NYT 4190-2022 化学农药 蚯蚓田间试验准则

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20221111发布--20230301--实施化学农药蚯蚓田间试验准则17中华人民共和国农业行业标准备案号:XXXX-XXXXICS65.020CCSB4190—2022Chemicalpesticide———GuidelineforearthwormfieldtestNY/T中华人民共和国农业农村部发布NY/T4190—2022前  言本文件按照GB/T1􀆰1—2020«标准化工作导则 第1部分:标准化文件的结构和起草规则»的规定起草.请注意本文件的某些内容可能涉及专利.本文件的发布机构不承担识别专利的责任.本文件由农业农村部种植业管理司提出并归口.本文件负责起草单位:农业农村部农药检定所.本文件主要起草人:周艳明、王胜翔、袁善奎、周欣欣、单炜力、王寿山、宋伟华、赵秀振、王红.ⅠNY/T4190—2022化学农药 蚯蚓田间试验准则1 范围本文件规定了在田间条件下测定化学农药对蚯蚓影响试验的概述、试剂与材料、仪器设备、试验准备、试验步骤、数据评估、计算和结果表达以及试验报告等的基本要求.本文件适用于为化学农药登记而进行的蚯蚓田间试验.2 规范性引用文件下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款.其中,注日期的引用文件,仅该日期对应的版本适用于本文件;不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件.GB/T6682 分析实验室用水规格和试验方法LY/T1225 森林土壤颗粒组成(机械组成)的测定NY/T1121􀆰2 土壤检测 第2部分:土壤pH的测定NY/T1121􀆰6 土壤检测 第6部分:土壤有机质的测定NY/T2882􀆰8 农药登记 环境风险评估指南 第8部分:土壤生物NY/T3150 农药登记 环境降解动力学评估及计算指南ISO11274 土壤质量 持水能力的测定 实验室方法(SoilqualityGDeterminationofwaterGretenGtioncharacteristicGLaboratorymethods)3 术语和定义下列术语和定义适用于本文件.3􀆰1丰度 abundance单位面积上某一蚯蚓物种的个体数量.4 试验概述4􀆰1 在各试验小区采集蚯蚓,并比较被试物处理小区与空白小区、对照物小区中蚯蚓的物种、数量和生物量.根据被试物的性质确定试验周期,宜为1年.应在蚯蚓的活跃时期采样.4􀆰2 每个处理小区应由4个随机分布的次级小区组成.对每次采集的各种蚯蚓的数量开展统计分析,通过比较对照小区和处理小区的丰度、生物量和多样性确定被试物对蚯蚓的影响.注:可在处理小区采集蚯蚓样品并检测蚯蚓体内的被试物浓度.5 试剂与材料除另有规定外,所有试剂均为分析纯,水为符合GB/T6682中规定的三级水.5􀆰1 试剂5􀆰1􀆰1 异丙醇[(CH3)2CHOH,67G63G0].5􀆰1􀆰2 乙醇(CH3CH2OH,64G17G5).5􀆰1􀆰3 异硫氰酸烯丙酯(C4H5NS,57G06G7):>94%(体积分数).5􀆰1􀆰4 4%甲醛水溶液(HCHO,50G00G0):10%福尔马林固定液.5􀆰1􀆰5 多菌灵制剂.1NY/T4190—20225􀆰2 溶液配制5􀆰2􀆰1 乙醇水溶液(70%):量取736􀆰8mL乙醇(5􀆰1􀆰2)于1000mL容量瓶中,用水定容至刻度,混匀.5􀆰2􀆰2 异硫氰酸烯丙酯水溶液:称取1g异硫氰酸烯丙酯(5􀆰1􀆰3)于100mL烧杯中,加50mL异丙醇溶解,用自来水稀释至10L.