GB 14771

GB/T14771—1993中华人民共和国国家标准食品中蛋白质的测定方法MethodfordeterminationofproteincontentinfoodsGB/T14771—1993本标准参照采用ISO937—1978《肉与肉制品氮含量的测定》和ISO1871—1975《农产食品凯氏法测定氮含量一般性说明》。1主题内容与适用范围本标准规定了用凯氏定氮法测定食品中蛋白质的方法。本标准适用于肉禽制品、豆制品、水产品、调味品、谷物制品、发酵制品、糕点、植物蛋白饮料等食品中蛋白质的测定。2引用标准GB601化学试剂滴定分析（容量分析）用标准溶液的制备3原理以硫酸铜为催化剂，用浓硫酸消化试样，使有机氮分解为氨，与硫酸生成硫酸铵。然后加碱蒸馏使氨逸出，用硼酸溶液吸收，再用盐酸标准滴定溶液滴定。根据盐酸标准滴定溶液的消耗量计算蛋白质的含量。4试剂和溶液所有试剂均为分析纯；水为蒸馏水或同等纯度的水。4．1硫酸铜（GB665）。4．2硫酸钾（HG3—920）。4．3硫酸（GB625）。4．440%氢氧化钠溶液：称取40g氢氧化钠（GB629）溶于60mL蒸馏水中。4．54%硼酸溶液：称取4g硼酸（GB628）溶于蒸馏水中稀释至100mL。4．60.1mol/L盐酸标准滴定溶液：按GB601规定的方法配制与标定。4．795%乙醇（GB679）。4．8甲基红-次甲基蓝混合指示液：将次甲基蓝乙醇溶液（1g/L）与甲基红乙醇溶液（1g/L）按1+2体积比混合。5仪器、设备实验室常规仪器及下列各项：5．1凯氏烧瓶：500mL。5．2可调式电炉。5．3蒸汽蒸馏装置：见图1和图2。国家技术监督局1993—12—21批准1994—10—01实施国家技术监督局1993—12—21批准1994—10—01实施GB/T14771—1993图1常量蒸馏装置1—电炉；2—蒸汽发生瓶；3—大气夹；4—螺旋夹；5—加碱漏斗；6—凯氏烧瓶；7—氮素球；8—冷凝管；9—接收瓶；10—塑料管图2微量蒸馏装置1—电炉；2—蒸汽发生器；3—大气夹；4—螺旋夹；5—小玻璃杯；6—反应室；7—冷凝管；8—接收瓶5．4铰肉机：篦孔径不超过4nm。5．5组织捣碎机。5．6粉碎机。5．7研钵：玻璃或瓷质。国家技术监督局1993—12—21批准1994—10—01实施GB/T14771—19936试样的制备6．1固体样品：取有代表性的样品至少200g，用研钵捣碎、研细；不易捣碎、研细的样品应切（剪）成细粒；干固体样品用粉碎机粉碎。6．2液体样品：取充分混匀的液体样品至少200g。6．3粉状样品：取有代表性的样品至少200g（如粉粒较大也应用研钵研细），混合均匀。6．4糊状样品：取有代表性的样品至少200g，混合均匀。6．5固液体样品：按固、液体比例，取有代表性的样品至少200g，用组织捣碎机捣碎，混合均匀。6．6肉制品：取去除不可食部分、具有代表性的样品至少200g，用铰肉机至少铰两次，混合均匀。上述试样应放入密闭玻璃容器中，于4℃冰箱内贮存备用，尽快测定。7分析步骤7．1称样、处理7．1．1固体、粉状、糊状、固液体试样：称取0.5～5g试样（使试样中含氮30～40mg），精确至0.001g，放入凯氏烧瓶中（避免粘附在瓶壁上）。7．1．2液体试样：取10～20±0.05mL试样（使试样中含氮30～40mg），移入凯氏烧瓶中，蒸发至近干。7．2消化向凯氏烧瓶中依次加入硫酸铜（4.1）0.4g、硫酸钾（4.2）10g、硫酸（4.3）20mL及数粒玻璃珠。