GB 31658.18-2022 食品安全国家标准 动物性食品中三氮脒残留量的测定 高效液相色谱法

中华人民共和国国家卫生健康委员会食品安全国家标准动物性食品中三氮脒残留量的测定高效液相色谱法04中华人民共和国国家标准备案号：XXXX-XXXXＩＣＳ67.050X31658.18—2022Nationalfoodsafetystandard—DeterminationofdiminazeneresidueinanimalderivedfoodbyhighperformanceliquidchromatographymethodGB20220920发布－－20230201－－实施发布国家市场监督管理总局中华人民共和国农业农村部CCSGB３１６５８􀆰１８—２０２２前　　言本文件按照GB/T１􀆰１—２０２０«标准化工作导则　第１部分:标准化文件的结构和起草规则»的规定起草.本文件系首次发布.ⅠGB３１６５８􀆰１８—２０２２食品安全国家标准动物性食品中三氮脒残留量的测定　高效液相色谱法１　范围本文件规定了动物性食品中三氮脒残留量检测的制样和高效液相色谱检测方法.本文件适用于牛、羊的肌肉、肝脏、肾脏组织和牛奶、羊奶中三氮脒残留量的检测.２　规范性引用文件下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款.其中,注日期的引用文件,仅该日期对应的版本适用于本文件;不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件.GB/T６６８２　分析实验室用水规格和试验方法３　术语和定义本文件没有需要界定的术语和定义.４　原理试样中残留的三氮脒经乙腈水提取(奶中残留的三氮脒经乙酸乙腈溶液提取),弱阳离子交换固相萃取柱净化,高效液相色谱Ｇ紫外法测定,外标法定量.５　试剂和材料以下所用的试剂,除特别注明外均为分析纯试剂;水为符合GB/T６６８２规定的一级水.５􀆰１　试剂５􀆰１􀆰１　甲醇(CH３OH):色谱纯.５􀆰１􀆰２　甲酸(HCOOH):色谱纯.５􀆰１􀆰３　甲酸铵(CH５NO２):色谱纯.５􀆰１􀆰４　氨水(NH３􀅰H２O).５􀆰１􀆰５　冰乙酸(CH３COOH).５􀆰２　溶液配制５􀆰２􀆰１　６０％乙腈溶液:取乙腈６０mL,加水４０mL,混匀.５􀆰２􀆰２　０􀆰５％乙酸乙腈溶液:取冰乙酸２􀆰５mL,用乙腈稀释至５００mL,混匀.５􀆰２􀆰３　５％氨水溶液:取氨水５mL,加水９５mL,混匀.５􀆰２􀆰４　乙酸甲醇溶液(pH７􀆰０):取冰乙酸６mL,加甲醇９４mL,混匀,用氨水调节pH至７􀆰０±０􀆰０５.５􀆰２􀆰５　０􀆰０２mol/L甲酸铵溶液(pH４􀆰０):取甲酸铵１􀆰２６g,加水９００mL溶解,用甲酸调节pH至４􀆰０±０􀆰０５,加水稀释至１０００mL.５􀆰３　标准品二乙酰胺三氮脒(Diminazeneaceturate,C１４H１５N７􀅰２C４H７NO３,CAS号:９０８Ｇ５４Ｇ３),含量≥９１％.５􀆰４　标准溶液制备５􀆰４􀆰１　标准储备液:取二乙酰胺三氮脒标准品适量(相当于三氮脒约１０mg),精密称定,加水适量使溶解并稀释定容至１０mL棕色容量瓶,配制成浓度为１mg/mL的三氮脒标准储备液.４℃避光保存,有效期１GB３１６５８􀆰１８—２０２２１个月.５􀆰４􀆰２　标准工作液:精密量取１mg/mL标准储备液１mL,于１００mL棕色容量瓶中,用水稀释至刻度,配制成浓度为１０μg/mL的三氮脒标准工作液.４℃避光保存,有效期７d.５􀆰５　材料５􀆰５􀆰１　弱阳离子交换固相萃取柱:６０mg/３mL,或相当者.５􀆰５􀆰２　微孔尼龙滤膜:０􀆰２２μm.６　仪器和设备６􀆰１　高效液相色谱仪:配紫外检测器或二极管阵列检测器.６􀆰２　分析天平:感量０􀆰００００１g和０􀆰０１g.６􀆰３　pH计.６􀆰４　涡旋混合器.６􀆰５　涡旋振荡器.６􀆰６　高速冷冻离心机:转速≥１００００r/min.６􀆰７　固相萃取装置.７　试样的制备与保存７􀆰１　试样的制备７􀆰１􀆰１　组织取适量新鲜或解冻的空白或供试组织,绞碎,并均质.a)　取均质的供试样品,作为供试试样;b)　取均质的空白样品,作为空白试样;c)　取均质的空白样品,添加适宜浓度的标准溶液,作为空白添加试样.