现配现用.6 仪器设备6􀆰1 天平:感量0􀆰01g.6􀆰2 解剖显微镜:10倍~40倍.6􀆰3 温度计.6􀆰4 烘箱.6􀆰5 塑料容器:250mL、500mL.6􀆰6 镊子.6􀆰7 厚塑料薄膜.1m2~2m2.6􀆰8 锹或铲.6􀆰9 水罐:宜为20L.7 试验准备7􀆰1 试验点的选择7􀆰1􀆰1 试验点应在水平地面,作物和土壤性质应与周边区域相同,不应选择以下区域作为试验点:———坡地;———临近沟渠或树林的区域;———压实的耕作路;———土壤类型特殊的地点.例如,砂粒或黏粒含量过高的土壤.7􀆰1􀆰2 试验点宜选择草地.草地试验点蚯蚓的密度应不低于100条/m2,密度不足时应增加采样量.不宜选择果园作为试验点,若以果园为试验点,应增加采样量或限制在特定区域采样.7􀆰1􀆰3 若需要被试物在裸土中对蚯蚓影响的信息,可选择耕地作为试验点,耕地试验点试验开始前蚯蚓的密度应不低于60条/m2.7􀆰1􀆰4 试验点应有所选择环境类型中常见的蚯蚓种群.例如,在农业区,重要的深栖类和内栖类蚯蚓物种应不少于各类蚯蚓总量的10%.7􀆰1􀆰5 为满足上述要求,试验前应在选中的试验点采样并初步研究蚯蚓的物种分布概况.7􀆰2 试验点信息7􀆰2􀆰1 对试验点的描述应包含以下信息:———土壤颗粒组成,按照LY/T1225测定;———土壤有机质含量,按照NY/T1121􀆰6测定;———土壤pH,按照NY/T1121􀆰2测定;———土壤最大持水量,按照ISO11274测定;———植被分布.7􀆰2􀆰2 应全年记录气温和降水量,并在施药后每天记录土壤温度、含水率和日照时间.7􀆰2􀆰3 应了解试验点的耕作历史和农药、化肥、污泥历史使用情况.7􀆰3 试验设计7􀆰3􀆰1 根据试验目的和试验点的情况设计试验.至少设置1个空白小区(仅用水喷雾)、1个对照小区(用对照物喷雾)和1个处理小区(施用被试物),每个小区设4个次级小区.设置多个不同剂量的被试物2NY/T4190—2022处理小区更有助于环境风险评估.7􀆰3􀆰2 试验应采用随机完全区组设计.应根据被试物处理小区数量和采样时间确定试验小区数量及试验地的面积.7􀆰3􀆰3 每个小区的面积至少100m2(10m×10m).应在小区的中部采样,以保证采样区域周边有1m~2m宽的被试物或对照物处理过的边缘地带,小区布置示意图见图1.标引序号说明:1———采样区域;2———边缘地带.图1 试验小区示意图7􀆰3􀆰4 同一天采样的2个采样区域应相距至少2m,后续采样时不应在已采样过的区域采样.7􀆰3􀆰5 根据蚯蚓种群的密度和分布确定采样区域的数量.每个小区至少设置4个次级小区(重复),每个次级小区取4个随机样品(每个小区16个独立样品).7􀆰3􀆰6 对于在田间DisT90<365d的农药(DisT90按照NY/T3150计算),宜按单次被试物用量设计处理组,必要时根据被试物的使用方法单独设计额外的处理组,单独设计额外的处理组时应考虑作物的叶面拦截系数.对于田间DisT90>365d的被试物,也宜按单次用量设计处理组,必要时根据被试物的使用方法单独设计额外的处理组,但第一次施药时也应包含按土壤深度为10cm计算的稳态坪浓度(稳态坪浓度按照NY/T2882􀆰8计算),除第一次施药外,施药时应考虑作物的叶面拦截系数.7􀆰4 试验地的日常维护7􀆰4􀆰1 草地试验点应定期(每年2次~6次)用覆盖式割草机割草,割下的草应保留在原地.割草应在施用被试物前1周~2周进行.可仅保留施药前最后一次割下的草.7􀆰4􀆰2 当试验在耕地上进行时,应按常规农事操作进行,但试验期间应避免翻耕或其他土壤处理措施.7􀆰4􀆰3 试验小区不应使用被试物之外的农药,如必须使用农药,应选择对蚯蚓低毒且风险可接受的农药;若被试物为除草剂,耕地或草地(含对照小区)在试验开始前应先用另一种除草剂(非被试物)处理、耕地、再播种,施用除草剂(非被试物)和除草剂(被试物)应间隔至少1周.在解释试验结果时,应注意即使是使用对蚯蚓无影响的农药,其与被试物之间也可能发生相互作用.7􀆰4􀆰4 若施药后3d内降水量很少或没有降水,应喷灌.灌溉应安排在采样前1周~2周.灌溉量应根据试验地的气候条件确定,并在试验区域内均匀分布.