将凯氏烧瓶斜放（45°）在电炉上，缓慢加热。待起泡停止，内容物均匀后，升高温度，保持液面微沸。当溶液呈蓝绿色透明时，继续加热0.5～1h。取下凯氏烧瓶冷却至约40℃，缓慢加入适量水，摇匀。冷却至室温。7．3蒸馏采用下列方法之一蒸馏。7．3．1常量蒸馏向接收瓶内加入50mL4%硼酸溶液（4.5）及4滴甲基红-次甲基蓝混合指示液（4.8）。将接收瓶置于蒸馏装置的冷凝管下口，使冷凝管下口浸入硼酸溶液中。将盛有消化液的凯氏烧瓶连接在氮素球下，塑料管下端浸入消化液中。沿漏斗向凯氏烧瓶中缓慢加入70mL40%氢氧化钠溶液（4.4）（使漏斗底部始终留有少量碱液，封口）。加碱后烧瓶内的液体应为碱性（黑褐色）。通入蒸汽，蒸馏20min（始终保持液面沸腾）。至少收集80mL蒸馏液。降低接收瓶的位置，使冷凝管口离开液面，继续蒸馏3min。用少量水冲洗冷凝管管口，洗液并入接收瓶内，取下接收瓶。7．3．2微量蒸馏将消化好并冷却至室温的消化溶液（7.2）全部转移到100mL容量瓶中，用蒸馏水定容至刻度，摇匀。向接收瓶内加入10mL4%硼酸溶液（4.5）和1滴混合指示剂（4.8）。将接收瓶置于蒸馏装置的冷凝管下口，使下口浸入硼酸溶液中。取10±0.05mL稀释定容后的试液，沿小玻璃杯移入反应室，并用少量蒸馏水冲洗小玻璃杯，一并移入反应室。塞紧棒状玻璃塞，向小玻璃杯内加入约10mL40%氢氧化钠溶液（4.4）。提起玻璃塞，使氢氧化钠溶液缓慢流入反应室，立即塞紧玻璃塞，并在小玻璃杯中加水，使之密封。通入蒸汽，蒸馏5min。降低接收瓶的位置，使冷凝管管国家技术监督局1993—12—21批准1994—10—01实施GB/T14771—1993口离开液面，继续蒸馏1min。用少量蒸馏水冲洗冷凝管管口，洗液并入接收瓶内。取下接收瓶。7．4滴定用0.1mol/L盐酸标准滴定溶液滴定收集液至刚刚出现紫红色为终点。同一试样做两次平行试验，同时做空白试验。8分析结果的表述常量蒸馏按式（1）计算：100014.0)((%)0××××−=FmcVVx…………………………（1）微量蒸馏按式（2）计算：10010010014.0)((%)0×××××−=FmcVVx……………………………（2）式中：x——食品中蛋白质含量（质量百分率），%（m/m）或%（m/V）；V——滴定试样时消耗0.1mol/L盐酸标准滴定溶液的体积，mL；V0——空白试验时消耗0.1mol/L盐酸标准滴定溶液的体积，mL；c——盐酸标准滴定溶液的摩尔浓度，mol/L；0.014——1mL1mol/L盐酸标准滴定溶液相当于氮的质量，g；m——试样的质量，g；F——氮换算为蛋白质的系数。按下表换算：食品种类F小麦5.83小麦粉及其制品5.70大麦、燕表、黑麦5.83米5.95花生5.46大豆及其制品5.71畜禽肉及其制品6.25乳及乳制品6.38芝麻、向日葵子、南瓜子5.40栗、胡桃5.30其他食品6.25计算结果精确至小数点后第二位。9允许差同一样品两次测定值之差：蛋白质含量小于1%时，不得超过平均值的10%；蛋白质含量大于或等于1%时，每100g样品不得超过5g。国家技术监督局1993—12—21批准1994—10—01实施GB/T14771—1993附加说明：本标准由全国食品工业标准化技术委员会提出并归口。本标准由中国肉类食品综合研究中心负责起草。本标准主要起草人张燕婉、焦烨、裴显庆。国家技术监督局1993—12—21批准1994—10—01实施国家技术监督局1993—12—21批准1994—10—01实施