GB 31656.15-2022 食品安全国家标准 水产品中甲苯咪唑及其代谢物残留量的测定 液相色谱

中华人民共和国国家卫生健康委员会食品安全国家标准水产品中甲苯咪唑及其代谢物残留量的测定液相色谱-串联质谱法20中华人民共和国国家标准备案号：XXXX-XXXXＩＣＳ67.120.30X31656.15—2022Nationalfoodsafetystandard—Determinationofmebendazoleanditsmetabolitesresiduesinaquaticproductsbyliquidchromatography-tandemmassspectrometrymethodGB20220920发布－－20230201－－实施发布国家市场监督管理总局中华人民共和国农业农村部CCSGB３１６５６􀆰１５—２０２２前　　言本文件按照GB/T１􀆰１—２０２０«标准化工作导则　第１部分:标准化文件的结构和起草规则»的规定起草.本文件系首次发布.ⅠGB３１６５６􀆰１５—２０２２食品安全国家标准水产品中甲苯咪唑及其代谢物残留量的测定液相色谱Ｇ串联质谱法１　范围本文件规定了水产品中甲苯咪唑及其主要代谢物羟基甲苯咪唑和氨基甲苯咪唑残留量检测的制样和液相色谱Ｇ串联质谱测定方法.本文件适用于鱼、虾和鳖可食组织中甲苯咪唑及其主要代谢物羟基甲苯咪唑和氨基甲苯咪唑残留量的检测.２　规范性引用文件下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款.其中,注日期的引用文件,仅该日期对应的版本适用于本文件;不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件.GB/T６６８２　分析实验室用水规则和试验方法GB/T３０８９１—２０１４　水产品抽样规范３　术语和定义本文件没有需要界定的术语和定义.４　原理试样中残留的甲苯咪唑、羟基甲苯咪唑和氨基甲苯咪唑,用乙酸乙酯提取,正己烷除脂,用液相色谱Ｇ串联质谱法检测,内标法定量.５　试剂和材料除另有规定外,所有试剂均为分析纯,水为符合GB/T６６８２规定的一级水.５􀆰１　试剂５􀆰１􀆰１　甲酸(HCOOH):色谱纯.５􀆰１􀆰２　乙酸乙酯(CH３COOHC２H５):色谱纯.５􀆰１􀆰３　甲醇(CH３OH):色谱纯.５􀆰１􀆰４　正己烷(C６H１４):色谱纯.５􀆰１􀆰５　二甲基亚砜[(CH３)２SO]:色谱纯.５􀆰２　溶液的配制５􀆰２􀆰１　５０mmol/L磷酸氢二钠溶液:取磷酸氢二钠８􀆰９５g,用水溶解并稀释至５００mL.５􀆰２􀆰２　０􀆰１％甲酸溶液:取０􀆰５mL甲酸,加水溶解并稀释至５００mL,混匀.５􀆰２􀆰３　甲醇Ｇ０􀆰１％甲酸溶液(５０∶５０,V/V):取甲醇、０􀆰１％的甲酸溶液等体积混匀.５􀆰３　标准品甲苯咪唑(MBZ),含量≥９９􀆰０％;羟基甲苯咪唑(MBZＧOH),含量≥９９􀆰０％;氨基甲苯咪唑(MBZＧNH２),含量≥９９􀆰０％;氘代甲苯咪唑(MBZＧD３),含量≥９９􀆰５％;氘代羟基甲苯咪唑(MBZＧOHＧD３),含量≥９９􀆰０％.具体见附录A.５􀆰４　标准溶液的制备１GB３１６５６􀆰１５—２０２２５􀆰４􀆰１　标准储备液(１００μg/mL):取甲苯咪唑、羟基甲苯咪唑和氨基甲苯咪唑标准品各１０mg,精密称定,分别用１０mL二甲基亚砜溶解,加甲醇稀释定容至１００mL容量瓶,摇匀.－１８℃以下保存,有效期３个月.