施药后3d内,降水量和灌溉量总计达到10mm为宜.8 试验步骤8􀆰1 施药根据委托方提供的被试物的施药剂量、剂型、施用方法等信息施药.施药设备宜与农业生产中所用设备相近(例如,使用相同的喷雾器、相同的药液量),使用前应校准施药器具.按被试物可能使用的最大用量施药.多次施药时,根据推荐的施药次数和间隔时间,按上述方法施药.宜在春季进行施药.8􀆰2 采样8􀆰2􀆰1 采样时间8􀆰2􀆰1􀆰1 施药前应全面采样以获取蚯蚓物种组成、密度、均匀性等方面的信息.3NY/T4190—20228􀆰2􀆰1􀆰2 每次施药后1d~2d或灌溉后,应收集土壤表面的蚯蚓.8􀆰2􀆰1􀆰3 施用被试物后,应在蚯蚓活跃期至少采样3次,其采样时间如下:———第1次采样:施药后1个月~3个月;———第2次采样:施药后4个月~6个月;———第3次采样:施药后12个月.8􀆰2􀆰1􀆰4 试验时间根据被试物的性质确定.需要观察更长时间时,应间隔半年,并在蚯蚓的活跃期采样.8􀆰2􀆰1􀆰5 不应在环境条件不适宜(低土壤湿度和/或高温),蚯蚓处于滞育状态时采样.注:在温带,不适宜的环境条件出现在冬季和盛夏.8􀆰2􀆰2 采样方法8􀆰2􀆰2􀆰1 徒手分离法8􀆰2􀆰2􀆰1􀆰1 根据蚯蚓个体大小确定采样区域的面积.草地试验点每个采样区域的面积可设置为0􀆰25m2;耕地试验点每个采样区域的面积可增加至1m2.对于蚯蚓密度低的地区(如土壤pH低于4􀆰5),应设置更大的采样区域,如1m2.蚯蚓密度高的地区(如温带草地),采样区域可设为0􀆰125m2.更小的采样区域(如0􀆰0625m2),需要增加采样区域的数量(如16个采样区域).8􀆰2􀆰2􀆰1􀆰2 在草地试验点,采样前应移除采样区域的植被;试验人员应避免在采样区域内走动.8􀆰2􀆰2􀆰1􀆰3 根据选择的采样区域面积,用金属或塑料围成高10cm~15cm方形或圆形围挡.用锹或铲将表层土壤挖出,深度根据土壤性质确定,温带试验点宜取表层20cm土壤.挖出的土壤铺在塑料薄膜上,将蚯蚓挑出.戴乳胶手套徒手挑出大蚯蚓,用镊子挑出小蚯蚓,置于塑料容器中,应仅接触蚯蚓的前部.若挖土时蚯蚓被铲断,应将2段全部采集以测定准确的生物量,但统计物种数量时,仅前段计数.注:根据环带的位置可判断成蚓的前段,环带总是更接近头部.8􀆰2􀆰2􀆰2 异硫氰酸烯丙酯刺激分离法8􀆰2􀆰2􀆰2􀆰1 将5L~10L异硫氰酸烯丙酯水溶液(5􀆰2􀆰2)分2次~3次小心、均匀地施用于已移除表层土壤的采样区域.根据土壤性质确定异硫氰酸烯丙酯水溶液的量;当采样区域的面积>0􀆰25m2时,应相应增加异硫氰酸烯丙酯水溶液的量.在施用硫氰酸烯丙酯水溶液的过程中,应注意观察,以确定采集到采样区域内所有出现在土壤表面的蚯蚓.最后1次施用硫氰酸烯丙酯水溶液后30min,停止采样.8􀆰2􀆰2􀆰2􀆰2 戴乳胶手套徒手挑出大蚯蚓,用镊子挑出小蚯蚓.应仅采集身体大部分(宜全部)出现的蚯蚓,应仅接触蚯蚓的前部,宜仅接触环带之前.注1:在黏粒含量高的土壤中,在挖掘表层土壤时,可能会使蚯蚓洞堵塞,从而阻碍异硫氰酸烯丙酯的下渗和/或深栖类蚯蚓出现在土壤表面.出现此情况时,在施用异硫氰酸烯丙酯水溶液前,可先用小刀清理蚯蚓洞口.注2:使用时,应采用必要的防护措施,以避免吸入或皮肤暴露导致的危害.根据异硫氰酸烯丙酯的产品安全数据单,该化合物具有眼睛和皮肤刺激性并对水生生物有毒.8􀆰2􀆰2􀆰3 采样方法的选择8􀆰2􀆰2􀆰3􀆰1 宜先用徒手分离法采集表层土壤中的蚯蚓,然后在已移除表层土壤的采样区域继续采用异硫氰酸烯丙酯刺激分离法采样,采样结束后,应将挖掘出的土壤回填.8􀆰2􀆰2􀆰3􀆰2 当试验点中有巨蚓科蚯蚓时,可仅采用异硫氰酸烯丙酯刺激分离法.在巨蚓科蚯蚓栖息地4m2的范围内施用异硫氰酸烯丙酯水溶液,在施用前应先移除土壤表面的杂草和杂物.8􀆰2􀆰2􀆰3􀆰3 通过观察洞口(直径约0􀆰5cm)的排泄物,确定是否有深栖类蚯蚓.

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