糖化血红蛋白检测方法的标准化

糖化血红蛋白检测方法的标准化主讲人：卢红HbA1c常规测定方法1HbA1c检测的标准化2HbA1c检测的规范化3目录：AddYurTitleAddYourTitle67岁女性严重糖尿病病史血糖控制不住电泳产物中存在异常的快速Hb对47例糖尿病患者进行了三个月的研究1968年发表文章“糖尿病血红蛋白成分”1969年研究发现，快速泳动的Hb与HbA1c结构相同糖化血红蛋白的发现过程.HbHbAααββHbA2ααγγHbFααγγHbA0HbA1HbA1bHbA1aHbA1c97%2.5%0.5%94%6%5%地中海贫血的病人，HbF的含量升高，而HbA1c降低；这种情况应该检测总的糖化血红蛋白。A1a和A1b浓度非常低主要的糖化血红蛋白已使用20年根据DCCT研究确认糖化和非糖化的血红蛋白非糖化糖化•血糖是通过弥散方式进入细胞内的，无需胰岛素参与。血糖与血红蛋白的结合过程很缓慢，而且是不可逆的，故体内衰老红细胞比新生红细胞的糖化HbA1c含量约高出1.5倍。•HbA1c是血液中红细胞内的血红蛋白与血糖结合的产物•HbA1c越高表示血糖与血红蛋白结合越多，糖尿病病情也越重•HbA1c监测已作为糖尿病疗效判定和调整治疗方案的“金指标”•HbA1c水平反映的是在检测前120天内的平均血糖水平，而与抽血时间，病人是否空腹，是否使用胰岛素等因素无关，是判定糖尿病长期控制的良好指标•HbA1c在患有各种贫血，出血性疾病或应用心得安，吗啡等药物时可降低，而在服用大量阿司匹林，维生素C或肾功能不全时可增高第一PPT模板网，PPT素材下载寿命：120days50%的HbA1c值与过去30天内的平均血糖水平相关40%的HbA1c值与过去31--90天平均血糖水平相关只有10%HbA1c与过去91--120天平均血糖水平相关HbA1c形成的动力学ADA（美国糖尿病学会）对HbA1c的定义•1.HbA1c对糖尿病的重大影响相当于胰岛素的问世•2.HbA1c是监测糖尿病血糖控制的金标准•3.所有的糖尿病人均应常规的测定HbA1c•4.对于血糖控制稳定者每年至少测定两次•5.对治疗方案变动者或血糖未达标者，则需季度监测•6.HbA1c的达标值ADA为7%，IDF(国际糖尿病联盟)西太区标准6.5%上世纪80年代1975年以前尿糖，酮体随机血糖指导治疗以缓解高血糖症状检测技术进步证据积累：糖尿病慢性并发症是慢性高血糖的结果尿糖被毛细血管血糖检测取代糖化血红蛋白成为常规监测的重要部分糖尿病监测指标及其变迁监测指标：尿糖，血糖，糖化血清蛋白及糖化血清白蛋白，糖化血红蛋白糖尿病检查的项目选择时间是否空腹抗凝剂的选择样本稳定重复性尿糖几小时后否无几小时差随机血糖取样时否草酸碱/氯化钠几小时差空腹血糖取样时是草酸碱/氯化钠几小时差OGTT取样时第一次是第二次否草酸碱/氯化钠几小时差糖化血清蛋白1-3周否无几天可以糖化白蛋白2-3周否无几天可以糖化血红蛋白1-2个月否EDTA,肝素草酸碱/氯化钠两周以上很好诊断标准的变迁：1985年WHO的糖尿病诊断标准有典型的糖尿病症状，任意时间血糖≥11.1mol/l（200㎎/dl)1FPG(空腹血浆葡萄糖水平)两次或两次以上≥7.8mol/l（140㎎/dl)2FPG＜7.8mol/l（140㎎/dl)而怀疑为糖尿病者，OGTT2hPG(血糖）≥11.1mol/l（200㎎/dl)3符合下列之一者可诊断为糖尿病注：若无糖尿病症状，尚需另有一次血糖超过11.1mol/l（200㎎/dl)国际专家委员会建议的HbA1c诊断糖尿病的切点•HbA1c≥6.5%作为诊断非妊娠相关的糖尿病的切点•将HbA1c在≥6.0%和≤6.5%范围内的个体定义为“高危的亚糖尿病状态”糖尿病的首选诊断标准•2009年美国糖尿病协会在糖尿病治疗指南中将HbA1c列为糖尿病的首选诊断标准。