GB 31658.25-2022 食品安全国家标准 动物性食品中10种利尿药残留量的测定 液相色谱-

中华人民共和国国家卫生健康委员会食品安全国家标准动物性食品中10种利尿药残留量的测定液相色谱-串联质谱法04中华人民共和国国家标准备案号：XXXX-XXXXＩＣＳ67.050X31658.25—2022Nationalfoodsafetystandard—Determinationoftendiureticsresiduesinanimalderivedfoodsbyliquidchromatography-tandemmassspectrometryGB20220920发布－－20230201－－实施发布国家市场监督管理总局中华人民共和国农业农村部CCSGB３１６５８􀆰２５—２０２２前　　言本文件按照GB/T１􀆰１—２０２０«标准化工作导则　第１部分:标准化文件的结构和起草规则»的规定起草.本文件系首次发布.ⅠGB３１６５８􀆰２５—２０２２食品安全国家标准动物性食品中１０种利尿药残留量的测定液相色谱Ｇ串联质谱法１　范围本文件规定了动物性食品中１０种利尿药残留量的制样和液相色谱Ｇ串联质谱测定方法.本文件适用于猪、牛、羊、鸡、鸭的肌肉、鸡蛋和牛奶中乙酰唑胺、４Ｇ氨基Ｇ６Ｇ氯苯Ｇ１,３Ｇ二磺酰胺、氯噻嗪、氢氯噻嗪、氯噻酮、呋塞米、卞氟噻嗪、氨苯蝶啶、螺内酯、坎利酮１０种利尿药残留量的测定.２　规范性引用文件下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款.其中,注日期的引用文件,仅该日期对应的版本适用于本文件;不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件.GB/T６６８２　分析实验室用水规格和试验方法３　术语和定义本文件没有需要界定的术语和定义.４　原理试样经乙腈Ｇ水溶液提取,正己烷除脂,反相混合型亲水亲脂固相萃取柱净化,液相色谱Ｇ串联质谱仪测定,内标法定量.５　试剂与材料除另有规定外,所有试剂均为色谱纯,水为符合GB/T６６８２规定的一级水.５􀆰１　试剂５􀆰１􀆰１　乙腈(CH３CN).５􀆰１􀆰２　甲醇(CH３OH).５􀆰１􀆰３　正己烷(C６H１４).５􀆰１􀆰４　二甲基亚砜(C２H６OS).５􀆰１􀆰５　乙酸铵(CH３COONH４).５􀆰２　溶液配制５􀆰２􀆰１　９０％乙腈水溶液:取乙腈９００mL,加水稀释至１０００mL.５􀆰２􀆰２　５０％乙腈水溶液:取乙腈５０mL,加水稀释至１００mL.５􀆰２􀆰３　５mmol/L乙酸铵缓冲溶液:取乙酸铵０􀆰３８５g,加水溶解,稀释至１０００mL.５􀆰２􀆰４　９０％乙腈甲醇溶液:取甲醇１０mL,用乙腈稀释至１００mL,混匀.５􀆰２􀆰５　乙腈饱和正己烷溶液:取相同体积的乙腈和正己烷,置于分液漏斗中,振荡,静置分层,取上层溶液.５􀆰３　标准品５􀆰３􀆰１　利尿药标准品:乙酰唑胺、４Ｇ氨基Ｇ６Ｇ氯苯Ｇ１,３Ｇ二磺酰胺、氯噻嗪、氢氯噻嗪、氯噻酮、呋塞米、卞氟噻嗪、氨苯蝶啶、螺内酯、坎利酮,纯度均≥９８􀆰０％.或经国家认证并授予标准物质证书的标准品.标准品１GB３１６５８􀆰２５—２０２２信息见附录A中的表A􀆰１.５􀆰３􀆰２　同位素内标标准品:乙酰唑胺ＧD３、４Ｇ氨基Ｇ６Ｇ氯苯Ｇ１,３Ｇ二磺酰胺Ｇ１５N２、氯噻酮ＧD４、氢氯噻嗪Ｇ１３CD２、氯噻嗪Ｇ１３C１５N２、呋塞米ＧD５、卞氟噻嗪ＧD５、氨苯蝶啶ＧD５、坎利酮ＧD６,纯度均≥９８􀆰０％.或经国家认证并授予标准物质证书的标准品.同位素内标信息见附录A中的表A􀆰１.５􀆰４　标准溶液制备５􀆰４􀆰１　标准储备液(０􀆰１mg/mL):分别称取利尿药标准品各约１０mg,精密称定,用甲醇溶解并定容至１００mL棕色容量瓶中,混匀,配制成浓度为０􀆰１mg/mL的利尿药标准储备液.氨苯蝶啶标准品需先用１mL二甲基亚砜溶解,再用甲醇稀释并定容至刻度.－２０℃保存,有效期６个月.