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食品中金黄色葡萄球菌检验食品中金黄色葡萄球菌检验食品中金黄色葡萄球菌检验食品中金黄色葡萄球菌检验食品中金黄色葡萄球菌检验食品中金黄色葡萄球菌检验食品中金黄色葡萄球菌检验食品中金黄色葡萄球菌检验GB/T4789.10-2010GB/T4789.10-2010GB/T4789.10-2010GB/T4789.10-2010GB/T4789.10-2010GB/T4789.10-2010GB/T4789.10-2010GB/T4789.10-2010�金黄色葡萄球菌是造成人类食物中毒的重要致病菌之一,在历年的食物中毒调查中,该菌占整个细菌性食物中毒的第1位或第2位。本菌广泛分布于自然界,如空气、土壤、水及其他环境中。在人类和动物的皮肤与外界相通的腔道中,也经常有本菌存在。具报道,在正常人群中的带菌率可达到30%～80%,因此,其可以通过各种途径和方式,尤其是经工作人员的手和上呼吸道而污染食品,并在合适的温度环境下,细菌可以大量繁殖并产生肠毒素,从而引起消费者食物中毒。食品中金黄色葡萄球菌检验食品中金黄色葡萄球菌检验食品中金黄色葡萄球菌检验食品中金黄色葡萄球菌检验食品中金黄色葡萄球菌检验食品中金黄色葡萄球菌检验食品中金黄色葡萄球菌检验食品中金黄色葡萄球菌检验背景资料背景资料背景资料背景资料背景资料背景资料背景资料背景资料��FDABAM(2001)chapter12AOAC975.55987.09FDABAM(2001)chapter12AOAC975.55987.09��AOAC975.55987.09AOAC975.55987.09��ISO6888-1ISO6888-1、、ISO6888-2ISO6888-2��CCFAC(RA)MicrobiologicalMethodsManualMethodCCFAC(RA)MicrobiologicalMethodsManualMethod7.2:1995UK7.2:1995UK��CanadaMFHPB-28(September1995)CanadaMFHPB-28(September1995)��USDA/FSISMicrobiologylaboratoryGuidebook3USDA/FSISMicrobiologylaboratoryGuidebook3rdrdEditionEdition��SN0172-92SN0172-92食品中金黄色葡萄球菌检验食品中金黄色葡萄球菌检验食品中金黄色葡萄球菌检验食品中金黄色葡萄球菌检验食品中金黄色葡萄球菌检验食品中金黄色葡萄球菌检验食品中金黄色葡萄球菌检验食品中金黄色葡萄球菌检验修订原则修订原则修订原则修订原则修订原则修订原则修订原则修订原则��参照参照FDAFDA、、AOACAOAC、、ISOISO等有关标准，使本标等有关标准，使本标准更接近现行国际标准准更接近现行国际标准��积极吸取新方法、新技术积极吸取新方法、新技术��保持与原标准的连续性保持与原标准的连续性食品中金黄色葡萄球菌检验食品中金黄色葡萄球菌检验食品中金黄色葡萄球菌检验食品中金黄色葡萄球菌检验食品中金黄色葡萄球菌检验食品中金黄色葡萄球菌检验食品中金黄色葡萄球菌检验食品中金黄色葡萄球菌检验��将原标准拆分为将原标准拆分为三种方法三种方法((定量和定性定量和定性))��增加计数标准的的方法：增加计数标准的的方法：MPNMPN法法��对有些描述更细化对有些描述更细化增加计数公式增加计数公式和公式的解和公式的解释释、操作描述等方面、操作描述等方面定定定定定定定定性性性性性性性性方方方方方方方方法法法法法法法法2003版划线划线Baird-ParkerBaird-Parker平板：平板：§§菌落直径为菌落直径为2mm2mm～～3mm3mm；§颜色呈灰色到黑色，边缘为淡色，周围为一混浊带，在其外层有一透明圈；§用接种针接触菌落有似奶油至树胶样的硬度，偶然会遇到非脂