５􀆰４􀆰２　混合标准工作液:精密量取甲苯咪唑、羟基甲苯咪唑和氨基甲苯咪唑标准储备液各１mL,用甲醇Ｇ０􀆰１％甲酸溶液稀释配制成浓度为１０００ng/mL、１００ng/mL、１０ng/mL３个浓度混合标准工作液.现用现配.５􀆰４􀆰３　内标标准储备液(１００μg/mL):取氘代甲苯咪唑和氘代羟基甲苯咪唑标准品各１０mg,精密称定,分别用１０mL二甲基亚砜溶解,用甲醇稀释定容至１００mL容量瓶,摇匀.－１８℃以下保存,有效期３个月.５􀆰４􀆰４　混合内标工作液:精密量取氘代甲苯咪唑和氘代羟基甲苯咪唑内标标准储备液各１mL,用甲醇Ｇ０􀆰１％甲酸溶液稀释成含氘代甲苯咪唑和氘代羟基甲苯咪唑浓度分别为５０ng/mL和１０ng/mL的混合内标工作液.现用现配.５􀆰５　材料微孔尼龙滤膜:０􀆰２２μm.６　仪器和设备６􀆰１　液相色谱Ｇ串联质谱仪(LCＧMS/MS):配电喷雾离子源(ESI).６􀆰２　分析天平:感量０􀆰００００１g和０􀆰０１g.６􀆰３　离心机:８０００r/min.６􀆰４　涡旋混合器.６􀆰５　超声波清洗仪.６􀆰６　氮吹仪.６􀆰７　具塞聚丙烯离心管:５０mL.７　试样的制备与保存７􀆰１　试样的制备按GB/T３０８９１—２０１４附录B的要求制样.a)　取均质后的供试样品,作为供试试料;b)　取均质后的空白样品,作为空白试料;c)　取均质后的空白样品,添加适宜浓度的标准工作液,作为空白添加试料.７􀆰２　试样的保存－１８℃以下保存.８　测定步骤８􀆰１　提取取试料２g(准确至±０􀆰０５g),于５０mL具塞离心管,准确加入混合内标工作液１００μL,涡旋振荡２min,加５０mmol/L的磷酸氢二钠溶液５mL,涡旋振荡１min,加乙酸乙酯６mL,涡旋振荡１min,８０００r/min离心６min,收集上清液(乙酸乙酯层),残渣加乙酸乙酯３mL重复提取１次,合并上清液,备用.８􀆰２　净化取备用液,４０℃氮气吹干,用甲醇Ｇ０􀆰１％甲酸溶液２􀆰０mL溶解残留物,加正己烷２mL,涡旋振荡１min,８０００r/min离心６min,弃去上层正己烷层,重复去脂１次,取澄清液,过０􀆰２２μm滤膜,供液相色谱Ｇ串联质谱仪测定.２GB３１６５６􀆰１５—２０２２８􀆰３　标准曲线的制作精密量取标准工作液和内标工作液适量,用甲醇Ｇ０􀆰１％甲酸溶液稀释成甲苯咪唑、氨基甲苯咪唑和羟基甲苯咪唑的浓度均为０􀆰５ng/mL、１ng/mL、２ng/mL、５ng/mL、１０ng/mL、２０ng/mL、５０ng/mL、１００ng/mL系列标准工作液(内标氘代甲苯咪唑浓度为２􀆰５ng/mL、氘代羟基甲苯咪唑为０􀆰５ng/mL),供液相色谱Ｇ串联质谱测定.分别以各药物浓度与内标物浓度的比值为横坐标(x)、各药物的峰面积与同位素内标峰面积的比值为纵坐标(y)绘制标准曲线.求回归方程和相关系数.８􀆰４　测定８􀆰４􀆰１　色谱参考条件a)　色谱柱:C１８(１００mm×２􀆰１mm,粒径３μm),或性能相当者;b)　柱温:３０℃;c)　进样量:１０μL;d)　流速:０􀆰２mL/min;e)　流动相:A为甲醇;B为０􀆰１％甲酸溶液,梯度洗脱程序见表１.表１　流动相及梯度洗脱条件时间,minA,％B,％０􀆰０３５６５０􀆰２５０５０３􀆰０６５３５７􀆰０６５３５７􀆰５３５６５１０􀆰０３５６５８􀆰４􀆰２　质谱参考条件a)　离子源:电喷雾离子源(ESI);b)　扫描方式:正离子扫描;c)　喷雾电压:３５００V;d)　鞘气压力:３０L/min;e)　辅助气压力:１５L/min;f)　离子传输管温度:３５０℃;g)　源内碰撞诱导解离电压:１２V;h)　检测方式:选择反应监测(SRM),选择反应监测母离子、子离子、碰撞能量见表２;i)　Q１半峰宽:０􀆰４Da;j)　Q３半峰宽:０􀆰７Da;k)　碰撞气压力:氩气,０􀆰２Pa.