TCSBT 009-2021 红细胞血型基因分型技术指南

ICS11.020CCSC05CSBT中国输血协会团体标准T/CSBT009—2021红细胞血型基因分型技术指南Technicalguidelineforgenotypingoferythrocytebloodgroup2021-10-13发布2021-11-10实施中国输血协会  发布T/CSBT009—2021I目次前言.......................................................................................................................................................................II1范围...................................................................................................................................................................12规范性引用文件...............................................................................................................................................13术语和定义.......................................................................................................................................................14检测前技术要求...............................................................................................................................................15检测中技术要求...............................................................................................................................................26检测后技术要求...............................................................................................................................................57质量控制...........................................................................................................................................................6附录A（资料性）红细胞血型基因分型参考DNA的目标核苷酸情况.........................................................8附录B（资料性）定性检测试剂主要性能指标的验证方法.......................................................................10参考文献...............................................................................................................................................................11T/CSBT009—2021II前言本文件按照GB/T1.1—2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定起草。请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别某些内容专利的责任。本文件起草单位：浙江省血液中心、上海市血液中心、广州血液中心、北京医院、深圳市第二人民医院、辽宁省血液中心、空军军医大学第二附属医院。本文件主要起草人：朱发明、朱自严、许先国、姬艳丽、宫济武、邵超鹏、叶璐夷、李剑平、穆士杰、何吉、应燕玲。T/CSBT009—20211红细胞血型基因分型技术指南1范围本文件规定了红细胞血型基因分型的技术要求，覆盖检测前、中、后过程和质量控制等要素。本文件适用于血站和医疗机构开展红细胞血型基因分型工作。2规范性引用文件下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。WS/T203输血医学术语WS/T420临床实验室对商品定量试剂盒分析性能的验证3术语和定义WS/T203界定的以及下列术语和定义适用于本文件。3.1血型bloodgroup在血液中所能检测出的任何遗传多态性可称之为血型，但血型通常被限定为血细胞表面抗原的多态性，包括红细胞、血小板和中性粒细胞血型。在非特指的情况下，血型一般是指红细胞血型。[来源：WS/T203-2020，3.1.1]3.2红细胞血型系统redcellgroupsystem根据红细胞表面抗原的遗传关系所划分的类别。由1个基因座或相同功能的2～3个基因座控制的不同等位基因所编码或决定的血型抗原，归属于同一血型系统。