HbA1c的常规测定方法阳离子交换树脂微柱层析法高压液相法亲和色谱微柱法（本科所采用的方法）TBA比色法琼脂凝胶电泳法各种糖化血红蛋白的测定方法基于胶乳颗粒凝集的抑制作用基于电位变化的物理方法基于化学原理的方法免疫凝集抑制法HbA1c常规测定方法：易受以下多种因素的干扰不稳定型HbA1HbF温度价廉，操作快速优点缺点1.阳离子交换树脂微柱层析法综上表明：阳离子交换树脂法测定GHB不是一种精确，可靠，重复性强，灵敏度搞的检测方法。用作要求不太高的衡量糖尿病长期控制水平的监测指标，尚可勉强采用，而作为要求精确程度高的科研手段是困难的HbA1c常规测定方法：高压液相法（HPLC)•是目前各种GHB测定方法中高效，精确的方法之一•此种虽属理想的方法，但仪器价格十分昂贵，仅在一些发达国家使用•自1981年问世以来，很快受到学者们的重视，作为糖尿病理想的检测手段已获公认。目前我科也采用此种方法原理：将血滴入反应试剂时，血红细胞被立刻溶解，所有血红蛋白随机被沉淀。硼酸结合物即可与糖化血红蛋白的顺式-二醇基结合。将反应物置于检测设备上，所有已沉淀的血红蛋白无论是否与硼酸结合，都将残留于滤网上，使用清洗液，出去多余有色结合物。最后使用NycoCardREADERII检测仪对蓝色和红色的色谱进行分析。亲和色谱微柱法HbA1c常规测定方法：不能测试GHB的单一组分，且包含HbA1c的糖化组分，但并不影响它作为可靠地糖代谢指标的价值。操作简单，快速，价廉。据报道EDTA抗凝血标本在20-24℃下可保存三周，其GHB值仍与第一天同一血标本值无差异。Mission优点缺点亲和色谱微柱法HbA1c常规测定方法：HbA1c检测的标准化HbA1c标准化•国家，地区标准化（National)：美国，瑞典及日本•国际标准化（International)；国际临床化学与医学实验室联盟（IFCC)HbA1c检测的标准化：美国病理学会（CAP)PT调查•实验室采用HbA1c报告结果•实验室采用NGSP(美国糖化血红蛋白标准化计划）认可的方法•采用NGSP认可的方法，检测均值与NGSP的HbA1c靶值的差异分别为0.3%（低值），0.4%（中值），0.5%（高值）•95%实验室方法之间的差异≤0.5%•可接受标准为NGSP靶值±10%，而不再考虑不同方法组的均值•总的符合率为95.2%--97.1%HbA1c检测的标准化：•中国糖化血红蛋白教育计划于2010年3月20日正式启动•主要目标是以循证医学为依据，促进糖化血红蛋白在我国糖尿病管理中的广泛和正确使用，加速糖化血红蛋白检测方法的标准化进程，开展与糖化血红蛋白应用相关的研究工作HbA1c检测的标准化：HbA1c检测的规范化仪器的选择-----厂家通过NGSP,IFCC认证规范化HbA1c检测-----保证检测质量•使用经过NGSP认证的方法•加强实验室质量管理---制定实验室管理文件（室内质控）•参加室间质评•生产厂家----提高出厂方法质量HbA1c检测的规范化：管理文件的基本内容•人员要求•质量控制要求•操作规程•样本•结果报告•仪器和试剂•实验室生物安全•实验室记录的保存HbA1c检测的规范化：结语：•建立参考方法，制备参考物质，建成参考实验室网络，是实现我国的糖化血红蛋白检测溯源性的必由之路，对临床实验室之间的检测结果的准确性和可比性意义重大。希望通过“中国糖化血红蛋白教育计划”推动HbA1c标准化和质量管理的进一步深入开展，为糖尿病筛选，诊断，血糖控制，疗效观察提高准确，有效的检测结果，从而更好地服务于临床医生和糖尿病患者