NYT 4192-2022 化学农药 水-沉积物系统代谢试验准则

20221111发布－－20230301－－实施化学农药水-沉积物系统代谢试验准则17中华人民共和国农业行业标准备案号：XXXX-XXXXＩＣＳ65.020CCSB4192—2022Chemicalpesticide———GuidelineforaquaticsedimentsystemmetabolismtestＮＹ／Ｔ中华人民共和国农业农村部发布NY/T４１９２—２０２２前　　言本文件按照GB/T１􀆰１—２０２０«标准化工作导则　第１部分:标准化文件的结构和起草规则»的规定起草.请注意本文件的某些内容可能涉及专利.本文件的发布机构不承担识别专利的责任.本文件由农业农村部种植业管理司提出并归口.本文件起草单位:农业农村部农药检定所.本文件主要起草人:周艳明、单炜力、袁善奎、陈朗、周欣欣、蓝帅.ⅠNY/T４１９２—２０２２化学农药　水Ｇ沉积物系统代谢试验准则１　范围本文件规定了化学农药水Ｇ沉积物系统代谢试验的试验方法.本文件适用于挥发性较小或不具有挥发性的农药,不适用于在试验条件下不能保持在水或沉积物中的极易挥发的农药.２　规范性引用文件下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款.其中,注日期的引用文件,仅该日期对应的版本适用于本文件;不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件.GB/T３２７２３　土壤微生物生物量的测定　底物诱导呼吸法GB/T３９２２８　土壤微生物生物量的测定　熏蒸提取法LY/T１２２５　森林土壤颗粒组成(机械组成)的测定NY/T１１２１􀆰２　土壤检测　第２部分:土壤pH的测定NY/T１１２１􀆰６　土壤检测　第６部分:土壤有机质的测定NY/T３１５０　农药登记　环境降解动力学评估及计算指南３　术语和定义下列术语和定义适用于本文件.３􀆰１主要代谢物　majormetabolite在水Ｇ沉积物系统代谢试验中,在任何一次检测时间点中摩尔分数或放射性强度比例大于１０％的代谢物.３􀆰２结合残留　boundresidues用不改变其化学结构或沉积物基质结构的方法不能提取出的残留物.３􀆰３已提取残留　extractedresidues已从沉积物中提取出的残留物.３􀆰４未提取残留　unextractedresidues未从沉积物中提取出的残留物.３􀆰５矿化　mineralisation有机物在好氧条件下完全降解为二氧化碳和水或在厌氧条件下完全降解为甲烷、二氧化碳和水的过程.本文件中,当使用１４C标记的被试物时,矿化指被标记碳原子被氧化并释放出二氧化碳或被还原并释放出甲烷的过程.４　试验概述将被试物添加至水Ｇ沉积物系统中,在恒定的温度条件下避光培养,用适当的吸收装置收集挥发性产物.定期取样检测水、沉积物、吸收装置和容器中的母体和代谢物,明确矿化率、结合残留和质量平衡回收１NY/T４１９２—２０２２率,确定主要代谢物、计算母体和主要代谢物的５０％降解时间(DT５０)和９０％降解时间(DT９０).５　仪器与试剂５􀆰１　仪器５􀆰１􀆰１　气体流动式培养装置构成见附录A.５􀆰１􀆰２　定性定量分析仪器,如气相色谱仪、高效液相色谱仪、质谱仪、气相色谱Ｇ质谱联用仪、高效液相色谱Ｇ质谱联用仪、核磁共振仪等.５􀆰１􀆰３　液体闪烁计数仪.５􀆰１􀆰４　氧化燃烧仪.５􀆰１􀆰５　离心机.５􀆰１􀆰６　提取、浓缩设备.５􀆰２　试剂除另有规定外,所有试剂均为分析纯.５􀆰２􀆰１　氢氧化钠(NaOH,１３１０Ｇ７３Ｇ２),１mol/L.５􀆰２􀆰２　氢氧化钾(KOH,１３１０Ｇ５８Ｇ３),１mol/L.５􀆰２􀆰３　乙二醇[(CH２OH)２,１０７Ｇ２１Ｇ１].５􀆰２􀆰４　２Ｇ羟基乙胺[HO(CH２)２NH２,１４１Ｇ４３Ｇ５].５􀆰２􀆰５　硫酸(H２SO４,７６６４Ｇ９３Ｇ９),０􀆰０５mol/L.