NYT 4262-2022 肉及肉制品中7种合成红色素的测定 液相色谱-串联质谱法

20221111发布－－20230301－－实施肉及肉制品中7种合成红色素的测定液相色谱-串联质谱法42中华人民共和国农业行业标准备案号：XXXX-XXXXＩＣＳ67.120.10CCSX4262—2022Determinationofsevensyntheticredpigmentsinmeatandmeatproducts—Liquidchromatography-tandemmassspectrometryＮＹ／Ｔ中华人民共和国农业农村部发布NY/T４２６２—２０２２前　　言本文件按照GB/T１􀆰１—２０２０«标准化工作导则　第１部分:标准化文件的结构和起草规则»的规定起草.本文件由农业农村部乡村产业发展司提出.本文件由农业农村部农产品加工标准化技术委员会归口.本文件起草单位:中国农业科学院农产品加工研究所、农业农村部农产品及加工品质量监督检验测试中心(北京)、中国计量科学院化学计量与分析科学研究所、北京市动物疫病预防控制中心、山西省动物疫病预防控制中心、新疆生产建设兵团畜牧兽医工作总站,浙江工业大学.本文件主要起草人:单吉浩、刘晓庆、韩向新、毋婷、王雨、周绪霞、李建勋、徐迪、马康、夏双酶、隋福顺、卢培培、周晓倩、何月新.ⅠNY/T４２６２—２０２２肉及肉制品中７种合成红色素的测定　液相色谱Ｇ串联质谱法１　范围本文件规定了肉及肉制品中苏丹红Ⅰ、苏丹红Ⅱ、苏丹红Ⅲ、苏丹红Ⅳ、苏丹红G、苏丹红７B、对位红７种合成红色素测定的制样和液相色谱Ｇ串联质谱测定方法.本文件适用于猪肉、牛肉、羊肉和禽肉及肉制品中７种合成红色素含量的测定.２　规范性引用文件下列文件中内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款.其中,注日期的引用文件,仅该日期对应的版本适用于本文件;不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件.GB/T６６８２　分析实验室用水规格和试验方法３　原理试样中的７种合成红色素经乙腈提取,净化柱快速净化后,液相色谱Ｇ串联质谱仪检测,内标法定量.４　试剂或材料除另有规定外,所有试剂均为分析纯,水为符合GB/T６６８２规定的一级水.４􀆰１　试剂４􀆰１􀆰１　乙腈(CH３CN):色谱纯.４􀆰１􀆰２　甲酸(HCOOH):色谱纯.４􀆰１􀆰３　无水硫酸镁(MgSO４).４􀆰１􀆰４　氯化钠(NaCl).４􀆰１􀆰５　乙酸铵(CH３COONH４).４􀆰２　溶液配制４􀆰２􀆰１　乙酸铵溶液(５mol/L):称取乙酸铵(４􀆰１􀆰５)３８􀆰５１g,用水溶解并稀释定容至１００mL,混匀即可.４􀆰２􀆰２　０􀆰１％甲酸Ｇ乙酸铵(５mmol/L)溶液:取１mL甲酸(４􀆰１􀆰２)和５mol/L乙酸铵溶液(４􀆰２􀆰１)１mL,用水稀释至１L,混匀即可.４􀆰３　标准品４􀆰３􀆰１　７种合成红色素对照品:苏丹红Ⅰ(SudanⅠ,C１６H１２N２O,CAS号:８４２Ｇ０７Ｇ９)、苏丹红Ⅱ(SudanⅡ,C１８H１６N２O,CAS号:３１１８Ｇ９７Ｇ６)、苏丹红Ⅲ(SudanⅢ,C２２H１６N４O,CAS号:８５Ｇ８６Ｇ９)、苏丹红Ⅳ(SuＧdanⅣ,C２４H２０N４O,CAS号:８５Ｇ８３Ｇ６)、苏丹红G(SudanRedG,C１７H１４N２O２,CAS号:１２２９Ｇ５５Ｇ６)、苏丹红７B(SudanRed７B,C２４H２１N５,CAS号:６３６８Ｇ７２Ｇ５)、对位红(ParaRed,C１６H１１N３O３,CAS号:６４１０Ｇ１０Ｇ２),含量均≥９５􀆰０％.４􀆰３􀆰２　６种氘代合成红色素对照品(内标):苏丹红ⅠＧD５、苏丹红ⅡＧD６、苏丹红ⅢＧD６、苏丹红ⅣＧD６、苏丹红GＧD３、对位红ＧD４,含量均≥９０􀆰０％.