大鼠MCP-1ELISA试剂盒

关注生物技术，服务生命科学试剂盒本试剂盒用于定量检测大鼠组织匀浆中的MCP-1的浓度。使用前请仔细阅读说明书并检查试剂组分,若有任何疑问请与嘉美生物联系，您将得到我们的技术支持。欢迎访问嘉美网站：您将得到更多信息。用途：单核细胞趋化蛋白-1（monocytechemotacticprotein1,MCP-1)又称单核细胞趋化和激活因子（monoctyechemotacticandactivatingfactor,MCAF)，属于C-C亚族（β亚族）成员。MCP-1/MCAF起初是从人髓样单核细胞系THP-1、神经胶质瘤细胞系以及LPS或PHA刺激的人PBMC培养上清中发现。目前已知，单核细胞、巨噬细胞、成纤维细胞、内皮细胞、B细胞、平滑肌细胞等在PHA、LPS、PolyI-C、IL-1、IFN-γ、PDGF、EGF或某些病毒刺激下均可被诱导分泌MCP-1。某些肿瘤细胞系则可组成性产MCP-1。人MCP-1/MCAF基因定位于第17对染色体。人MCP-1前体长99个氨基酸，切除23个氨基酸先导序列后形成76氨基酸的成熟分子，为碱性蛋白。非糖基化的MCP-1分子量8.7kDa，经不同糖基化后MCP-1分子量有13kDa两种。MCP-1分子中11与36Cys和12与52Cys之间所形成两个链内二硫键以及Try28和Arg30，对于MCP-1的生物学活性是必需的。在氨基酸水平上，MCP-1与另外两种单核细胞趋化蛋白MCP-2（HC14）和MCP-3（NC28）分别有62%和72%同源性，与C-X-C亚族中IL-8有24%同源性。体内和体外实验均证实了MCP-1对单核细胞具有趋化活性，激活单核细胞和巨噬细胞，使其胞浆内Ca2+浓度升高，超氧阴离子的产生和释放，并释放溶菌酶，上调单核细胞和巨噬细胞粘附分子如integrin家族β2组和α4分子的表达和细胞因子IL-1、IL-6的产生，活化的巨噬细胞可抑制肿瘤细胞的生长。MCP是嗜碱性粒细胞的趋化剂和激活剂，尤其是刺激嗜碱性粒细胞脱颗粒和组胺释放的作用较为强烈。MCP-1与MCP-1R发生特异性的结合，此受体主要分布于单核细胞、髓样前体细胞系和嗜碱性粒细胞，属于IL-8R家族。分布于人红细胞表面的Duffy抗原也可结合MCP-1。风湿性关节炎病人的滑液和组织匀浆中MCP-1水平明显升高，滑液组织巨噬细胞组成性地产生MCP-1，提示MCP-1与风湿性关节炎的病理损伤有关。高胆固醇血症时，动脉内侧平滑肌细胞产生高水平MCP-1，单核细胞粘附于血管壁并浸润动脉壁。肾脏炎症时，IL-1诱导肾小球细胞产生MCP-1。高血脂症时，LDL与肾小球细胞结合，刺激其产生MCP-1，趋化单核细胞在局部浸润。原理：本试剂盒采用双抗夹心ELISA法。抗大鼠MCP-1单抗包被于酶标板上，大鼠标本中的MCP-1会与单抗结合。加入生物素化的抗大鼠MCP-1（二抗），它将与结合在单抗上的大鼠MCP-1结合而形成免疫复合物，未结合的将被洗去。辣根过氧化物酶标记的Streptavidin将与二抗的生物素结合，多余的物质会被洗掉。加入TMB显色。大鼠MCP-1的浓度与OD(450nm)成正比。试剂盒组成：关注生物技术，服务生命科学酶标板(CoatedWells)48wellsAnti-ratMCP-1Biotin1vial浓缩洗涤液(40X)(WashingConcentrate)12.5ml标准品(Standards)1vial显色液(TMBSubstrate)6ml标准品稀释液(StandardDiluent)7ml终止液(StopSolution)5ml浓缩酶联物（HRP）1vial酶联物稀释液(HRPDiluent)7ml生物素稀释液(BiotinantiMCP-1Diluent)7ml需要但未提供的材料1.