GB 31613.4-2022 食品安全国家标准 牛可食性组织中吡利霉素残留量的测定 液相色谱-串联

中华人民共和国国家卫生健康委员会食品安全国家标准牛可食性组织中吡利霉素残留量的测定液相色谱-串联质谱法22中华人民共和国国家标准备案号：XXXX-XXXXＩＣＳ67.120X31613.4—2022Nationalfoodsafetystandard—Determinationofpirlimycinresidueinbovineedibletissuesbyliquidchromatography-tandemmassspectrometricmethodGB20220920发布－－20230201－－实施发布国家市场监督管理总局中华人民共和国农业农村部CCSGB３１６１３􀆰４—２０２２前　　言本文件按照GB/T１􀆰１—２０２０«标准化工作导则　第１部分:标准化文件的结构和起草规则»的规定起草.本文件系首次发布.ⅠGB３１６１３􀆰４—２０２２食品安全国家标准牛可食性组织中吡利霉素残留量的测定　液相色谱Ｇ串联质谱法１　范围本文件规定了牛可食性组织中吡利霉素残留检测的制样和液相色谱Ｇ串联质谱测定方法.本文件适用于牛肌肉、肝脏、肾脏和脂肪中吡利霉素的残留检测.２　规范性引用文件下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款.其中,注日期的引用文件,仅该日期对应的版本适用于本文件;不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件.GB/T６６８２　分析实验室用水规格和试验方法３　术语和定义本文件没有需要界定的术语和定义.４　原理试料中残留的吡利霉素,用５％甲酸乙腈溶液提取,固相萃取柱净化,液相色谱Ｇ串联质谱测定,基质匹配标准溶液外标法定量.５　试剂与材料除另有规定外,所有试剂均为分析纯,水为符合GB/T６６８２规定的一级水.５􀆰１　试剂５􀆰１􀆰１　乙腈(CH３CN):色谱纯.５􀆰１􀆰２　甲醇(CH３OH):色谱醇.５􀆰１􀆰３　甲酸(HCOOH):色谱纯.５􀆰１􀆰４　无水硫酸钠(Na２SO４).５􀆰１􀆰５　氯化钠(NaCl).５􀆰２　溶液配制５􀆰２􀆰１　５％甲酸乙腈溶液:取甲酸５mL,用乙腈稀释至１００mL.５􀆰２􀆰２　０􀆰１％甲酸乙腈溶液:取甲酸１mL,用乙腈稀释至１０００mL.５􀆰２􀆰３　０􀆰１％甲酸溶液:取甲酸１mL,用水稀释至１０００mL.５􀆰２􀆰４　８０％甲醇溶液:取甲醇８０mL,用水稀释至１００mL.５􀆰３　标准品吡利霉素(Pirlimycin,C１７H３１ClN２O５S,CAS号:７９５４８Ｇ７３Ｇ５),含量≥９９􀆰０％.５􀆰４　标准溶液的制备５􀆰４􀆰１　标准储备液:精密称取吡利霉素标准品约１０mg,于１０mL容量瓶中,用甲醇溶解并稀释至刻度,配制成浓度为１mg/mL的吡利霉素标准储备液.－１８℃以下保存,有效期１２个月.５􀆰４􀆰２　标准中间液:精密量取吡利霉素标准储备液０􀆰１mL,于１０mL容量瓶中,用甲醇稀释至刻度,配制成浓度为１０μg/mL的吡利霉素标准中间液.２℃~８℃保存,有效期６个月.１GB３１６１３􀆰４—２０２２５􀆰４􀆰３　标准工作液:精密量取吡利霉素标准中间液０􀆰１mL,于１０mL容量瓶中,用８０％甲醇稀释至刻度,配制成浓度为１００ng/mL的吡利霉素标准工作液.２℃~８℃保存,有效期６个月.５􀆰５　材料５􀆰５􀆰１　固相萃取小柱:基质增强脂肪去除柱(３００mg/３mL),或相当者.５􀆰５􀆰２　陶瓷均质子.５􀆰５􀆰３　亲水性聚四氟乙烯微孔滤膜:０􀆰２２μm.６　仪器和设备６􀆰１　液相色谱Ｇ串联质谱仪:配有电喷雾离子源(ESI).６􀆰２　分析天平:感量０􀆰０１g和０􀆰００００１g.６􀆰３　涡旋混合器.６􀆰４　高速离心机.７　试样的制备与保存７􀆰１　试样的制备取适量新鲜或解冻的空白或供试样品,绞碎并均质.a)　取均质后的供试样品,作为供试试样;b)　取均质后的空白样品,作为空白试样;c)　取均质后的空白样品,添加适宜浓度的标准工作液,作为空白添加试样.７􀆰２　试样的保存－１８℃以下保存.