一些血型系统的基因直接编码血型抗原决定簇所在蛋白，另外一些血型系统的抗原是碳水化合物，血型基因编码糖基转移酶，催化这些抗原的形成。[来源：WS/T203-2020，3.1.7]3.3室内质控internalqualitycontrol实验室为控制检验数据的精密度所采取的管理或技术活动。[来源：WS/T203-2020，5.3.13]3.4室间质量评价externalqualityassessment；EQA多家实验室分析同一样本或参考样本盘并由外部独立机构收集和反馈实验室上报的结果以此评价实验室的操作过程。开展EQA项目能评估实验室的检测能力以及对检测质量进行持续监控的能力。其中，按照预先规定的条件，由两个和多个实验室对相同或类似的物品进行测量或检测的组织、实施和评价的过程称为实验室间比对（inter-laboratorycomparison）；由权威机构发放样本或参考样本盘，利用实验室间比对，按照预先制定的准则评价参加实验室的能力，称为实验室能力验证（proficiencytesting；PT）。[来源：WS/T203-2020，5.3.14]4检测前技术要求4.1红细胞血型基因分型应用范畴T/CSBT009—20212红细胞血型基因分型与血清学方法互相补充，两者具有不同的特点。基因分型应用范畴包括但不限于以下内容所列项：红细胞疑难血型的鉴定、红细胞直接抗球蛋白实验阳性和多次输血患者的血型鉴定、罕见表型的筛选和鉴定、产前血型的诊断、解决复杂的血型血清学问题。分型中应根据不同的应用情形，选择不同的分型方法和试剂。4.2标本的检测申请4.2.1检测申请信息至少包括但不限于以下内容所列项：分型目的、一般资料（唯一性标识码、姓名、性别、种族/民族、年龄、联系电话）、临床资料（临床诊断、既往史、输血史、孕产史、用药史、干细胞移植史）、血清学检测情况（血清学检测结果或反应格局）、其他信息（标本采集日期或时间、标本类型、家系关系）。依据分型目的设定申请单的具体内容和格式，应准确详细填写检测申请单。4.2.2检测标本应遵循知情同意原则。4.2.3申请单上宜有不同类型检测标本申请和/或采集时有关要求的内容。4.3标本的采集和标识4.3.1标本类型血型基因分型标本一般使用抗凝全血标本，特殊情况可使用羊水、口腔拭子、毛发等其他类型标本。血液标本使用乙二胺四乙酸盐或枸橼酸盐作为抗凝剂，不宜采用肝素抗凝。应充分考虑近期输血史、用药史、干细胞移植等对个体血型基因分型的影响，遇到此情形宜采集口腔拭子、毛发等标本。4.3.2标本采集与标识应制定标本采集程序，明确采集前准备、待检者身份识别、采集消毒和穿刺、标本留取和保存等过程的要求以及对标本质量影响的因素。严格执行既定的采集规程，应根据分型目的和分型方法的要求采集足量标本。标本应具有唯一性标识，与待检者信息具有一致性和可追溯性。4.4标本运输4.4.1标本包装规范，应能防渗漏和污染；标本的运输条件和时间应参照分型试剂的要求4.4.2当分型试剂和方法无明确要求时，标本运输时间宜控制在24小时内。待测核酸为DNA的标本可在室温运输。待测核酸为RNA的标本，预计1小时内到达实验室可室温运输；当运输时间1小时，则将标本-20℃以下运输到实验室；当标本中添加了RNA稳定剂，运输条件参照稳定剂的有关说明要求。4.4.3标本、检测申请单信息应具有一致性，宜同步运输；标本的运输应符合生物安全要求。4.5标本接收和验收4.5.1制定并实施标本交接和验收程序，做好交接和验收记录。标本应标识清楚、运输方式正确、容量满足实验要求、血液标本应抗凝充分，并能满足不同试剂和方法所规定的其他要求。羊水、口腔拭子、毛发中应含有一定数量的细胞，具体依据选用试剂的要求。4.5.2接收时应至少核查标本与检测申请单信息对应性和完整性，标本类型、来源、数量，运输方式，标本采集管使用正确与否。4.5.3标本验收不合格的情形包括检测申请单信息缺失或不符，标本管标识不清或者不正确，标本管选用错误，不符合试剂说明书要求以及其他影响实验结果的情形。4.5.4验收不符合的，应通知重新送样或者补充完善信息资料，必要时可终止申请项目。4.6标本的保存应有保存标本的规定和设施，避免标本在检测前发生变质、遗失或损坏。当分型方法中存在独立的核酸提取步骤时，则标本应尽快提取核酸，避免长期保存及反复冻融原始标本。用于DNA分型时，全血标本可在2-8℃保存72小时；用于RNA分型时采用抑制RNase措施和无RNase材料，标本应立即抽提或者置于-70℃及以下保存。当选择含特定添加剂试管或基因分型方法无需独立核酸提取步骤，则参照试管说明书或方法的要求保存。5检测中技术要求T/CSBT009—202135.1一般要求开展红细胞基因分型应符合《医疗机构临床基因扩增检验实验室管理办法》的要求。5.2核酸提取和质量要求5.2.1核酸提取核酸提取方法应经过确认和评估。严格按照建立的操作规程或试剂说明书提取核酸。5.2.2核酸标本标识和保存提取过程中标本标识清楚，确保核酸标本与原始标本标识一致。应留取适量原始标本，以备实验复核。用于核酸标本保存的缓冲液、核酸标本保存条件和时间参照分型试剂和方法的要求。当分型试剂和方法无明确要求时，实验室应根据分型方法的要求评估DNA质量来确定保存时间，原则上Tris-EDTA缓冲液内的DNA样本，不超过1年保存可在2-8℃，超过1年则宜置于-20℃及以下保存；RNA标本直接于-70℃及以下保存或者逆转录为cDNA后按照DNA保存。5.2.3核酸标本的质量要求标本的核酸提取效率应能满足分型试剂和方法的要求，宜使用分型试剂盒配套或推荐的核酸提取试剂。提取的核酸质量评价指标宜包括核酸浓度、纯度及完整性。核酸浓度和纯度符合分型试剂的要求或实验室制定的标准，应不影响后续的基因分型实验。当分型试剂和方法无明确核酸纯度要求，则待测物质为DNA时，A260/A280比值一般宜在1.6-1.8之间；待测物质为RNA时，A260/A280比值一般宜在1.8-2.