可在450nm处进行读数的酶标仪；2.能精确吸取10-200µL的移液器；3.可调多道（8）移液器（50－200µL）；4.供可调多道移液器使用的试剂存放槽；5.洗瓶或洗板机；6.蒸馏水或去离子水；7.1升的圆柱形量筒；8.移液器：1和（10或25mL）；9.移液器枪头；10.纸巾；11.计时器，用以监控温育步骤；12.处理池和消毒剂（例如：0.5%次氯酸钠,10%家用漂白水）；注意事项：1.严格按照规定的时间和温度进行温育以保证准确结果。所有试剂都必须在使用前达到室温20-25℃。使用后立即冷藏保存试剂。2.洗板不正确可以导致不准确的结果。在加入HRP或底物前确保尽量吸干孔内液体。温育过程中不要让微孔干燥掉。3.消除板底残留的液体和手指印，否则影响OD值。4.底物显色液应呈无色或很浅的颜色，已经变蓝的底物液不能使用。5.避免试剂和标本的交叉污染以免造成错误结果。6.在储存和温育时避免强光直接照射。7.平衡至室温后再打开密封袋以防水滴凝聚在冷板条上。8.任何反应试剂不能接触漂白溶剂或漂白溶剂所散发的强烈气体。任何漂白成分都会破坏试剂盒中反应试剂的生物活性。9.不能使用过期产品。10.如果可能传播疾病，所有的样品都应管理好，按照规定的程序处理样品和检测装置。保存：关注生物技术，服务生命科学°C。样品：在此检测中，可使用组织匀浆样品。准备工作：1.浓缩洗涤液(40X)用双蒸水稀释成1X（至500ml）。2.标准品用1ml标准品稀释液复溶。得到1500pg/ml的高浓度标准品。高浓度标准品可保存于-20°C。3.将1500pg/ml的高浓度标准品稀释成一组标准品，如：750,375,187.5,93.75,46.875,23.4,11.7,0pg/ml。4.配制1xHRP：一支HRP加入6ml酶联物稀释液，混匀。1xHRP最好在临用前15分钟配制。5.配制1xBiotin：一支BiotinantiratMCP-1加入6mlBiotin稀释液，混匀。1xBiotin最好在临用前15分钟配制。操作步骤：试剂盒应平衡至室温（20-25°C）再试验。取出所需反应板。临用前15分钟配制工作液1.加入100ul标准品(Standards)、100ul标本于相应反应板孔中。2.轻轻混匀30秒，封住板孔，37°C温育60分钟。3.洗板：甩尽板内液体，用洗涤液洗涤反应板（每孔内加入350ul洗涤液），并去除水滴（在厚叠吸水纸上拍干）；反复洗涤5次。4.每孔加入100ul1xBiotin。轻轻混匀30秒，封住板孔，37°C温育60分钟5.洗板：甩尽板内液体，用洗涤液洗涤反应板（每孔内加入350ul洗涤液），并去除水滴（在厚叠吸水纸上拍干）；反复洗涤5次。6.每孔加入100ul1xHRP。轻轻混匀30秒，封住板孔，37°C温育30分钟7.洗板：甩尽板内液体，用洗涤液洗涤反应板（每孔内加入350ul洗涤液），并去除水滴（在厚叠吸水纸上拍干）；反复洗涤5次。8.每孔加入100ulTMB显色液，轻轻混匀10秒，37°C暗处温育15±10分钟。9.每孔加入100ul终止液（StopSolution)。轻轻混匀30秒；30分钟内在450nm处读OD值。以OD值为纵坐标，以标准品浓度为横坐标，绘制标准曲线。根据样品的OD值可在标准曲线上查出其浓度。举例：关注生物技术，服务生命科学(pg/ml)OD(450nm)注意事项：1.作标准曲线时，要扣除标准品稀释液造成的本底；如果标本用标准品稀释液稀释，也要扣除标准品稀释液造成的本底，如果标本未用标准品稀释液稀释，标本不需扣除标准品稀释液造成的本底。2.生物素(BiotinantiratMCP-1)和浓缩酶联物(HRP)用前应离心，使液体位于管底。