PTEN在食管癌中的表达及其与微血管密度和临床病理特征的关系

[e-mail]20091018;17(29):3023-3027ISSN1009-3079CN14-1260/RCLINICALPRACTICEPTEN在食管癌中的表达及其与微血管密度和临床病理特征的关系CorrelationofPTENexpressionwithmicrovesseldensityandpathologicalparametersinesophagealcarcinomaYong-MeiQin,YuHan,Chao-XianZhang,Ting-MinChangYong-MeiQin,YuHan,Chao-XianZhang,Ting-MinChang,DepartmentofGastroenterology,theFirstAffili-atedHospitalofXinxiangMedicalCollege,Weihui453100,HenanProvince,ChinaSupportedby:theFondationoftheScienceandTecnologyDepartmentofHenanProvince,No.0524410055Correspondenceto:Yong-MeiQin,DepartmentofGas-troenterology,theFirstAffiliatedHospitalofXinxiangMedicalCollege,Weihui453100,HenanProvince,[e-mail]:2009-07-23Revised:2009-09-26Accepted:2009-09-28Publishedonline:2009-10-18AbstractAIM:ToinvestigatetheexpressionofPTENandanalyzeitscorrelationwithmicrovesseldensity(MVD)andpathologicalparametersinesophagealsquamouscellcarcinoma(ESCC).METHODS:Forty-eightESCCspecimensand40normalesophagealtissuescloselyadjacenttocarcinomaswereusedinthestudy.Theexpres-sionofPTENandCD31inthesespecimenswasdetectedbyimmunohistochemistryusingthestreptavidin-peroxidasemethod.RESULTS:ThepositiverateofPTENexpres-sioninESCCwassignificantlylowerthanthatinnormalesophagealtissue(52.08%vs92.50%,P0.01).ThepositiverateofPTENexpressioninESCCwascorrelatedwithpathologicalgrade(GradeI:75.0%;GradeII;55.0%;andGradeIII:33.33%;allP0.05),infiltrativedeepness(su-perficialinfiltration:77.27%;deepinfiltration:42.31%,P0.01),butnotwithlymphnodeme-tastasis.TheMVDwassignificantlyhigherinESCCthaninnormalesophagealtissue(41.72±8.67vs21.01±3.85,P0.01).TheMVDinESCCwascorrelatedwithinfiltrativedeepness(super-ficialinfiltration:35.49±5.89;deepinfiltration:46.01±6.27,P0.01)andlymphnodemetasta-sis(46.71±7.89vs35.92±2.54,P0.01),butnotwithpathologicalgrade.CONCLUSION:PTENexpressionandMVDinesophagealcarcinomaarerelatedtotumorgrowth,invasionandmetastasis.Lossorde-creasedexpressionofPTENplaysacriticalroleintumorangiogenesis.PTENexpressioncanbeusedasadiagnosticandprognosticmarkerforESCC.KeyWords:Esophagealsquamouscellcarcinoma;Tumorsuppressorgene;PTEN;Microvesselden-sity;ImmunohistochemistryQinYM,HanY,ZhangCX,ChangTM.CorrelationofPTENexpressionwithmicrovesseldensityandpathologicalparametersinesophagealcarcinoma.ShijieHuarenXiaohuaZazhi2009;17(29):3023-3027目的:PTEN,(MVD).方法:48,40.SPPTEN,CD31、,PTENMVD、、.®背景资料PTENp53、pRb、p16,、、,、.,,.