JJF(新) 88 2022 快速核酸检测仪温度参数校准规范

新疆维吾尔自治区地方计量技术规范JJF（新）88－2022快速核酸检测仪温度参数校准规范CalibrationSpecificationforTemperatureParameterofRapidNucleicAcidAnalyzers2022-12-14发布2023-06-14实施新疆维吾尔自治区市场监督管理局发布JJF（新）88－2022快速核酸检测仪温度参数校准规范CalibrationSpecificationforTemperatureParameterofRapidNucleicAcidAnalyzers归口单位：新疆维吾尔自治区市场监督管理局主要起草单位：新疆维吾尔自治区计量测试研究院参加起草单位：新疆医科大学附属中医医院新疆医科大学附属肿瘤医院本规范委托起草单位负责解释JJF（新）88－2022JJF（新）88－2022I本规范主要起草人：麻锐（新疆维吾尔自治区计量测试研究院）卓华(新疆维吾尔自治区计量测试研究院)薛文艳（新疆维吾尔自治区计量测试研究院）参加起草人：徐菲莉(新疆医科大学附属中医医院)封敏(新疆医科大学附属肿瘤医院)杨丽(新疆医科大学附属中医医院)陈新健(新疆医科大学附属肿瘤医院)JJF(新)88－2022II目录引言…………………………………………………………………（Ⅲ）1范围……………………………………………………………………（1）2引用文件……………………………………………………………………（1）3术语…………………………………………………………………………（1）4概述……………………………………………………………………（2）5计量特性……………………………………………………………………（2）6校准条件……………………………………………………………………（2）6.1环境条件……………………………………………………………………（2）6.2测量标准及其他设备……………………………………………………（3）7校准项目和校准方法……………………………………………………………（3）7.1校准项目………………………………………………………………………（3）7.2校准方法……………………………………………………………………（3）8校准结果表达……………………………………………………………………（8）9复校时间间隔…………………………………………………………………（9）附录A校准结果记录参考格式……………………………………………………（10）附录B校准证书内页参考格式……………………………………………………（12）附录C温度偏差校准结果的不确定度评定模型………………………………（14）JJF（新）88－2022III引言本规范是以JJF1071-2010《国家计量校准规范编写规则》、JJF1001-2011《通用计量术语及定义》和JJF1059.1-2012《测量不确定度评定与表示》为基础性系列规范进行编写。本规范包含了对快速核酸检测仪温度、时间物理参数的计量要求和具体校准项目。计量性能主要包括温度偏差、平均升温速率、平均降温速率、最大温度过冲量、温度波动度、温度持续时间准确性的具体要求。本规范为首次发布。JJF（新）88－20221快速核酸检测仪温度参数校准规范1范围本规范适用于基于实时荧光PCR技术、恒温核酸扩增技术的快速核酸检测仪（以下简称检测仪）的温度参数的校准，其他类似设备也可参照本规范进行校准。2引用文件JJF1527-2015聚合酶链反应分析仪校准规范YY∕T1173-2010聚合酶链反应分析仪凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本规范；凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本规范。3术语和计量单位3.1实时荧光PCRreal-timefluorescencepolymerasechainreaction一种对特定的DNA或RNA片段在体外进行快速扩增的技术，由变性——退火——延伸三个基本反应步骤构成，扩增的过程中荧光染料能同步整合在产物上，可以通过荧光信号的强弱，进行实时检测。3.2恒温核酸扩增thermostaticnucleicacidamplification在目标基因的特定区域设计特异性引物，并使用链置换DNA聚合酶在恒温条件下保温数十分钟以实现核酸扩增的方法。3.3温度偏差temperaturedeviation恒温过程中模块内实测温度平均值与设定温度之差。3.4平均升温速率meanheatingrate检测仪模块升温过程中，单位时间内上升温度平均值，单位℃/s。3.5平均降温速率meancoolingrate检测仪模块降温过程中，单位时间内下降温度平均值，单位℃/s。3.6最大温度过冲量Maximumtemperatureovershoot检测仪模块温度从基础升温至设定温度时，模块内实际温度超出设定温度的温度值。3.7温度波动度temperaturefluctuationJJF(新)88－20222恒温过程中模块内实测温度随时间的变化量。3.8温度持续时间准确性temperaturedurationaccuracy实测的温度持续时间与设定的温度持续时间的相对偏差。4概述检测仪通常是指基于实时荧光PCR技术、恒温核酸扩增技术的便携式的检测仪器，在现场从生物体上取得待检测的样品，立即开展检测，它将多步骤的核酸检测方法整合到一个设备，在更短时间内完成对核酸分子的扩增，从核酸的特征和核酸复制、转录或翻译水平中分析核酸表达的功能，达到对生物体的疾病做出诊断。快速核酸检测仪技术和方法的核心是将核酸提取、扩增和检测整合于一体并同时进行，用户只需要将样本加入该系统，自动完成检测和结果分析，这极大地简化了传统的核酸检测。检测仪主要由样品载台、热循环部件、光学检测部件、控制模块、显示模块等部分组成。