979例自身免疫性疾病抗核抗体与抗ENA抗体联合检测的结果分

分子诊断与治疗杂志2009年9月第1卷第3期JMolDiagnTher,September2009,Vol.1No.3979例自身免疫性疾病抗核抗体与抗ENA抗体联合检测的结果分析李霞梅冰王昌富★[摘要]目的回顾本实验室开展抗核抗体（antinuclearantibody,ANA）与抗可提取性核抗原（extractablenuclearantigens,ENA）抗体联合检测的情况，分析两者之间的相关性，并探讨联合检测在自身免疫性疾病中的应用价值。方法间接免疫荧光法检测ANA，生物芯片技术检测抗ENA（ds-DNA、Sm、SS-A/Ro、SS-B/La、u1RNP、Scl-70、Jo-1、RibosomalP）抗体，并采用双盲法分析ANA阳性标本的荧光核型与抗ENA抗体的关系。结果979例临床标本中，ANA阳性的标本数为400例，阳性率为40.9%（400/979）。荧光核型主要是核颗粒型（249例）、核均质型（83例）、胞浆颗粒型（30例），同时对979例标本进行抗ENA抗体的检测，阳性标本数为199例，阳性率为20.3%（199/979），只有1例阳性出现在ANA阴性的标本中。在400例ANA阳性的标本中，抗ENA抗体的阳性率为49.5%（198/400），出现较多的阳性抗体是抗SS-A/Ro（133例）、抗RibP（78例）、抗u1RNP（70例）、抗ds-DNA（61例）、抗SS-B/La（40例）等抗体，主要与颗粒型荧光相关。而均质型ANA标本中，常见的抗ENA抗体是抗ds-DNA（37例）、抗SS-A/Ro（27例）、抗Jo-1（20例）、抗RibP（20例）等抗体。结论不同荧光核型的ANA与抗ENA抗体之间的关系有各自的特点。用间接荧光法筛查ANA，并联合抗ENA抗体谱进行分型，可以确定部分ANA靶抗原的类型，进一步扩展抗ENA抗体谱，才能准确确定靶抗原。[关键词]抗核抗体；抗ENA抗体；荧光核型Analysisoftheresultsofantinuclearantibodyandanti-ENAantibodiesfor979patientsofautoimmunediseaseswithIIFandbiochiptechnologyLIXia,MEIBing,WANGChangfu★（DepartmentofClinicalLaboratory,AffiliatedJingzhouHospital,TongjiMedicalCollege,HuazhongUniversityofScienceandTechnology,Hubei,Jingzhou434020,China）[ABSTRACT]ObjectiveToanalyzetherelationshipbetweenantinuclearantibody(ANA)andanti-extractablenuclearantigens(ENA)antibodiesinautoimmunediseases.MethodsANAandanti-ENA（ds-DNA、Sm、SS-A/Ro、SS-B/La、u1RNP、Scl-70、Jo-1、RibosomalP）antibodiesweredetectedbyindirectimmunofluorescence(IIF)andbiochiptechnology,respectively.ResultsOfallthe979samples,400caseswerepositiveforANA,thepositiveratewas40.9%(400/979).Themajorityofpatternswerespeckledpattern（249cases,62.25%）,homogeneouspattern(83cases,20.75%),andcytoplasmicgranularpattern（30cases,7.5%）,respectively.Anti-ENAantibodiesweredetectedin979casessimultaneously,and199caseswerepositive.Thepositiveratewas20.3%(199/979),andonlyonecaseisnegativeforANA.Ofthe400cases,thepositiverateoftheanti-ENAantibodieswas49.5%.Themostfrequentlyoccurredantibodieswereanti-SS-A/Ro（133cases）,anti-RibP（78cases）,anti-u1RNP（70cases）,anti-ds-DNA（61cases）andanti-SS-B/La（40cases）antibodies,mainlyassociatedwiththespeckledpattern.InthecasesofhomogeneouspatternforANA,thecommonanti-ENAantibodieswereanti-ds-DNA(37cases),anti-SS-A/Ro(27cases),anti-Jo-1(20cases)andanti-RibP(20cases)antibodies.ConclusionInordertoaccuratelydeterminethetargetantigens,itisnecessarytoscreenANAwithIIFandtoconfirmthetypesbyanti-ENAantibodies.作者单位：华中科技大学同济医学院附属荆州医院检验医学部，湖北，荆州434020★通讯作者：王昌富，E-mail：[e-mail]·论著···175分子诊断与治疗杂志2009年9月第1卷第3期JMolDiagnTher,September2009,Vol.1No.3自身免疫性疾病是由多因素引起机体免疫功能紊乱，产生自身免疫应答而造成多系统损害的疾病。