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2，4-D和磺胺二甲基嘧啶残留ELISA检测试剂盒的研制作者：李会娜学位授予单位：沈阳农业大学相似文献(10条)1.期刊论文张改平.刘庆堂.邓瑞广.杨苏珍.李学伍.赵东.邢广旭.ZHANGGai-ping.LIUQing-tang.DENGRui-guang.YANGSu-zhen.LIXue-wu.ZHAODong.XINGGuang-xu磺胺二甲基嘧啶残留快速检测阻断ELISA试剂盒的研制及其性能测定-中国预防兽医学报2009,31(1)应用磺胺二甲基嘧啶(SM2)单克隆抗体(mAb)成功研制出SM2残留快速检测阻断ELISA试剂盒(SM2-Kit).研究结果表明,SM2-Kit的标准曲线呈典型的S型,相关系数R2=0.9911,符合4参数logit曲线拟合,线性检测范围为0.625μg/L～80μg/L,灵敏度为0.9μg/L,半数抑制浓度(IC50)为5.82μg/L,检测限为1μg/L;饲料样、猪尿样的平均添加回收率分别为83.4%、89.5%,平均批内和批间变异系数均低于15%;SM2-Kit与磺胺甲基嘧啶的交叉反应率(CR%)为2.08%,与其它磺胺类药几乎没有反应性;基质对SM2-Kit的检测结果影响不大;试剂盒在4℃可保存6个月.2.期刊论文张伟.钟理.许若丹.赵美玲.吴策.ZHANGWei.ZHONGLi.XURuo-dan.ZHAOMei-ling.WUCe磺胺二甲基嘧啶人工抗原合成及多克隆抗体制备-河北农业大学学报2005,28(6)磺胺二甲基嘧啶(SM2)为只具有反应原性而无免疫原性的半抗原.本试验将SM2重氮化后分别连接人血清白蛋白(HSA)、卵清蛋白(OVA),合成人工抗原,经紫外光谱扫描验证偶联结果,计算结合比分别为4∶1、3∶1.用偶联物SM2-HSA免疫新西兰白兔,以SM2-OVA为包被原,4次免疫后ELISA方法测定抗血清效价为1∶12800.表明抗原合成成功,这为小分子药物残留的免疫学检测奠定了技术基础.3.学位论文冯春花磺胺二甲基嘧啶单克隆抗体的制备及免疫学快速检测方法的建立2009磺胺类药物（sulfonamides，SAs）在临床上主要用于预防和治疗细菌感染性疾病，还常作为饲料添加剂在动物生产中长期应用。然而过量使用会引起人过敏性反应，且可能有致癌性，因此在动物性食品中残留引起生态环境污染和人类健康危害的潜在威胁已倍受关注，而磺胺二甲基嘧啶（SM2）在磺胺类药物的使用中占有很大比例。因此，研究出一种操作简便、快速、灵敏的测定SAs残留的方法，对于畜产品的安检具有实际意义。本研究在分析磺胺二甲基嘧啶分子结构和免疫原性的基础上，运用单克隆抗体技术生产了单抗，并组装了其免疫学快速检测试剂盒。主要研究结果如下：1.用重氮化方法将SM2偶联于牛血清白蛋白（BSA）和鸡卵清蛋白（OVA），合成了人工免疫原BSA-SM2和包被抗原OVA-SM2，通过紫外（UV）、SDS-PAGE和免疫小鼠后抗血清的ELISA鉴定，表明BSA-SM2偶联成功，获得了高价、敏感、特异的抗血清。2.用BSA-SM2免疫Balb/C小鼠5只，4次免疫后用间接ELISA和阻断ELISA选择出细胞融合备用小鼠2只，应用细胞融合技术筛选出2H10、2E2、2A10、2G5共4株敏感特异的杂交瘤细胞，用体内诱生腹水法制备SM2mAb，经鉴定，其间接ELISA效价细胞培养上清分别为1：6.4×102、1：6.4×102、1：3.2×102、1：3.2×102，腹水效价分别为1：1.28×105、1：6.4×104、1：3.2×105、1：2.56×105，其中亲和力最高的2G5株阻断ELISA测定其IC50为5.82ng/ml。3.应用SM2mAb，依据酶联免疫吸附试验原理，组装了SM2残留快速检测阻断ELISA试剂盒。SM2-Kit的标准曲线呈S型，符合4参数logit曲线拟合，线性检测范围为0.625～80μg/L。