5计量特性检测仪温度参数的技术要求见表1。表1检测仪温度参数的技术要求校准项目技术要求类型实时荧光PCR技术恒温扩增技术温度偏差≤±0.5℃平均升温速率≥1.5℃/s-平均降温速率≥1.5℃/s-最大温度过冲量≤1.0℃-温度波动度-±1.0℃温度持续时间相对误差≤±5%-注：1.以上所有指标不用于合格性判别，仅供参考。6校准条件6.1环境条件环境温度：(15～30)℃；相对湿度：不大于85%；JJF（新）88－20223大气压：(70～110)kPa；供电电源：电压：AC220±22V，频率：50±1Hz；6.2测量标准及其他设备测量标准及其他设备技术要求见表2。表2测量标准及其他设备技术要求7校准项目和校准方法7.1校准项目见表3。表3快速核酸检测仪校准项目项目实时荧光PCR技术恒温扩增技术温度偏差++平均升温速率+-平均降温速率+-最大温度过冲值+-温度波动度-+温度持续时间相对误差+-注：+表示应校准；-表示不校准。7.2校准方法7.2.1外观检查校准前对快速核酸检测仪目测进行外观检查，外观应符合以下要求:外形结构应完好，标识清晰，应标明设备的名称、型号、规格、制造商、出厂编号、制造年月等明确标识。7.2.2测量点位置将快速核酸检测仪校准装置放置于被测检测仪模块中，校准装置可选择对单个模块或多个模块分别进行校准见图1。名称测量范围技术要求快速核酸检测仪校准装置（0～120）℃温度传感器：分辨力：不低于0.01℃最大允许误差：0.1℃采样时间间隔：≤0.1s/采用温度记录器的记录时间作为快速核酸检测仪时间测量标准分辨力：不低于0.1s最大允许误差：1s/hJJF(新)88－20224图1独立模块快速核酸检测仪布点示意图非独立控温的检测仪作为一个整体进行温度校准，以检测仪8通道和16通道为例，布点遵循均匀分布的原则，见图2（a）、图2（b），每增加8通道应增加3个温度校准点。图2（a）检测仪（8通道）布点示意图图2（b）检测仪（16通道）布点示意图7.2.3温度参数校准校准时，采用实时荧光PCR技术检测校准程序见表3，采用恒温扩增技术的检测仪温度校准程序见表4。启动检测仪，打开工作舱门，根据模块数放入快速核酸检测仪校准装置，关闭舱门，测量软件设置采样间隔为0.1s，运行检测仪，校准装置采集并记录整个校准程序的温度和时间数据。JJF（新）88－20225表3检测仪（实时荧光PCR技术）校准程序步骤设定温度点设定温度持续时间130℃60s295℃60s330℃60s490℃60s550℃60s670℃60s760℃60s830℃60s表4检测仪（恒温扩增技术）校准程序步骤设定温度点设定温度持续时间158℃10min265℃10min395℃10min7.2.4温度偏差检测仪设定好校准程序放入相应数量的温度传感器，启动运行，在稳定状态下，当温度达到校准程序设定温度点并充分稳定后，在规定时间内，实时记录检测仪各模块的测量值，共计n次。温度偏差：scdTTT(1)niifTnT11(2)nffTjT1c1(3)式中：dT—检测仪模块温度偏差，℃；cT—温度传感器实测温度的平均值，℃；sT—检测仪模块设定温度，℃；fT—n次测量温度平均值，℃；JJF(新)88－20226iT—温度传感器第i次测量值，℃；n—测量次数；j—温度传感器数量。7.2.5平均升温速率（实时荧光PCR技术）检测仪从30℃升温至95℃，分别读取校准装置50℃和90℃的测量值，计算升温速率：tTTVi)(ABu(4)niifTnT1BB1(5)jffTjT1BB1(6)niifTnT1AA1(7)jffTjT1AA1(8)式中：iVu—模块平均升温速率，℃/s；BT—90℃时温度传感器测量平均值，℃；AT—50℃时温度传感器测量平均值，℃；fTB—90℃时第f个温度传感器n次测量平均值，℃；iTB—温度传感器第i次测量值，℃；fTA—50℃时第f个温度传感器n次测量平均值，℃；iTA—温度传感器第i次测量值，℃；n—第f个温度传感器测量次数；j—温度传感器数量；t—从AT到BT达的时间，s。7.2.6平均降温速率（实时荧光PCR技术）检测仪从95℃降温至30℃，分别读取校准装置90℃和50℃的测量值，计算降温速率：tTTVi)(ABd(9)JJF（新）88－20227niifTnT1BB1(10)jffTjT1BB1(11)niifTnT1AA1(12)、jffTjT1AA1(13)式中：iVd—模块平均降温速率，℃/s；BT—90℃时温度传感器测量平均值，℃；AT—50℃时温度传感器测量平均值，℃；fTB—90℃时第f个温度传感器n次测量平均值，℃；iTB—温度传感器第i次测量值，℃；fTA—50℃时第f个温度传感器n次测量平均值，℃；iTA—温度传感器第i次测量值，℃；n—第f个温度传感器测量次数；j—温度传感器数量；t—从BT到达AT的时间，s。7.2.7最大温度过冲值（实时荧光PCR技术）检测仪从30℃升温至95℃，选取模块内温度传感器偏离设定温度的最大测量值见图3，计算最大温度过冲值：smax95TTT℃（14）式中：℃95T—检测仪模块最大温度过冲值，℃；maxT—温度传感器最大测量值，℃；sT—检测仪模块设定温度值，℃。JJF(新)88－20228图395℃温度过冲示意图7.2.8温度持续时间相对误差（实时荧光PCR技术）检测仪以90℃时为校准点，校准装置采集温度首次到达设定温度的时间,至末次最后一个维持设定温度的时间，计算温度持续时间相对误差：%100ssctttt(16）12cttt(17）式中：t—温度持续时间相对误差，%。ct—温度持续时间，s；st—设定温度持续时间，s；1t—校准装置采集到的第一个到达设定温度的时间；2t—校准装置采集到的最后一个维持设定温度的时间。7.2.9温度波动度（恒温扩增技术）检测仪稳定状态下，各校准点在10min内（每30s测量一次）实测最高温度与最低温度之差的一半，冠以“±”号：)(21minmaxiiiTTT（15）式中：iT—检测仪