８　测定步骤８􀆰１　提取称取试料２g(准确至±０􀆰０５g)于５０mL离心管中,加入陶瓷均质子,加入５％甲酸乙腈溶液１０mL,涡旋３０s,加入无水硫酸钠４g、氯化钠１g,涡旋３０s,４℃下８０００r/min离心８min后,快速移取上层乙腈２􀆰４mL至另一离心管中,加水０􀆰６mL,混匀,备用.８􀆰２　净化将备用液直接过固相萃取小柱,自然流出,收集滤液,并挤干.取滤液适量过微孔滤膜后,供液相色谱Ｇ串联质谱仪测定.８􀆰３　基质匹配标准曲线的制备精密量取吡利霉素标准工作液适量,用提取净化后的空白试样溶液稀释成含药物浓度分别为１ng/mL、２ng/mL、５ng/mL、１０ng/mL、１００ng/mL和４００ng/mL的基质匹配系列标准溶液,从中各取１􀆰０mL,过微孔滤膜上机测定.以特征离子质量色谱峰面积为纵坐标、基质匹配标准溶液浓度为横坐标,绘制标准曲线.８􀆰４　测定８􀆰４􀆰１　液相色谱参考条件a)　色谱柱:五氟苯基柱(５０mm×３􀆰０mm,２􀆰６μm),或性能相当者.b)　流动相:A为０􀆰１％甲酸溶液,B为０􀆰１％甲酸乙腈溶液.流动相梯度:０min~１min保持１０％B;１min~３min,１０％B线性变化到９０％B;３min~４min保持９０％B;４min~５min保持１０％B.c)　流速:０􀆰４mL/min.d)　进样量:５μL.２GB３１６１３􀆰４—２０２２e)　柱温:３０℃.８􀆰４􀆰２　串联质谱参考条件a)　离子源:电喷雾离子源;b)　扫描方式:正离子扫描;c)　检测方式:多反应离子监测(MRM);d)　电喷雾电压:５５００V.e)　离子源温度:５００℃.f)　辅助气１:５０psi.g)　辅助气２:５０psi.h)　气帘气:２５psi.i)　碰撞气:Medium.j)　吡利霉素定性、定量离子对和对应的去簇电压、碰撞能量参考值见表１.表１　吡利霉素定性、定量离子对和对应的去簇电压、碰撞能量药物定性离子对m/z定量离子对m/z去簇电压V碰撞能量eV吡利霉素４１１􀆰２＞３６３􀆰３４１１􀆰２＞１１２􀆰１４１１􀆰２＞１１２􀆰１６０２０４０８􀆰４􀆰３　测定法试样溶液的保留时间在基质匹配标准溶液保留时间的±２􀆰５％之内.试样溶液中的离子相对丰度与基质匹配标准溶液中的离子相对丰度相比,符合表２的要求.表２　试样溶液中离子相对丰度的允许偏差范围单位为百分号相对丰度允许偏差＞５０±２０＞２０~５０±２５＞１０~２０±３０≤１０±５０取基质匹配标准溶液和试样溶液,作单点或多点校准,按外标法,以峰面积计算.基质匹配标准溶液及试样溶液中吡利霉素的峰面积应在仪器检测的线性范围之内,超出线性范围时进行适当倍数稀释后再进行分析.基质匹配标准溶液中特征离子质量色谱图见附录A中图A􀆰１.８􀆰５　空白试验取空白试料,除不加药物外,采用完全相同的测定步骤进行测定.９　结果计算和表述试样中吡利霉素的残留量按标准曲线或公式(１)计算.X＝C×A×V１×V３×１０００As×V２×m×１０００(１)􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺式中:X———试样中吡利霉素残留量的数值,单位为微克每千克(μg/kg);C———基质匹配标准溶液中吡利霉素浓度的数值,单位为纳克每毫升(ng/mL);A———试样溶液中吡利霉素的峰面积;As———基质匹配标准溶液中吡利霉素的峰面积;V１———提取液总体积的数值,单位为毫升(mL);V２———上清液中取出溶液体积的数值,单位为毫升(mL);３GB３１６１３􀆰４—２０２２V３———最终溶液体积的数值,单位为毫升(mL);m———试样质量的数值,单位为克(g).１０　方法灵敏度、准确度和精密度１０􀆰１　灵敏度本方法对牛肌肉、肝脏、肾脏和脂肪的检测限为２μg/kg,定量限为１０μg/kg.１０􀆰２　准确度本方法吡利霉素在牛肌肉１０μg/kg~２００μg/kg、肝脏１０μg/kg~２０００μg/kg、肾脏１０μg/kg~８００μg/kg、脂肪１０μg/kg~２００μg/kg添加浓度上的回收率为６０％~１１０％.１０􀆰３　精密度本方法批内相对标准偏差≤１５％,批间相对标准偏差≤２０％.４GB３１６１３􀆰４—２０２２附　录　A(资料性)吡利霉素特征离子质量色谱图空白牛肝脏基质匹配标准溶液中吡利霉素特征离子质量色谱图见图A􀆰１.图A􀆰１　空白牛肝脏基质匹配标准溶液中吡利霉素特征离子质量色谱图(１􀆰６ng/mL)５