西南林大现代生化仪器分析课件06高效液相色谱分析法第4节 影响分离的因素与操作条件选择

10:31:11第六章液相色谱分析法一、影响分离的因素factorsinfluencedseparation二、分离类型的选择choiceofseparationtypes三、液相色谱的应用applicationofHPLC四、液相制备色谱preparativeliquidchromatography第四节影响分离的因素与操作条件的选择highperformanceliquidchromatographfactorsinfluencedseparationandchoiceofoperationcondition10:31:11一、影响分离的因素1.影响分离的因素与提高柱效的途径•在高效液相色谱中,液体的扩散系数仅为气体的万分之一，则速率方程中的分子扩散项B/U较小，可以忽略不计，即：H=A+Cu故液相色谱H-u曲线与气相色谱的形状不同，如图所示。10:31:11•液体的黏度比气体大一百倍，密度为气体的一千倍，故降低传质阻力是提高柱效主要途径。•由速率方程，降低固定相粒度可提高柱效。•液相色谱中，不可能通过增加柱温来改善传质。恒温•改变淋洗液组成、极性是改善分离的最直接的因素。10:31:112.流速流速大于0.5cm/s时,H～u曲线是一段斜率不大的直线。降低流速，柱效提高不是很大。但在实际操作中，流量仍是一个调整分离度和出峰时间的重要可选择参数。3.固定相及分离柱气相色谱中的固定液原则上都可以用于液相色谱，其选用原则与气相色谱一样。但在高效液相色谱中，分离柱的制备是一项技术要求非常高的工作，一般很少自行制备。10:31:11二、分离类型选择choiceofseparationtypes10:31:11三、HPLC的应用1.环境中有机氯农药残留量分析固定相：薄壳型硅胶(37～50m)流动相：正己烷流速：1.5mL/min色谱柱：50cm2.5mm(内径)检测器：差示折光检测器可对水果、蔬菜中的农药残留量进行分析。10:31:112.稠环芳烃的分析稠环芳烃多为致癌物质。固定相：十八烷基硅烷化键合相流动相：20%甲醇-水～100%甲醇线性梯度淋洗，2%/min流速：1mL/min柱温：50ºC柱压：70104Pa检测器：紫外检测器10:31:11四、制备型液相色谱获得高纯物质（色谱纯）的有效方法。半制备柱（内径8mm，长度15～30cm），一次制备量０.1～１mg；1.色谱柱的柱容量（柱负荷）对分析柱：不影响柱效时的最大进样量；对制备柱：不影响收集物纯度时的最大进样量；超载：进样量超过柱容量。柱效迅速下降，峰变宽。超载可提高制备效率，以柱效下降一半或容量因子k降低10%为宜。10:31:112.液相制备色谱的方法收集组分时，通常有以下情况：（1）可获得良好分离，主峰使用制备柱，超载提高效率；（2）两主成分之间的小组分；超载，分离切分使待分离组分成为主成分（富集）后，再次分离制备。10:31:113.制备型液相色谱制备型液相色谱：结构与分析型一样，但泵流量大、进样量大、采用制备柱；柱后馏分收集器。制备柱：内径20～50mm，柱长50cm。