同行评议者,,结果:PTEN(52.08%vs92.50%,P0.01),MVD(41.72±8.67vs21.01±3.85,P0.01);、、PTEN(75.0%vs55.0%vs33.33%,P0.05),MVD;PTENMVD(77.27%vs42.31%;35.49±5.89vs46.01±6.27,P0.01);PTEN,MVD(46.71±7.89vs35.92±2.54,P0.01).结论:PTEN、MVD,、.PTEN,.关键词引言抑癌基因PTEN定位于人类染色体10q23.3,是双特异性磷酸酶,其开放阅读框中有酪氨酸结构域及细胞骨架蛋白(tensin)和辅助蛋白(auxilin)的同源氨基酸序列.已有研究证实PTEN在多种进展期、转移性肿瘤如脑肿瘤、乳腺癌、膀胱癌等发生高频率突变或缺失,可能其参与细胞生长调节,并在肿瘤细胞浸润、血管发生及肿瘤转移中起一定作用[1-3].本研究采用免疫组织化学方法检测食管鳞癌中PTEN的表达,同时计算微血管密度(microvesseldensity,MVD),旨在探讨PTEN表达情况及与MVD和临床病理特征的关系.1材料和方法1.1收集新乡医学院第一附属医院2005-01/2007-01临床和病理资料完整的存档组织标本,原发性食管鳞癌48例,手术远端正常食管组织40例.其中男36例,女12例,年龄41-79(平均58)岁.所有患者术前均未接受化疗、放疗及其他特殊治疗.所有标本均经中性甲醛液固定,石蜡包埋,连续切片,每份标本均行HE染色对照.3024ISSN1009-3079CN14-1260/R经组织学证实:Ⅰ级鳞癌16例,Ⅱ级鳞癌20例,Ⅲ级鳞癌12例;浸润浅肌层以上22例,深肌层以下26例;有淋巴结转移16例,无淋巴结转移32例.1.21.2.1SP:鼠抗人PTENmAb及SP试剂盒均为SanataCruz公司产品.用PBS代替一抗作阴性对照,以正常胃腺上皮作阳性对照.体积分数0.3%甲醇过氧化氢阻断内源性过氧化物酶,滴加PTENmAb,4℃湿盒内过夜,滴加生物素标记二抗孵育,滴加三抗工作液,均以PBS冲洗,DAB显色.鼠抗人CD31mAb(克隆系1A10)标记内皮细胞,免疫组织化学单染通用二步法(PV-9000)试剂盒,DAB显色,试剂均购自北京中杉金桥生物技术有限公司.1.2.2:PTEN蛋白以细胞质或细胞核出现棕黄色或淡黄色颗粒判断为阳性细胞.每张切片随机观察染色清晰的10个高倍视野(×400),计数1000个细胞,求阳性细胞百分率,PTEN阳性细胞数≤10%为阴性(-);11%-50%为弱阳性(+),51%-75%为中度阳性(++),75%为强阳性(+++).阳性细胞数为50%.MVD按Weider判定法[4],通过光镜下计数CD31染色阳性的血管内皮完成.在高倍镜下(×400)分别计数3个视野,取3个视野下的平均数表示MVD值.每一个染成棕黄色的可与周围血管、肿瘤细胞和其他结缔组织分开的内皮细胞或内皮细胞簇被判定为1个微血管.正常对照组的血管计数主要在上皮层的下方进行.采用SPSS12.0分析软件包进行统计学分析,χ2检验比较各组间率的差异,计量资料采用方差分析、t检验、q检验,PTEN与MVD的关系用Spearman相关分析.P0.05为差异有统计学意义.2结果2.1PTEN、PTEN阳性颗粒呈棕黄色,主要位于细胞核内.48例食管鳞癌中PTEN蛋白阳性表达率为52.08%(25/48),显著低于癌旁正常食管黏膜92.50%(37/40),差异有统计学意义(χ2=15.234,P0.01,图1).2.2PTENPTEN表达与食管癌的分化程度、浸润深度相关.癌组织分化程度越低,PTEN阳性率越低,在Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ级鳞癌组织中的表达率各组间差异有统计学意义(P0.05).侵及深肌层的表、、,、.3025达率低于侵及浅肌层以上者(P0.05).但淋巴结转移组与无淋巴结转移组表达率差异无统计学意义(P0.05,表1).2.3CD31CD31阳性染色呈棕黄色,定位于血管内皮细胞膜,癌组织中微血管呈条索状,内皮细胞簇集,管腔形态不完整,癌灶边缘血管相对密集;正常组织中血管比较规则、稀少,分布较均匀(图2).鳞癌组织中MVD值显著高于正常黏膜组织(P0.01).鳞癌组中侵及浅肌层以上组MVD显著低于侵及深肌层组(t=5.9539,P0.01),无淋巴结转移组显著低于淋巴结转移组(t=7.0989,P0.01).Ⅰ-Ⅲ级鳞癌中MVD值依次增高,但差异无统计学意义(表2).2.4PTENMVD经Spearman相关分析,PTEN表达与MVD之间呈负相关(r=-0.522,P0.01).3讨论食管癌的发生、发展是个多步骤、多因素的复杂过程,在此过程中,抑癌基因的缺失或表达失调是食管癌发生发展的重要原因之一.PTEN是继p53、pRb、p16后又一重要抑癌基因.PTEN基因是Lietal[1]1997年从原发性乳腺癌、前列腺癌以及胶质母细胞瘤细胞株克隆得到的,一BA图2食管鳞癌中CD31表达.BA图1食管高分化鳞癌中PTEN阳性表达.表1PTEN蛋白表达与食管鳞癌临床病理特征的关系临床病理参数nPTEN表达(n)阳性率(%)χ2值P值阳性阴性表2MVD与食管鳞癌临床病理特征的关系临床病理参数nMVDχ2值P值应用要点PTENMVD,,.种迄今为止唯一具有酪氨酸、磷酸丝氨酸/苏氨酸双特异性磷酸酶活性的新型抑癌基因.其编码蛋白即蛋白酪氨酸磷酸酶,酪氨酸磷酸化后是细胞生长刺激途径的一部分,蛋白酪氨酸磷酸酶能使蛋白中的酪氨酸去磷酸,故PTEN基因的缺失、突变及表达产物的失活等均可影响肿瘤的发生发展[2-3],PTEN的抑癌功能主要依赖于脂质磷酸酶活性[5].同时PTEN具有与细胞张力蛋白和辅助蛋白同源的序列,可以使其在局灶黏附点与肌动蛋白结合,与该位点的复合物(包括整合素、局灶黏附激酶FAK、Src、酪氨酸激酶及生长因子受体)相互作用,在肿瘤细胞浸润、肿瘤转移中起到一定作用[6].目前