GHT 1280-2019 蜂胶中咖啡酸、p-香豆酸、阿魏酸、短叶松 素、松属素、短叶松素3-乙酸酯

ICS65.140B47中华人民共和国供销合作行业标准GH/T1280—2019蜂胶中咖啡酸、p-香豆酸、阿魏酸、短叶松素、松属素、短叶松素3-乙酸酯、白杨素和高良姜素含量的测定反相高效液相色谱法Determinationofcaffericacid,p-coumaricacid,ferulicacid,pinobanksin,pinocembrin,3-O-acetylpinobanksin,chrysinandgalangininpropolis-Reversed-phasehighperformanceliquidchromatographymethod2019-11-28发布2020-03-01实施中华全国供销合作总社发布GH/T1280-20191前言本标准按照GB/T1.1－2009《标准化工作导则第1部分：标准的结构和编写》的编写规则。本标准由中华全国供销合作总社提出。本标准由全国蜂产品标准化工作组归口。本标准起草单位：浙江大学、杭州蜂之语蜂业股份有限公司、杭州天厨蜜源保健品有限公司、缙云县绿纯养蜂专业合作社。本标准主要起草人：胡福良、张翠平、周萍、王磊、胡元强。GH/T1280-20192蜂胶中咖啡酸、p-香豆酸、阿魏酸、短叶松素、松属素、短叶松素3-乙酸酯、白杨素和高良姜素含量的测定反相高效液相色谱法1范围本标准规定了蜂胶中咖啡酸、p-香豆酸、阿魏酸、短叶松素、松属素、短叶松素3-乙酸酯、白杨素和高良姜素的反相高效液相色谱检测方法。本标准适用于蜂胶及蜂胶乙醇提取物中咖啡酸、p-香豆酸、阿魏酸、短叶松素、松属素、短叶松素-3-O-乙酸酯、白杨素和高良姜素的测定。本标准液相色谱的检出限：咖啡酸、p-香豆酸、阿魏酸、短叶松素、松属素、短叶松素3-乙酸酯、白杨素和高良姜素分别为0.41、0.39、1.20、0.29、1.11、1.49、0.86、0.91μg/mL。本标准液相色谱的定量限：咖啡酸、p-香豆酸、阿魏酸、短叶松素、松属素、短叶松素3-乙酸酯、白杨素和高良姜素分别为1.35、2.16、4.00、0.98、3.69、4.97、2.88、3.03μg/mL。2规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法3术语和定义下列术语和定义适用于本标准。3.1蜂胶propolis工蜂采集树脂等植物分泌物与其上颚腺、蜡腺分泌物等混合形成的胶粘性物质。4原理GH/T1280-20193试样经乙醇提取，浓缩，再溶解于甲醇，用反相高效液相色谱仪紫外检测器在280nm处检测，外标法定量。5试剂与材料实验室用水应符合GB/T6682规定的一级水。除非另有规定，所有试剂均为分析纯。5.1甲醇：色谱纯。5.2乙醇。5.3乙酸，色谱纯。5.4流动相：甲醇（5.1）和1%乙酸（5.3）梯度洗脱。5.5咖啡酸、p-香豆酸、阿魏酸、短叶松素、松属素、短叶松素3-乙酸酯、白杨素和高良姜素标准品：纯度≥98%5.6咖啡酸、p-香豆酸、阿魏酸、短叶松素、松属素、短叶松素3-乙酸酯、白杨素和高良姜素标准储备液：准确称取适量的每种标准物质（5.5），用甲醇溶液（5.1）配成1.0mg/mL的标准储备溶液，于4℃冰箱保存，可保存6个月。5.7咖啡酸、p-香豆酸、阿魏酸、短叶松素、松属素、短叶松素3-乙酸酯、白杨素和高良姜素标准工作液：吸取适量1.0mg/mL的标准贮备液（5.6），用甲醇溶液（5.1）分别稀释成适当浓度的标准工作溶液，现用现配。5.8滤膜：0.45µm，有机系。6仪器和设备6.1高效液相色谱仪：配有紫外检测器。6.2粉碎机。6.3旋转蒸发仪。6.4超声波清洗器。7试样准备与保存7.1试样的准备取代表性试样适量，冷冻，粉碎，混匀，作为备检试样。7.2试样保存将试样于0℃～4℃保存。GH/T1280-201948操作步骤8.1蜂胶样品预处理准确称取10.0g（精确到0.1g）蜂胶试样，用30mL95%乙醇超声提取，每次用时15min，共提取3次，合并滤液，定容至100mL（V1）。取10mL（V2）减压蒸干，用25mL（V3）甲醇超声溶解并定容，0.45μm滤膜过滤，供测定。8.2色谱条件色谱柱：SepaxHP-C18，柱长150mm，内径4.6mm，粒度5µm；或性能相当的色谱柱。流动相流速：1.0mL/min。梯度洗脱：洗脱程序参见附录A表A.1。检测波长：280nm。柱温：33℃。进样量：5µL。8.3测定取5µL样品溶液（8.1）、标准工作溶液（5.7）分别进样分析，绘制标准曲线，外标法定量。色谱图参见附录A图A.1。9结果计算与表示9.1结果计算试样中咖啡酸、p-香豆酸、阿魏酸、短叶松素、松属素、短叶松素3-乙酸酯、白杨素和高良姜素含量（X）以毫克每克（mg/g）表示，按式（1）计算：CV3V2mV1(1)式中：CS—标准工作曲线上计算得到的样液中化合物的浓度，单位为毫克每毫升（mg/mL）；V1—试样溶液定容体积，单位为毫升（mL）；V2—从试样溶液中取出的待测体积（mL）；V3—待测试样最终定容体积，单位为毫升（mL）；m—样品质量，单位为克（g）。9.2结果表示将符合重复性要求的两个独立测定值的算术平均值作为测定结果（mg/g），保留两位有效数字。平行试验相对偏差不得超过2.0%。XGH/T1280-20195附录A（资料性附录）高效液相色谱法梯度洗脱程序和色谱图表A.1高效液相色谱法梯度洗脱程序时间min流速mL/min甲醇%1%乙酸%01158530140606515545701623880110009011585GH/T1280-20196图A.1咖啡酸、p-香豆酸、阿魏酸、短叶松素、松属素、短叶松素3-乙酸酯、白杨素和高良姜素混合标准品和蜂胶的色谱图图1混合标准品和蜂胶的的HPLC图谱A：混合标准品；B：蜂胶1.咖啡酸、2.p-香豆酸、3.阿魏酸、4.短叶松素、5.松属素、6.短叶松素3-乙酸酯、7.白杨素、8.高良姜素