５􀆰４􀆰２　内标储备液(０􀆰１mg/mL):分别称取利尿药内标标准品各约１０mg,精密称定,用甲醇溶解并定容至１００mL棕色容量瓶中,混匀,配制成浓度为０􀆰１mg/mL的利尿药内标标准储备液.氨苯蝶啶ＧD５标准品需先用１mL二甲基亚砜溶解,再用甲醇稀释并定容至刻度.－２０℃保存,有效期６个月.５􀆰４􀆰３　混合标准工作液:精密量取氯噻嗪、氢氯噻嗪、卞氟噻嗪和坎利酮的标准储备液(０􀆰１mg/mL)各１mL,氯噻酮、乙酰唑胺、呋塞米、螺内酯、４Ｇ氨基Ｇ６Ｇ氯苯Ｇ１,３Ｇ二磺酰胺、氨苯蝶啶的标准储备液(０􀆰１mg/mL)各２􀆰５mL,于同一１００mL棕色容量瓶中,用甲醇定容至刻度,配制成的混合标准工作液中氯噻嗪、氢氯噻嗪、卞氟噻嗪和坎利酮的浓度为１μg/mL;氯噻酮、乙酰唑胺、呋塞米、螺内酯和４Ｇ氨基Ｇ６Ｇ氯苯Ｇ１,３Ｇ二磺酰胺、氨苯蝶啶的浓度为２􀆰５μg/mL.４℃以下避光保存,有效期１个月.５􀆰４􀆰４　内标工作液:精密量取内标储备液(０􀆰１mg/mL)各１mL,于１００mL棕色容量瓶中,用甲醇定容至刻度,配制成浓度为１μg/mL的内标标准工作液.４℃以下避光保存,有效期１个月.５􀆰４􀆰５　混合标准系列工作液精确吸取利尿药混合标准工作液１０􀆰０μL、２０􀆰０μL、５０􀆰０μL、１００μL、２００μL、５００μL以及内标工作液２００μL,分别置于１０mL棕色容量瓶中,用５０％乙腈水溶液定容至刻度.其中氯噻嗪、氢氯噻嗪、卞氟噻嗪和坎利酮的浓度依次为１􀆰００ng/mL、２􀆰００ng/mL、５􀆰００ng/mL、１０􀆰０ng/mL、２０􀆰０ng/mL、５０􀆰０ng/mL;氯噻酮、乙酰唑胺、呋塞米、螺内酯、４Ｇ氨基Ｇ６Ｇ氯苯Ｇ１,３Ｇ二磺酰胺、氨苯蝶啶的浓度依次为２􀆰５０ng/mL、５􀆰００ng/mL、１２􀆰５ng/mL、２５􀆰０ng/mL、５０􀆰０ng/mL、１２５ng/mL,标准系列工作液中内标溶液的浓度为２０􀆰０ng/mL.现用现配.５􀆰５　材料５􀆰５􀆰１　固相萃取柱:通过式反相混合型亲水亲脂平衡共聚物固相萃取柱,２００mg/６mL,或性能相当者.５􀆰５􀆰２　有机滤膜:０􀆰２２μm.６　仪器和设备６􀆰１　液相色谱Ｇ串联质谱仪:配电喷雾离子源.６􀆰２　分析天平:感量分别为０􀆰００００１g和０􀆰０１g.６􀆰３　氮吹浓缩仪.６􀆰４　涡旋混合器.６􀆰５　超声波发生器.６􀆰６　离心机:转速不低于８０００r/min.６􀆰７　固相萃取装置.６􀆰８　均质机.７　试样的制备与保存７􀆰１　试样制备取适量新鲜或解冻的空白或供试肌肉组织,绞碎,并均质.取适量新鲜或冷藏的空白或供试鸡蛋,去壳后混合均匀.２GB３１６５８􀆰２５—２０２２取适量新鲜或冷藏的空白或供试牛奶,混合均匀.a)　取均质后的供试样品,作为供试试样;b)　取均质后的空白样品,作为空白试样;c)　取均质后的空白样品,添加适宜浓度的标准工作液,作为空白添加试样.７􀆰２　试样保存猪肉、牛肉、羊肉、鸡肉、鸭肉和鸡蛋试样于－１８℃以下保存,牛奶试样于０℃~４℃保存.８　分析步骤８􀆰１　提取８􀆰１􀆰１　猪肉、牛肉、羊肉、鸡肉、鸭肉称取试料２g(准确至±０􀆰０５g),置于５０mL离心管中,加入４０􀆰０μL内标工作液,加入９０％乙腈水溶液８􀆰０mL,于涡旋振荡器上剧烈振荡２min.超声提取１５min,８０００r/min离心５min,取上清液至离心管中.残渣加９０％乙腈水溶液８􀆰０mL重复提取１次,合并上清液.加入５mL乙腈饱和正己烷溶液,低速涡旋１０s,８０００r/min离心３min,取下层清液,用９０％乙腈水溶液稀释至２０􀆰０mL备用.８􀆰１􀆰２　鸡蛋、牛奶称取试料２g(准确至±０􀆰０２g),于５０mL离心管中,加入４０􀆰０μL内标工作液,加入乙腈８􀆰０mL,于涡旋振荡器上剧烈振荡２min.超声提取１５min,８０００r/min离心５min,取上清液至离心管中.残渣加乙腈８􀆰０mL重复提取１次,合并上清液.