６　被试物与参照物６􀆰１　被试物６􀆰１􀆰１　应使用同位素标记的被试物,宜使用１４C标记.标记的位置应在化合物的最稳定部分.对含有一个环状结构的化合物,标记位点应选择在该环状结构;对含有多个环状结构的化合物,应在化合物不同环状位置分别标记、分别开展试验.被试物的含量和放射化学纯度应≥９５％.６􀆰１􀆰２　不宜使用制剂作为被试物,但被试物水溶解度低时可使用制剂作为被试物.６􀆰１􀆰３　试验开始前,应了解被试物的以下信息:———水中溶解度;———有机溶剂中的溶解度;———饱和蒸汽压;———正辛醇/水分配系数;———吸附系数;———水解特性;———解离常数(对于易质子化或去质子化的被试物);———土壤微生物毒性(如有);———快速生物降解性或固有生物降解性(如有);———在土壤中的代谢(如有);———被试物及其代谢物的定性和定量分析方法(包括提取和净化方法).６􀆰２　对照物农药母体和代谢物的标准物质,不需同位素标记.７　试验用沉积物７􀆰１　沉积物的选择７􀆰１􀆰１　应使用２种有机碳含量和质地不同的沉积物系统,其中１种为高有机碳含量(２􀆰５％~７􀆰５％)细质２NY/T４１９２—２０２２地([黏粒＋粉粒]＞５０％),另１种为低有机碳含量(０􀆰５％~２􀆰５％)粗质地([黏粒＋粉粒]＜５０％).２种沉积物的有机碳含量差异宜＞２％,黏粒＋粉粒的差异宜＞２０％.注:[黏粒＋粉粒]指沉积物中粒径＜０􀆰０５mm的矿物组分.７􀆰１􀆰２　当资料表明被试物在不同pH条件下的土壤代谢或土壤吸附有显著差异时,选择沉积物时应考虑pH的影响.７􀆰２　水和沉积物的采集４年内受被试物或与被试物结构类似的农药污染的沉积物不应用于试验.宜从距岸边至少１m、水深至少０􀆰３m处采集水和沉积物.应采集表层５cm~１０cm的沉积物,并同时采集足量水样.７􀆰３　沉积物的处理先过滤分离水和沉积物,再用采样地的水将沉积物湿筛至＜２mm,用于湿筛的水不应继续用于试验.７􀆰４　水和沉积物的保存宜使用新鲜的水和沉积物开展试验,必须保存时,应将已处理过的沉积物与水一起(水层深度为６cm~１０cm)在４℃±２℃、黑暗条件下保存,最长可保存４周.用于好氧代谢试验的水和沉积物,储存时应保持通风,如可储存于敞口容器中.水和沉积物运输和储存过程中不应冷冻.７􀆰５　水和沉积物理化性质的测定至少应按附录B测定试验用水和沉积物的性质,其中:———沉积物的总有机碳按NY/T１１２１􀆰６测定;———沉积物的pH按NY/T１１２１􀆰２测定.———沉积物的粒径分布按LY/T１２２５测定.———好氧代谢试验中沉积物的微生物生物量宜按GB/T３９２２８测定,也可按GB/T３２７２３或平板菌落计数法测定;———厌氧代谢试验中沉积物的微生物生物量宜按GB/T３９２２８测定,也可通过检测甲烷生成率测定.７􀆰６　水Ｇ沉积物系统预培养试验开始前,水Ｇ沉积物系统应先进行预培养.将沉积物和水按一定依次加入培养瓶,在与试验条件相同的环境下预培养.通过测定pH、溶解氧以及水和沉积物的氧化还原电位判断水Ｇ沉积物系统是否已达到稳定状态.除处理组和对照组外,每种沉积物系统应额外设置１个培养瓶用于预培养期间水和沉积物理化性质的测定.预培养时间宜为１周~２周,不应超过４周.８　试验方法８􀆰１　培养装置８􀆰１􀆰１　培养装置应使用玻璃容器,但正辛醇/水分配系数或土壤吸附等资料表明被试物可吸附在玻璃表面时,可使用聚四氟乙烯等替代材料,也可采用以下方法处理:———测定吸附在玻璃器皿表面的被试物和代谢物;———试验结束时用溶剂清洗玻璃容器并测定放射性;———以制剂为被试物;———增加助溶剂的量.８􀆰１􀆰２　应使O２或N２在水中分布均匀,如可使培养瓶中进气管略低于水面,但应避免扰动沉积物.不应去除空气中的CO２,以免提高水的pH.８􀆰１􀆰３　可用NaOH或KOH等吸收CO２,乙二醇或２Ｇ羟基乙胺等吸收挥发性有机物,H２SO４吸收碱性挥发性物质.厌氧代谢试验中,用分子筛吸收甲烷.