７􀆰１􀆰２　奶取适量新鲜或解冻的空白或供试奶样,混合均匀.a)　取混合均匀的供试样品,作为供试试样;b)　取混合均匀的空白样品,作为空白试样;c)　取混合均匀的空白样品,添加适宜浓度的标准溶液,作为空白添加试样.７􀆰２　试样的保存－１８℃以下保存.８　测定步骤８􀆰１　提取８􀆰１􀆰１　组织取试料２g(准确至±０􀆰０５g),置５０mL聚丙烯离心管中,加６０％乙腈溶液１８mL,涡旋１min,用冰乙酸调节pH至５􀆰５±０􀆰１,振荡１０min,１００００r/min离心５min,取上清液,用６０％乙腈溶液稀释至２０􀆰０mL,混匀,取２􀆰０mL(肌肉样品取１０􀆰０mL),备用.８􀆰１􀆰２　奶取试料５g(准确至±０􀆰０５g),置５０mL聚丙烯离心管中,准确加入０􀆰５％乙酸乙腈溶液１０mL,涡旋１min,振荡１０min,１００００r/min离心１０min,移取全部上清液,备用.８􀆰２　净化取弱阳离子交换固相萃取柱,依次用甲醇３mL、水３mL活化.取备用液过柱,再依次用５％氨水溶液３mL、甲醇３mL淋洗,抽干,加乙酸甲醇溶液(pH７􀆰０)１􀆰０mL,洗脱,抽干,收集洗脱液,过微孔尼龙２GB３１６５８􀆰１８—２０２２滤膜,供高效液相色谱仪测定.８􀆰３　标准曲线的制备精密量取标准工作液适量,用乙酸甲醇溶液(pH７􀆰０)稀释,配制成浓度为０􀆰０５μg/mL、０􀆰１μg/mL、０􀆰２μg/mL、０􀆰５μg/mL、１μg/mL、２μg/mL、５μg/mL的系列标准溶液,过微孔尼龙滤膜,供高效液相色谱仪测定.以三氮脒色谱峰面积为纵坐标、标准溶液浓度为横坐标,绘制标准曲线.求回归方程和相关系数.８􀆰４　测定８􀆰４􀆰１　液相色谱参考条件a)　色谱柱:C１８柱(２５０mm×４􀆰６mm,粒径５μm),或相当者;b)　流动相:A为０􀆰０２mol/L甲酸铵溶液(pH４􀆰０);B为甲醇;c)　梯度洗脱:洗脱条件见表１;d)　柱温:３０℃;e)　进样量:２０μL;f)　检测波长:３７０nm.表１　流动相梯度洗脱条件时间,min流速,mL/minA,％B,％０１􀆰０９０１０１􀆰０１􀆰０９０１０５􀆰０１􀆰０８０２０１０􀆰０１􀆰０１０９０１２􀆰０１􀆰０１０９０１２􀆰５１􀆰０９０１０１７􀆰０１􀆰０９０１０８􀆰４􀆰２　测定法取试料溶液和相应的标准溶液,作单点或标准曲线校准,按外标法以峰面积计算.标准工作液及试样溶液中三氮脒响应值应在仪器检测的线性范围之内.试料中三氮脒的保留时间与标准溶液中三氮脒的保留时间相对偏差应在±２􀆰５％以内.标准溶液的色谱图见附录A.８􀆰５　空白试验取空白试料,除不加药物外,采用完全相同的测定步骤进行测定.９　结果计算和表述试样中待测物含量以质量分数X表示,单位为毫克每千克(mg/kg),按公式(１)计算.X＝CS×A×V×V１AS×m×V２(１)􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺式中:X———试样中三氮脒残留量的数值,单位为毫克每千克(mg/kg);　A———试样中三氮脒的峰面积;AS———标准溶液中三氮脒的峰面积;CS———标准溶液中三氮脒浓度的数值,单位为微克每毫升(μg/mL);V———洗脱液体积的数值,单位为毫升(mL);V１———提取液定容后体积的数值,单位为毫升(mL);V２———过固相萃取柱的备用液体积的数值,单位为毫升(mL);m———供试试样质量的数值,单位为克(g).３GB３１６５８􀆰１８—２０２２１０　检测方法灵敏度、准确度和精密度１０􀆰１　灵敏度本方法在牛肉和羊肉中的检测限为０􀆰０５mg/kg,定量限为０􀆰１mg/kg,在牛肝、牛肾、羊肝和羊肾中的检测限为０􀆰２mg/kg,定量限为０􀆰５mg/kg,在牛奶和羊奶中的检测限为０􀆰０１mg/kg,定量限为０􀆰０２mg/kg.１０􀆰２　准确度本方法在牛肉和羊肉０􀆰１mg/kg~１mg/kg、牛肝和羊肝０􀆰５mg/kg~２４mg/kg、牛肾和羊肾０􀆰５mg/kg~１２mg/kg、牛奶和羊奶０􀆰０２mg/kg~０􀆰３mg/kg添加浓度水平上的回收率为６０％~１１０％.１０􀆰３　精密度本方法批内相对标准偏差≤１０％,批间相对标准偏差≤１０％.４GB３１６５８􀆰１８—２０２２附　录　A(资料性)三氮脒标准溶液的色谱图三氮脒标准溶液的色谱图(１００ng/mL)见图A􀆰１.图A􀆰１　三氮脒标准溶液的色谱图(１００ng/mL)５