的次数n,即转每分(r/min)表示时,可写成下列公式:•ω=2π·n/60•代入公式最后得:•RCF=1.119×10-5n2·r•n(r/min),RCF(g),r(cm)•以上公式描述了相对离心力与转速之间的关系。只要给出旋转半径,就可彼此相互换算。•但是由于转头的形状通常有角度,致使每台离心机的离心管从管口到管底各点分别与旋转中心的距离是不相同的。因此,一般在计算转速、相对离心力,以及它们彼此间相互换算时,旋转半径均用r平均代替。r平均计算方法如下:•r平均=(r最大+r最小)/2