８􀆰２　试验条件８􀆰２􀆰１　培养瓶中水和沉积物的体积比为３:１~４:１,沉积物层深度为(２􀆰５±０􀆰５)cm.每个培养瓶中沉积物干重宜≥５０g.８􀆰２􀆰２　整个试验周期内,水Ｇ沉积物系统应在黑暗、１０℃~３０℃恒温条件下培养,试验温度宜为(２０±２)℃.３NY/T４１９２—２０２２８􀆰２􀆰３　好氧代谢试验中,应通入空气,并保持溶解氧浓度为７mg/L~１０mg/L;厌氧代谢试验中,应通入N２,并保持水和沉积物的氧化还原电位(Eh)＜－１００mV.８􀆰３　添加被试物８􀆰３􀆰１　被试物添加量８􀆰３􀆰１􀆰１　直接用于水体的农药,根据农药最大推荐用量和培养瓶中水体面积按公式(１)计算被试物添加量.其他情况根据农药在水体中的预测浓度确定被试物的添加浓度.m＝A×π×φ２æèçöø÷２×dD÷１００(１)􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺式中:m　———每个培养瓶中被试物的初始添加量,单位为微克(μg);A———被试物的推荐用量,单位为克每公顷(g/hm２);φ———培养瓶内径,单位为厘米(cm);d———培养瓶中水层深度,单位为厘米(cm);D———环境中水层深度,单位为厘米(cm),默认值为１００cm;１００———单位换算系数.８􀆰３􀆰１􀆰２　满足以下条件之一的,应提高被试物的初始添加量(如提高１０倍),但不应对水Ｇ沉积物系统中微生物活性造成显著的负面影响:———计算出的被试物的添加浓度接近母体检测方法的LOD;———无法准确测定相当于被试物添加浓度１０％的主要代谢物.８􀆰３􀆰２　被试物添加方法将被试物配成水溶液加至培养瓶的水层,必要时可使用少量丙酮、乙醇等有机溶剂助溶.有机溶剂的加入量不应超过培养瓶中水体积的１％,也不应对水Ｇ沉积物系统中微生物活性造成显著的负面影响.添加被试物后应轻轻搅动水相使被试物分布均匀,但不应扰动沉积物.８􀆰３􀆰３　对照组应同时设置未加被试物的空白对照组,与处理组在相同条件下培养,用于试验结束后测定微生物的生物量.被试物用有机溶剂溶解后添加的,还应设置添加相同量有机溶剂但不添加被试物的溶剂对照组,用于测定微生物的生物量.８􀆰４　预试验当不能通过被试物的其他相关试验结果估计试验周期和采样时间时,可进行预试验.预试验的试验条件与正式试验相同.如进行了预试验,在试验报告中应简要描述预试验的试验条件和结果.８􀆰５　试验周期试验周期不宜超过１００d,满足以下条件之一时,试验可终止:———已明确代谢途径及在水和沉积物中的分配模式;———９０％的被试物已降解或挥发.８􀆰６　采样与检测８􀆰６􀆰１　在合适的时间间隔取２个培养瓶,沉积物用不同极性的有机溶剂多次提取,检测水和沉积物中的被试物和代谢物.除０d外,还应至少测定５次.应根据被试物的其他试验结果或预试验结果确定采样时间间隔.对于疏水性被试物,在试验开始阶段应增加采样点以确定被试物在水和沉积物间的分配速率.８􀆰６􀆰２　沉积物和上覆水应分别测定,分离上覆水时应尽量避免扰动沉积物.取样时应注意吸附在培养容器和收集挥发物的连通管路上的物质.８􀆰６􀆰３　同时应测定吸收装置中的CO２和其他挥发性有机物.每次采样均应氧化燃烧后测定沉积物中的未提取残留.当未提取残留＞添加放射性的１０％时,应按附录C确定提取方法的合理性.９　数据处理９􀆰１　每次采样检测的被试物、代谢物、未提取残留的量可用添加放射性的比例(％AR)表示也可用mg/４NY/T４１９２—２０２２kg表示,挥发性物质以％AR表示.每次采样均应计算质量平衡回收率,以％AR表示.９􀆰２　主要代谢物均应定性.对试验结束时虽＜１０％AR但浓度持续增加的代谢物,应根据具体情况决定是否对其定性,并在报告中说明原因.９􀆰３　按NY/T３１５０评估被试物的降解动力学并计算被试物和主要代谢物的DT５０、DT９０.１０　质量控制１０􀆰１　分析方法的回收率被试物加入水Ｇ沉积物系统后应立即提取检测至少２个水和沉积物样品,以验证分析方法的重现性和被试物添加的一致性.使用同