灵敏度为0.9μg/L，半数抑制浓度（IC50）为5.82μg/L，检测限为1μg/L；饲料样、猪尿样的平均添加回收率分别为83.4％、89.5％，平均批内和批间变异系数均低于15％；SM2-Kit与磺胺甲基嘧啶的交叉反应率（CR％）为2.08％，与其它磺胺类药几乎没有反应性；基质对SM2-Kit的检测结果影响不大；本试验制备的SM2-Kit特异性较高，可用于SM2及其同系物的残留检测。试剂盒在4℃可保存6个月。4.期刊论文贺亮.李继昌.徐世文.霍贵成.丁良君.刘宁.HELiang.LIJi-chang.XUShi-wen.HUOGui-cheng.DINGLiang-jun.LIUNing磺胺二甲基嘧啶残留检测ELISA方法的研究-中国预防兽医学报2007,29(12)本实验对磺胺二甲嘧啶残留检测ELISA反应的各种条件进行了筛选优化,建立了直接竞争ELISA检测方法,该法最小检出量为1.97ng/mL,检测范围5ng/mL～200ng/mL,样品添加回收率为73.20%～91.16%,批内变异系数＜5.5%,批间变异系数＜9%.与美国进口MaxSignal试剂盒相比较,灵敏度为100%,特异性为96.0%,两者的符合率为98.3%.5.学位论文杨珂磺胺二甲基嘧啶残留物酶联免疫检测试剂盒的研制及初步应用2007磺胺二甲基嘧啶作为一种人工合成的广谱抗菌药，主要用于治疗细菌感染性疾病，并作为饲料添加剂在畜禽动物性食品的生产中被广泛应用，但是过量使用会导致在食用动物性产品中残留，给人类健康带来潜在威胁。目前国内针对磺胺二甲基嘧啶残留的免疫检测方法主要为酶联免疫吸附法(ELISA)，但是所用的检测试剂盒多为进口产品，成本较高，因此本研究旨在建立一种快速、准确的磺胺二甲基嘧啶免疫检测方法。本研究采用重氮耦合法制备磺胺二甲基嘧啶(SM,2)与鸡卵清蛋白(OVA)的偶联物(SM,2-OVA)并以其作为包被抗原对5株抗SM,2的单克隆抗体进行ELISA测定，然后以特异性反应强的4D5a作为竞争反应抗体，建立了检测磺胺二甲基嘧啶残留的直接竞争法ELISA，并对该方法的灵敏度、特异性、准确性、重复性进行了测定。结果表明，此方法的灵敏度为5.82ng/mL，低于国家以及国际规定的磺胺二甲基嘧啶最高残留量标准25ng/mL，当样品浓度在10ng/mL～500ng/mL范围内时可以得到比较可靠的检测结果。与磺胺甲氧嗪(SMP)的交叉反应率为2.62％，与磺胺嘧啶(SD)的交叉反应率为4.11％，与磺胺吡啶(SP)的交叉反应率为0.67％，与磺胺二甲氧嘧啶(SDM)的交叉反应率为1.74％，与磺胺甲基嘧啶(SM)的为交叉反应率12.92％。牛奶添加标准品回收率平均值为131.06％，猪肉添加标准品回收率平均值为122.36％。批内检测变异系数在4.00％-11.24％范围内，批间检测变异系数在4.37％-7.23％范围内。经用该法检测灌胃SM,2小鼠的血清样品，结果符合SM,2预期残留浓度；与R-Biopharm公司的RIDASCREENSulfamethazinELISAkit对比测定显示两者基本相当。6.期刊论文黄学泓.陈燕勤.梁希扬.HuangXue-hong.ChenYan-qin.LiangXi-yang酶联免疫分析法测定水产品中磺胺二甲基嘧啶残留量-中国卫生检验杂志2008,18(11)目的:建立测定水产品中磺胺二甲基嘧啶残留量的ELISA分析法.方法:对不同样品采用不同的前处理方法,用ELISA方法进行检测.结果:方法检测低限为:10ug/kg;在10ug/kg和20ug/kg两个添加水平,样品加标平均回收率分别为74.0%～100.0%和82.0%～102.0%;重复性试验:RSD分别为3.5%～4.9%和4.5%～5.8%;重现性试验:RSD分别为5.4%和4.9%.结论:本方法灵敏度、准确度和精密度均符合残留分析质量控制的要求,适用于水产品中磺胺二甲基嘧啶残留量的快速检测.7.