分别对应为苏丹红Ⅰ、苏丹红Ⅱ、苏丹红Ⅲ、苏丹红Ⅳ、苏丹红G、对位红的内标,苏丹红７B对应的内标为苏丹红ⅣＧD６.４􀆰４　标准溶液制备４􀆰４􀆰１　合成红色素标准储备液:分别精密称取苏丹红Ⅰ、苏丹红Ⅱ、苏丹红Ⅲ、苏丹红Ⅳ、苏丹红G、苏丹红７B、对位红７种合成红色素对照品(４􀆰３􀆰１)适量(精确至０􀆰１mg,扣除折算纯度后的实际质量),分别于１NY/T４２６２—２０２２１００mL容量瓶中,用乙腈(４􀆰１􀆰１)溶解并稀释至刻度,分别配制成浓度为１００μg/mL的７种合成红色素标准储备液,于－１８℃以下保存,有效期６个月.４􀆰４􀆰２　氘代合成红色素内标储备液:分别精密称取苏丹红ⅠＧD５、苏丹红ⅡＧD６、苏丹红ⅢＧD６、苏丹红ⅣＧD６、苏丹红GＧD３、对位红ＧD４等６种氘代合成红色素对照品(４􀆰３􀆰２)适量(精确至０􀆰１mg,扣除折算纯度后的实际质量),分别于１００mL容量瓶中,用乙腈(４􀆰１􀆰１)溶解并稀释至刻度,分别配制成浓度为１００μg/mL的６种氘代合成红色素内标储备液,于－１８℃以下保存,有效期６个月.４􀆰４􀆰３　合成红色素混合标准中间液(１０μg/mL):分别准确移取苏丹红Ⅰ、苏丹红Ⅱ、苏丹红Ⅲ、苏丹红Ⅳ、苏丹红G、苏丹红７B、对位红标准储备液(４􀆰４􀆰１)各１􀆰０mL,置于１０mL棕色容量瓶中,用乙腈(４􀆰１􀆰１)定容至刻度,配制成浓度为１０μg/mL的合成红色素混合标准中间液,于－１８℃以下保存,有效期６个月.４􀆰４􀆰４　合成红色素混合标准工作液(１００ng/mL):分别准确移取合成红色素混合标准中间液(４􀆰４􀆰３)０􀆰１mL,置于１０mL棕色容量瓶中,用乙腈(４􀆰１􀆰１)定容至刻度,配制成浓度为１００ng/mL的合成红色素混合标准工作液,于－１８℃以下避光保存,临用现配.４􀆰４􀆰５　氘代合成红色素混合内标中间液(１０μg/mL):分别准确移取苏丹红ⅠＧD５、苏丹红ⅡＧD６、苏丹红ⅢＧD６、苏丹红ⅣＧD６、苏丹红GＧD３、对位红ＧD４内标储备液(４􀆰４􀆰２)各１􀆰０mL,置于１０mL棕色容量瓶中,用乙腈(４􀆰１􀆰１)定容至刻度,配制成浓度为１０μg/mL的氘代合成红色素混合内标中间液,于－１８℃以下避光保存,有效期６个月.４􀆰４􀆰６　氘代合成红色素混合内标工作液(１μg/mL):准确移取氘代合成红色素混合内标中间液(４􀆰４􀆰５)１mL,置于１０mL棕色容量瓶中,用乙腈(４􀆰１􀆰１)定容至刻度,配制成浓度为１μg/mL的氘代合成红色素混合内标工作液,于－１８℃以下避光保存,现用现配.４􀆰５　材料４􀆰５􀆰１　固相萃取柱:CaptivaEMRＧLipid１)过滤柱:６mL,６００mg,或性能相当者.１)　CaptivaEMRＧLipid是安捷伦公司提供的商品名,给出这一信息是为了方便本标准的使用者,并不表示对该产品的认可.如果其他等效产品具有相同的效果,则可使用这些等效的产品.４􀆰５􀆰２　微孔滤膜:有机相,０􀆰２２μm.５　仪器设备５􀆰１　超高效液相色谱Ｇ串联质谱仪:配电喷雾电离源.５􀆰２　分析天平:感量０􀆰００００１g和０􀆰０１g.５􀆰３　涡旋混合器.５􀆰４　离心机:最大转速８０００r/min或以上.５􀆰５　振荡器.５􀆰６　离心管:１０mL和５０mL.５􀆰７　固相萃取装置.６　试料的制备与保存６􀆰１　试料的制备取适量新鲜或解冻的空白或供试组织,绞碎并使均质.a)　取均质的供试样品,作为供试试料;b)　取均质的空白样品,作为空白试料;c)　取均质的空白样品,添加适宜浓度的标准工作液,作为空白添加试料.２NY/T４２６２—２０２２６􀆰２　样品的保存－１８℃以下保存.７　测定步骤７􀆰１　提取取试料(２±０􀆰０２)g,置于５０mL离心管中,准确加入２０μL氘代合成红色素混合内标工作液(４􀆰４􀆰６),加入２mL水及１０mL乙腈(４􀆰１􀆰１),涡旋混匀１min,再加入４g无水硫酸镁(４􀆰１􀆰３)、１g氯化钠(４􀆰１􀆰４),涡旋混匀后振荡５min,超声５min,以不低于８０００r/min离心５min,取上清液备用.　