加入５mL乙腈饱和正己烷溶液,低速涡旋１０s,８０００r/min离心３min,取下层清液,用乙腈稀释至２０􀆰０mL备用.８􀆰２　净化取备用液１０􀆰０mL过固相萃取柱,以不大于１mL/min的速率通过固相萃取柱,接收流出的样液,并用１mL９０％乙腈甲醇溶液洗脱,接收全部洗脱液,于４０℃下氮气吹干.用１􀆰０mL５０％乙腈水溶液溶解残余物,涡旋混匀,过０􀆰２２μm滤膜,供液相色谱Ｇ串联质谱仪测定.８􀆰３　测定８􀆰３􀆰１　液相色谱参考条件a)　色谱柱:C１８色谱柱(１００mm×２􀆰１mm,１􀆰８μm),或相当者;b)　流动相:A为５mmol/L乙酸铵水溶液,B为乙腈,梯度洗脱条件见表１;c)　流速:０􀆰３mL/min;d)　柱温:３５℃;e)　进样量:５μL.表１　液相色谱梯度洗脱条件时间,minA,％B,％０９７３１􀆰００９７３１􀆰５０８０２０６􀆰００４０６０９􀆰００２０８０１０􀆰００２９８１２􀆰００９７３１５􀆰００９７３８􀆰３􀆰２　质谱参考条件a)　离子源:电喷雾(ESI)离子源;b)　扫描方式:氨苯蝶啶、螺内酯、坎利酮为正离子模式;乙酰唑胺、４Ｇ氨基Ｇ６Ｇ氯苯Ｇ１,３Ｇ二磺酰胺、氯噻嗪、氢氯噻嗪、氯噻酮、呋塞米、卞氟噻嗪为负离子模式;３GB３１６５８􀆰２５—２０２２c)　检测方式:多反应监测;d)　离子化电压:正模式５５００V,负模式－４５００V;e)　温度:５００℃;f)　气帘气:２４１kPa;g)　雾化气:３４５kPa;h)　辅助加热气:３４５kPa;i)　定性离子对、定量离子对、去簇电压及碰撞电压见附录B.８􀆰３􀆰３　测定法８􀆰３􀆰３􀆰１　定性测定在相同实验条件下,样品中待测物质的保留时间与标准溶液中对应的保留时间偏差在±２􀆰５％之内;且样品中被测组分定性离子的相对离子丰度与浓度接近的标准溶液中对应的定性离子的相对离子丰度进行比较,偏差不超过表２规定的范围,则可判定为样品中存在对应的待测物.１０种利尿药标准工作液和内标工作液的特征离子质量色谱图见附录C.表２　定性确证时相对离子丰度的允许偏差单位为百分号相对离子丰度允许偏差＞５０±２０２０~５０±２５１０~２０±３０≤１０±５０８􀆰３􀆰３􀆰２　定量测定按８􀆰３􀆰１和８􀆰３􀆰２设定仪器条件,取试样溶液和标准溶液,作单点或多点校准,按内标法以峰面积比计算.试样溶液及标准溶液中的１０种利尿药的峰面积与其相应内标的峰面积比应在仪器检测的线性范围之内.１０种利尿药的多反应检测特征离子质量色谱图见附录C.８􀆰４　空白试验称取空白试样,除不加药物外,采用完全相同的测定步骤进行平行操作.９　结果计算和表述试样中待测药物的残留量按标准曲线或公式(１)计算.X＝A×A′is×Cs×Cis×V１×V２×１０００Ais×As×C′is×m×V３×１０００(１)􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺式中:X　　———试样中被测物质残留量的数值,单位为微克每千克(μg/kg);Cs———标准工作溶液中被测物质浓度的数值,单位为纳克每毫升(ng/mL);Cis———试样溶液中内标浓度的数值,单位为纳克每毫升(ng/mL);C′is———标准工作溶液中内标浓度的数值,单位为纳克每毫升(ng/mL);A———试样溶液中被测物质的峰面积;A′is———标准工作溶液中内标的峰面积;Ais———试样溶液中内标的峰面积;As———标准工作溶液中被测物质的峰面积;V１———试样提取液总体积的数值,单位为毫升(mL);V２———净化后残余物溶解体积的数值,单位为毫升(mL);V３———试样提取液过柱净化体积的数值,单位为毫升(mL);m———试样质量的数值,单位为克(g);４GB３１６５８􀆰２５—２０２２１０００———换算系数.１０　方法的灵敏度、准确度和精密度１０􀆰１　灵敏度本方法中氯噻嗪、氢氯噻嗪、卞氟噻嗪和坎利酮的检出限为１􀆰００μg/kg;定量限为２􀆰００μg/kg.乙酰唑胺、４Ｇ氨基Ｇ６Ｇ氯苯Ｇ１,３Ｇ二磺酰胺、氯噻