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第七章生物技术在植物育种中的应用一、组培快速繁殖(离体培养)二、植物原生质体培养与体细胞杂交三、基因工程四、分子标记与育种第一节组培快速繁殖(离体培养)plantinvitroculture离体培养即广义的组织培养(planttissueculture):是指通过无菌操作，将植物的组织、器官、细胞以及原生质体等接种于人工配制的培养基上，在人工控制的环境条件下进行培养，以获得再生的完整植株或生产具有经济价值的其他生物产品的一种技术。按外植体（explant）的种类和培养目的来分，植物离体培养技术主要有：花粉和花药培养、胚胎培养（包括幼胚培养、成熟胚培养、胚乳培养、胚珠培养、子房培养以及体外受精）、组织培养、器官培养、细胞培养和原生质体培养。第一节组培快速繁殖(离体培养)一、花药培养1、目的：诱导小孢子向孢子体方向发育而形成胚状体，并进一步发育成为完整的单倍体植株。2、程序3、关键技术——培养基的配制花粉愈伤组织或胚状体花药器官原始体器官形成并发育为植株培养诱导培养诱导培养诱导二、胚珠和子房的离体培养与花药的培养类似三、离体受精也称为植物体外受精，是在人工条件下使卵细胞受精形成合子，再将形成的合子离体直接进行体外受精。程序：花粉或子房（或胚珠）的收集离体授粉和受精叶肉组织愈伤组织新植株组织培养器官培养单个细胞营养培养基克隆植株细胞培养四、离体胚的培养1、方式幼胚通过组织、器官、胚胎的形成产生再生植株胚直接萌发为植株2、作用克服远缘杂交不育性；早熟品种的育成；打破休眠等3、关键技术培养基的配制取胚时期第二节植物原生质体培养与体细胞杂交一、原生质体的分离与培养分离培养培养纯化分离活力测定材料选取、预处理培养基、培养条件及方法的确定植株再生细胞分裂细胞壁再生二、体细胞杂交or体细胞融合or原生质体融合(一)融合1、原生质体选择2、融合的方法多聚化合物法高PH值高Ca＋法聚乙二醇法电融合法3、融合的方式对称融合；非对称融合(二)原生质融合体的生长发育1、异核体的壁再生2、异核体的核融合3、融合细胞的增殖4、愈伤组织的器官分化(三)杂种细胞的选择互补选择法机械分离法(四)杂种细胞的鉴定形态学鉴定细胞学鉴定生化鉴定DNA检测鉴定第三节基因工程目的基因的获取转基因植株的鉴定植物的遗传转化载体的构建第四节分子标记与育种一、遗传图谱的构建二、分子标记基因定位三、分子标记在种质资源上的应用四、分子标记在辅助选择中的作用