７􀆰２　净化移取全部上清液(７􀆰１)过CaptivaEMRＧLipid过滤柱(４􀆰５􀆰１),收集洗脱液于１０mL容量瓶,抽干过滤柱,用乙腈(４􀆰１􀆰１)定容至刻度,混匀后吸取１􀆰０mL通过微孔滤膜(４􀆰５􀆰２)过滤,供液相色谱Ｇ串联质谱仪测定.７􀆰３　基质匹配系列标准工作液的制备取空白试料,按照７􀆰１和７􀆰２的步骤处理得到空白基质溶液.分别准确移取合成红色素混合标准工作液(４􀆰４􀆰４)和氘代合成红色素混合内标工作液适量(４􀆰４􀆰６),用空白基质溶液稀释成浓度为０􀆰２μg/L、０􀆰５μg/L、１μg/L、２μg/L、１０μg/L的基质匹配系列标准工作液(内标浓为２０μg/L).现用现配.７􀆰４　测定７􀆰４􀆰１　液相色谱参考条件a)　色谱柱:C１８柱(１００mm×２􀆰１mm,粒径２􀆰７μm),或相当者;b)　柱温:３０℃;c)　进样量:２􀆰０mL.d)　流速:０􀆰３mL/min.e)　流动相:A相:０􀆰１％甲酸Ｇ乙酸铵溶液(４􀆰２􀆰２);B相:乙腈(４􀆰１􀆰１),梯度洗脱程序见表１.表１　梯度洗脱程序时间minA相％B相％０􀆰０１５８５２􀆰０１５８５３􀆰０５９５４􀆰００１００６􀆰００１００６􀆰１１５８５７􀆰０１５８５７􀆰４􀆰２　串联质谱参考条件a)　离子源:电喷雾离子源;b)　扫描方式:正离子扫描;c)　检测方式:多反应监测;d)　离子源温度:１５０℃;f)　脱溶剂温度:３２５℃;g)　毛细管电压:３􀆰５kV;h)　定性离子对、定量离子对及锥孔电压和碰撞能量见表２.３NY/T４２６２—２０２２表２　７种合成红色素及内标的质谱参数被测物名称定性离子对m/z定量离子对m/z锥孔电压V碰撞能量eV苏丹红Ⅰ２４９􀆰０＞１５６􀆰０２４９􀆰０＞９２􀆰９２４９􀆰０＞９２􀆰９３８０２６３８０２８苏丹红Ⅱ２７７􀆰０＞１５６􀆰０２７７􀆰０＞１２０􀆰９２７７􀆰０＞１２０􀆰９３８０２２３８０２６苏丹红Ⅲ３５２􀆰７＞１２０􀆰０３５２􀆰７＞７６􀆰９３５２􀆰７＞７６􀆰９３８０２５３８０３６苏丹红Ⅳ３８１􀆰０＞２２４􀆰５３８１􀆰０＞９１􀆰０３８１􀆰０＞９１􀆰０３８０２５３８０３５苏丹红G２７９􀆰０＞２４７􀆰９２７９􀆰０＞１５６􀆰０２７９􀆰０＞２４７􀆰９３８０１８３８０２６苏丹红７B３７９􀆰９＞１８３􀆰０３７９􀆰９＞１６９􀆰０３７９􀆰９＞１８３􀆰０３８０１５３８０３５对位红２９４􀆰０＞１５５􀆰９２９４􀆰０＞１２７􀆰９２９４􀆰０＞１５５􀆰９３８０２０３８０３５苏丹红ⅠＧD５２５４􀆰０＞９７􀆰９２５４􀆰０＞９７􀆰９３８０３０苏丹红ⅡＧD６２８３􀆰０＞１６２􀆰０２８３􀆰０＞１６２􀆰０３８０２２苏丹红ⅢＧD６３５９􀆰０＞７６􀆰９３５９􀆰０＞７６􀆰９３８０３６苏丹红ⅣＧD６３８７􀆰０＞９１􀆰０３８７􀆰０＞９１􀆰０３８０３８苏丹红GＧD３２８２􀆰０＞１５６􀆰０２８２􀆰０＞１５６􀆰０３８０２６对位红ＧD４２９８􀆰１＞１５６􀆰０２９８􀆰１＞１５６􀆰０３８０１８７􀆰５　测定法７􀆰５􀆰１　定性测定在相同测试条件下,试样溶液与基质匹配标准溶液中待测物的保留时间相对偏差应在±２􀆰５％之内.且检测到的离子相对丰度,应当与浓度相当的基质匹配标准溶液离子相对丰度一致.其允许偏差应符合表３要求.表３　定性确证时离子相对丰度的最大允许偏差单位为百分号离子相对丰度＞５０＞２０~５０＞１０~２０≤１０允许的最大偏差±２０±２５±３０±５０７􀆰５􀆰２　定量测定以７种合成红色素的浓度为横坐标、定量离子色谱峰面积与对应内标色谱峰面积比值为纵坐标,绘制标准曲线,标准曲线的相关系数应不低于０􀆰９９.试样溶液、基质匹配标准溶液及内标的响应值均应在仪器检测的线性范围内,如超出线性范围,应将试样溶液和基质匹配标准溶液作相应稀释后重新测定.单点校准定量时,试样溶液中待测物浓度