抗核抗体（ANA）是具有多种细胞核成分的自身抗体，是以真核细胞的核成分为靶抗原的自身抗体的总称，可用于多种自身免疫性疾病的筛查。随着分子免疫学的发展，抗可提取性核抗原（ENA）抗体的检测也已应用于临床。本文对本科室开展此两项检测的979例检测结果进行回顾性分析，比较两者之间的相关性，并探讨联合检测ANA和抗ENA抗体对自身免疫性疾病的诊断价值。1材料与方法1.1标本来源979例标本均来自我院2007年7月至2009年5月门诊就诊或住院且怀疑有自身免疫性疾病的患者，其中男性211例，女性768例，年龄6～85岁，平均年龄40岁。1.2ANA检测方法ANA采用间接免疫荧光法进行检测，试剂盒来自于德国欧蒙（杭州）医学实验诊断有限公司。每个反应区同时有灵长类肝组织切片和HEP-2细胞。以1∶320比例稀释血清，取25μL稀释好的样本加入生物载片温育30min，冲洗、PBS缓冲液浸泡5min后加入20μLFITC标记的抗人球蛋白抗体，再温育30min，冲洗、PBS缓冲液浸泡5min后在荧光显微镜下观察。如果标本阳性，可观察到特异性荧光。如果HEP-2和大鼠肝细胞均无特异性荧光则判断ANA为阴性。荧光显微镜型号为LeicaDM2500。1.3抗ENA抗体谱检测方法用生物芯片技术进行检测。试剂盒是由南京大渊生物技术有限责任公司提供的自身抗体IgG（8项）检测试剂盒。芯片反应板以微孔滤膜为载体，同时将ds-DNA、Sm、SS-A/Ro、SS-B/La、u1RNP、Scl-70、Jo-1和RibosomalP特异性抗原固化于同一膜片上，利用微孔滤膜的渗滤、浓缩、凝集作用，捕捉被检样本中的特异性IgG抗体，使抗原抗体反应在固相膜上快速进行，形成复合物。复合物与标记有抗人IgG的免疫金试剂作用，在膜上出现红色斑点。经识别仪采集图象，在大渊生物芯片识别软件的支持下对不同点阵的灰度值进行分析并判定结果，实现对8项自身抗体的同步检测。实验操作严格按照使用说明书进行。1.4统计学分析计算各组ANA和抗ENA抗体阳性检出率，组间比较采用χ2检验。2结果2.1ANA阳性标本的核型分析979例临床标本中，ANA阳性标本数为400例，阳性率达到40.9%（400/979）。其核型包括核颗粒型（249例，62.3%）、核均质型（83例，20.8%）、胞浆颗粒型（30例，7.5%）、核仁型（12例，3%）、核少点型和着丝点型（10例，2.5%）、混合型（比如核均质/胞浆颗粒型等）（9例，2.25%）、中心粒型（5例，1.25%）、核膜型（2例，0.5%）。核型阳性率最高的是颗粒型，其次是均质型、胞浆颗粒型等。为便于分析，把这三种荧光核型以外的所有荧光核型归为其它型。2.2不同核型ANA标本中抗ENA抗体阳性率比较颗粒型ANA标本中抗ENA抗体阳性标本数为134例，阳性率达53.8%（134/249），均质型ANA标本中抗ENA抗体阳性的标本数为41例，阳性率达49.4%（41/83），胞浆颗粒型对应的抗ENA抗体的阳性率较低，为16.7%（5/30），其它型ANA标本中抗ENA抗体的阳性率为28.9%（11/38）。抗ENA抗体在颗粒型和均质型ANA标本中的阳性率接近（χ2=0.49，P0.05），并且明显高于在胞浆颗粒型和其它型ANA标本中的阳性率（χ2=20.76，P0.01）。2.3400例ANA阳性标本中抗ENA抗体与各种荧光核型之间的相关分析（见表1）。抗ds-DNA抗体在均质型ANA标本中的阳性率最高（P0.01），说明均质型荧光主要与抗ds-DNA抗体相关。抗SS-A/Ro抗体单项阳性总例数最多，达到133例（33.3%），其核型分布比较分散，但主要表现为核颗粒型与核均质型，且在这两种荧光核型ANA标本中的阳性率无差异（χ2=1.24，P0.05）。抗SS-B/La抗体在各种核型ANA标本中的阳性率没有差异（P0.05），且基本上与抗SS-A/Ro抗体同时出现。抗Scl-70抗体的检出率最低，只有4例阳性（1%），主要表现为核均质型。抗Jo-1抗体在均质型ANA标本中[KEYWORDS]Antinuclearantibody(ANA);Anti-extractablenuclearantigens(ENA)antibody;Fluorescentpattern··176分子诊断与治疗杂志2009年9月第1卷第3期JMolDiagnTher,September2009,Vol.1No.3的阳性率最高，与其它各种核型有明显差异（P0.01）。抗ulRNP抗体在颗粒型ANA标本中的阳性率最高，均质型次之，胞浆颗粒型最低（P0.05）。抗RibosomalP、Sm抗体在各种荧光核型中的阳性率差异无统计学意义（P0.05），且抗Sm抗体主要与抗u1RNP抗体同时出现。3讨论研究结果显示ANA在怀疑自身免疫性疾病患者中的阳性率为40.9%，与文献报道的39.9%相仿[1]。表明用间接免疫荧光法开展ANA的检测对自身免疫性疾病有重要的筛查意义。本实验结果反映不同荧光核型的ANA与抗ENA抗体之间的关系有各自的特点。400例ANA阳性标本中62.3%是颗粒型ANA，主要与抗SS-A/Ro、u1RNP抗体相关。20.8%是均质型ANA，主要与抗ds-DNA、SS-A/Ro、Jo-1抗体相关，且抗SS-A/Ro抗体在这两种荧光核型ANA标本中的阳性率差异无统计学意义。7.5%是胞浆颗粒型ANA，对应的抗ENA抗体的阳性率较低，且只与抗SS-A/Ro、SS-B/La、u1RNP、RibosomalP抗体相关，其原因有待以后做进一步研究。抗Scl-70抗体最常见于皮肤弥漫型多发性系统硬化症（PSS），特异性高，但本文统计抗Scl-70抗体的阳性率最低，与文献报道的不一致[2]。其原因是抗ENA抗体试剂盒对抗Scl-70抗体的敏感性低，还是本地区PSS的发病率低，有待在今后的工作中