肪溶解的类似菌落；但无混浊带及透明圈；§长期保存的冷冻或干燥食品中所分离的菌落比典型菌落所产生的黑色较淡些，外观可能粗糙并干燥；结结结结结结结结果果果果果果果果判判判判判判判判定定定定定定定定划线血平板：划线血平板：§§菌落较大，圆形，光滑凸起菌落较大，圆形，光滑凸起，湿润；§颜色呈金黄色，有时呈白色；§菌落周围有透明溶血圈血血血血血血血血浆浆浆浆浆浆浆浆凝凝凝凝凝凝凝凝固固固固固固固固酶酶酶酶酶酶酶酶试试试试试试试试验验验验验验验验新鲜配置的兔血新鲜配置的兔血新鲜配置的兔血新鲜配置的兔血浆浆浆浆0.5ml0.5ml0.5ml0.5mlBHIBHIBHIBHI培养物培养物培养物培养物0.2ml~0.3ml0.2ml~0.3ml0.2ml~0.3ml0.2ml~0.3ml振荡摇匀，振荡摇匀，振荡摇匀，振荡摇匀，置置置置36363636℃℃℃℃++++1111℃℃℃℃温箱或水浴箱；温箱或水浴箱；温箱或水浴箱；温箱或水浴箱；间隔间隔间隔间隔30min30min30min30min观察，共观察，共观察，共观察，共6h6h6h6h；；；；结结结结果果果果判判判判定定定定如呈现凝固如呈现凝固如呈现凝固如呈现凝固（即将试管倾斜或倒置时，呈现凝块）或凝固体积大于原体积的一半，被判定为阳性结果；同时以已知血浆凝固酶试验阳性和阴性葡萄球菌菌株的肉汤培养物作为对照结果如可疑：结果如可疑：结果如可疑：结果如可疑：结果如可疑：结果如可疑：结果如可疑：结果如可疑：挑取营养琼脂小斜面的菌落到挑取营养琼脂小斜面的菌落到5mLBHI5mLBHI，，3636℃±℃±11℃℃培养培养18h18h～～48h48h，重复前，重复前面的凝固酶试验。面的凝固酶试验。结结结结结结结结果果果果果果果果报报报报报报报报告告告告告告告告��报告在报告在报告在报告在报告在报告在报告在报告在25g25g25g25g25g25g25g25g（（（（（（（（mLmLmLmLmLmLmLmL）样品中检出或未检出金黄）样品中检出或未检出金黄）样品中检出或未检出金黄）样品中检出或未检出金黄）样品中检出或未检出金黄）样品中检出或未检出金黄）样品中检出或未检出金黄）样品中检出或未检出金黄色葡萄球菌。色葡萄球菌。色葡萄球菌。色葡萄球菌。色葡萄球菌。色葡萄球菌。色葡萄球菌。色葡萄球菌。葡萄球菌肠毒素的检测葡萄球菌肠毒素的检测葡萄球菌肠毒素的检测葡萄球菌肠毒素的检测�目的：食品原料或成品污染的金黄色葡萄球菌及某些芽胞菌后会产生危害身体健康的肠毒素，经热杀菌或货架期长时间放置后微生物死亡，但由于肠毒素可耐受100℃的高温30min而仍然不被破坏，故很容易引起食源性中毒，是一种重要的危害人类健康的细菌毒素。人食用后会出现严重的腹泻、肠炎甚至死亡。许多欧美国家对我国进口的一些食品强制要求检测肠毒素。葡萄球菌致病因子葡萄球菌致病因子葡萄球菌致病因子葡萄球菌致病因子1111肠毒素肠毒素肠毒素肠毒素：耐热的细菌外毒素，致病主要原因；根据血清分型：A、B、C1-C3、D、E、G、H、I和J；2222表皮剥脱毒素表皮剥脱毒素表皮剥脱毒素表皮剥脱毒素：etaetbetd3333中毒休克综合征毒素中毒休克综合征毒素中毒休克综合征毒素中毒休克综合征毒素：：：：TSST-1检检检检测测测测方方方方法法法法�动物试验动物试验动物试验动物试验：幼猫或猴作为研究对象，观察结果�放射免疫测定法放射免疫测定法放射免疫测定法放射免疫测定法：建立在标记抗原和非标记抗原对特异性抗体的竞争性抑制反应；例如I125标记抗体，用于检测未知食品中的SE。�酶联免疫吸附试验酶联免疫吸附试验酶联免疫吸附试验酶联免疫吸附试验：目前应用较广；试剂盒或全自动酶联荧光免疫分析法(VIDAS法)的使用；但是目前只能检测传统的A-E五种血清型。