学位论文郝钢磺胺二甲基嘧啶单克隆抗体的制备及免疫学检测方法的建立2009目的：制备小分子药物磺胺二甲基嘧啶(SMZ)单克隆抗体并建立其免疫学检测方法。方法：选用经磺胺二甲基嘧啶-牛血清白蛋白偶联物(SMZ-BSA)免疫的Ballb/c小鼠，取其脾细胞与SP2/O骨髓瘤细胞进行细胞融合。用有限稀释法进行一次亚克隆，得到一株特异性分泌SMZ抗体的杂交瘤细胞，定名为4A6E6。通过体内诱生腹水法制备单克隆抗体，收集腹水并进行纯化。利用制备的抗体建立间接竞争性酶联免疫吸附试验(ELISA)、胶体金试纸条、微球-悬液芯片、三种检测SMZ残留的方法。结果：(1)经纯化后抗体浓度为0.3mg/ml，效价为1：32000。(2)间接竞争ELISA的检测限为0.4ng/ml，IC50为4.6ng/ml，检测范围为1-100ng/ml。与其他药物(磺胺嘧啶、磺胺二甲氧嗪、磺胺甲基嘧啶、磺胺间甲氧嘧啶、磺胺甲(口恶)唑、庆大霉素)交叉反应率小于0.01％，10ng/ml添加时回收率为86.0％；50ng/ml添加时回收率为96.6％。(3)用该抗体制备的胶体金试纸条检测限为25ng/ml。(4)通过微球-悬浮芯片技术建立的竞争性微球检测方法确定的检测限可达到0.05ng/ml，检测范围为0.1-5ng/ml，10ng/ml添加时回收率为113.9％；50ng/ml添加时回收率为80.5％。结论：本课题制备的磺胺二甲基嘧啶单克隆抗体特异性强、效价高；使用制备的抗体建立了磺胺二甲基嘧啶牛奶样品中残留检测方法。8.期刊论文吕琦.王泽华.邓双胜.马岚.LVQi.WANGZe-hua.DENGShuang-sheng.MALan磺胺甲基嘧啶和磺胺二甲基嘧啶单克隆抗体的制备和鉴定-云南大学学报（自然科学版）2007,29(6)为建立磺胺类药物残留的免疫化学分析方法,利用磺胺甲基嘧啶(SM)、磺胺二甲基嘧啶(SM2)分子结构中的芳香氨基,采用重氮反应和戊二醛法将其与载体蛋白(牛血清白蛋白和鸡卵清蛋白)交联制备抗原,最终获得5株抗SM和18株抗SM2杂交瘤细胞株.对杂交瘤细胞株的核型、抗体的亚类和轻链型、抗体的异相包被ELISA反应性以及抗体的竞争反应性和交叉反应性进行了分析和评价.其中SM抗体11C8结合SM的竞争抑制质量浓度IC50为14.1μg/L,与类似物SD的交叉反应性接近20%,但与其他类似物低于10%.SM2抗体中的6株抗体的竞争抑制质量浓度IC50在38.8～70.0μg/L范围内,2B7,4D5,13C9,14C5和16C2抗体与类似物SM的交叉反应性达到73.5%～132.9%,而15D10抗体与SM的交叉反应性低于5%.因此,本研究所获得的磺胺甲基嘧啶和磺胺二甲基嘧啶抗体,可用于SM和SM2残留的免疫分析方法研究和应用.9.学位论文李学伍莱克多巴胺及磺胺二甲基嘧啶免疫学快速检测技术研究2009莱克多巴胺属于β-受体激动剂家族苯乙胺类成员之一，此类化合物因其具有促进和提高动物生长效率而受关注，莱克多巴胺在增加猪日增重、提高胴体瘦肉率、增加饲料转化、降低脂肪的积聚、缩短饲养周期等方面具有强大的功效。莱克多巴胺常被猪场作为饲料添加剂使用，莱克多巴胺的非法使用，导致了其在动物体内的蓄积性残留，引发人体的急性食物中毒。因此，我国及欧盟各国政府禁止进口含有Rac的肉品，并明确规定禁止使用Rac作为促生长剂。为了控制和预防猪的某些疾病、促进猪的生长，磺胺二甲基嘧啶常常被添加在猪的饲料之中，磺胺二甲基嘧啶在饲喂动物的组织中具有蓄积作用，猪组织中磺胺二甲基嘧啶的残留，对消费者而言将是一种潜在的危害，可引起过敏反应、干扰肠道菌群并诱生抗性菌群，从而导致抗生素的疗效下降。磺胺二甲基嘧啶还是一种可疑的致癌物，研究表明高浓度的磺胺二甲基嘧啶可以引起鼠的甲状腺瘤。FDA规定了磺胺二甲基嘧啶的休药期为15d，并设定了磺胺二甲基嘧啶在组织中的最高残留限量为100ng/g。近年来，磺胺二甲基嘧啶及莱克多巴胺残留已成为人们共同关注的重大问题。br 以GC