�聚合酶链反应技术聚合酶链反应技术聚合酶链反应技术聚合酶链反应技术：在体内模拟自然DNA的复制过程，对特定的DNA或DNA片段进行快速扩增的方法，研究报道此法可对致病因子进行快速准确的检测；�酶联免疫吸附法（Enzyme-linkedEnzyme-linkedEnzyme-linkedEnzyme-linkedImmunosorbentImmunosorbentImmunosorbentImmunosorbentAssayAssayAssayAssay，ELISAELISAELISAELISA）是一种基于抗原抗体免疫反应的快速检测方法，其基本原理是把抗体预先包被在固体微孔表面，然后依次加入样本和酶标抗体，使其与结合在固相载体上的抗体进行特异性反应，形成“三明治”的抗原抗体复合物结构，最后加入酶反应底物后，底物能被酶催化变成有色产物，颜色反应的深浅与样品中相应的抗原量呈正相关。利用肉眼就可以根据颜色的深浅进行定性分析，或者也可以使用酶标仪进行定量测定。由于酶的高效性催化，能放大免疫反应的结果，故其灵敏度很高，是一种经典的免疫学检测方法。�AOAC官方标准：OMA993.0VIDASVIDASVIDASVIDAS葡萄球菌肠毒素((((SET2)SET2)SET2)SET2)Ref30705Ref30705Ref30705Ref30705名字::::VIDASStaphenterotoxinIIVIDASStaphenterotoxinIIVIDASStaphenterotoxinIIVIDASStaphenterotoxinII葡萄球菌肠毒素代码::::SET2SET2SET2SET2货号::::30705307053070530705包装::::30303030检测说明::::检测食品中的葡萄球菌肠毒素实验时间::::80808080分钟出结果时间::::1111天认证::::AOACAOACAOACAOAC500500500500µµµµL:80L:80L:80L:80分钟25g25g25g25g加入到25mL25mL25mL25mL提取缓冲液,,,,高速搅拌3min3min3min3min混合均匀15min@15min@15min@15min@室温离心15mn@3.000-5.000g15mn@3.000-5.000g15mn@3.000-5.000g15mn@3.000-5.000g用塞有润湿的脱脂棉的注射器抽取上层液体检测pH(7.5to8)pH(7.5to8)pH(7.5to8)pH(7.5to8)VIDASSET2VIDASSET2VIDASSET2VIDASSET2VIDASSET2VIDASSET2VIDASSET2VIDASSET2PCRPCRPCRPCR法测定金葡中致病因子法测定金葡中致病因子法测定金葡中致病因子法测定金葡中致病因子0102030405060708090100SEASECSEGSEJetdTSST-1致病因子基因类型含各致病因子的菌株%食品中分离的金黄色葡萄球菌中致病因子的分布情况食品中分离的金黄色葡萄球菌中致病因子的分布情况食品中分离的金黄色葡萄球菌中致病因子的分布情况食品中分离的金黄色葡萄球菌中致病因子的分布情况定量方法定量方法计计计计计计计计数数数数数数数数标标标标标标标标准准准准准准准准第二法：第二法：第二法：第二法：第二法：第二法：第二法：第二法：BairdParkerBairdParkerBairdParkerBairdParkerBairdParkerBairdParkerBairdParkerBairdParker增加了计算公式增加了计算公式增加了计算公式增加了计算公式增加了计算公式增加了计算公式增加了计算公式增加了计算公式第第第第第第第第三三三三三三三三法：法：法：法：法：法：法：法：MPNMPNMPNMPNMPNMPNMPNMPN法法法法法法法法新增加新增加新增加新增加新增加新增加新增加新增加介绍介绍介绍介绍介绍介绍介绍介绍PetrifilmPetrifilmPetrifilmPetrifilmPetrifilmPetrifilmPetrifilmPetrifilmTMTMTMTMTMTMTMTM测试片法测试片法测试片法测试片法测试片法测试片法测试片法测试片