表２　母离子、子离子和碰撞能量目标化合物母离子m/z子离子m/z碰撞能量eV甲苯咪唑２９６􀆰０１０５􀆰０∗２４７７􀆰２３３羟基甲苯咪唑２９８􀆰０１６０􀆰０∗３１２６６􀆰０２０氨基甲苯咪唑２３８􀆰０１０５􀆰１∗２９７７􀆰２１７氘代羟基甲苯咪唑３０１􀆰１２６６􀆰０２０氘代甲苯咪唑２９９􀆰０１０５􀆰１３２　　注:∗为定量离子.３GB３１６５６􀆰１５—２０２２８􀆰４􀆰３　测定法８􀆰４􀆰３􀆰１　定性测定在同样测试条件下,试料溶液中甲苯咪唑及其代谢物的保留时间与标准工作液中的保留时间之比,偏差在±２􀆰５％以内,且检测到的离子相对丰度,应当与浓度相当的校正标准溶液相对丰度一致,其允许偏差应符合表３的要求.表３　定性确证时相对离子丰度的最大允许偏差单位为百分号相对离子丰度允许偏差＞５０±２０＞２０~５０±２５＞１０~２０±３０≤１０±５０８􀆰４􀆰３􀆰２　定量测定取试料溶液和标准工作液,作单点或多点校准,甲苯咪唑以氘代甲苯咪唑为内标,羟基甲苯咪唑和氨基甲苯咪唑以氘代羟基甲苯咪唑为内标,以色谱峰面积定量,内标法计算.标准溶液及试料溶液中目标药物的特征离子质量色谱峰峰面积均应在仪器检测的线性范围之内.标准溶液特征离子质量色谱图见附录B.８􀆰５　空白试验取空白试料,除不加药物外,采用完全相同的测定步骤进行平行操作.９　结果计算和表述试样中待测物的残留量按标准曲线或公式(１)计算.X＝Ai×A′is×Cs×Cis×VAis×As×C′is×m(１)􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺式中:X———试样中被测物质残留量的数值,单位为微克每千克(μg/kg);Cs———标准工作溶液中被测物质浓度的数值,单位为纳克每毫升(ng/mL);Cis———试样溶液中内标浓度的数值,单位为纳克每毫升(ng/mL);C′is———标准工作溶液中内标浓度的数值,单位为纳克每毫升(ng/mL);Ai———试样溶液中被测物质的峰面积;A′is———标准工作溶液中内标的峰面积;Ais———试样溶液中内标的峰面积;As———标准工作溶液中被测物质的峰面积;V———试样溶液定容体积的数值,单位为毫升(mL);m———供试试样质量的数值,单位为克(g).１０　检测方法灵敏度、准确度、精密度１０􀆰１　灵敏度本方法甲苯咪唑、氨基甲苯咪唑和羟基甲苯咪唑的检测限均为０􀆰５μg/kg,定量限为１μg/kg.１０􀆰２　准确度本方法添加浓度为１μg/kg~４０μg/kg时,回收率均为７０％~１２０％.１０􀆰３　精密度本方法的批内相对标准偏差≤１５％,批间相对标准偏差≤１５％.４GB３１６５６􀆰１５—２０２２附　录　A(资料性)甲苯咪唑及其代谢物、内标物的英文名称、分子式和CAS号甲苯咪唑及其代谢物、内标物的英文名称、分子式和CAS号见表A􀆰１.表A􀆰１　甲苯咪唑及其代谢物、内标物的英文名称、CAS号化合物英文名分子式CAS号甲苯咪唑MebendazoleC１６H１３N３O３３１４３１Ｇ３９Ｇ７羟基甲苯咪唑５ＧHydroxymebendazoleC１６H１５N３O３６０２５４Ｇ９５Ｇ７氨基甲苯咪唑AminomebendazoleC１４H１１N３O５２３２９Ｇ６０Ｇ９氘代甲苯咪唑MebendazoleＧD３C１６H１０D３N３O３１１７３０２１Ｇ８７Ｇ８氘代羟基甲苯咪唑５ＧHydroxymebendazoleＧD３C１６H１２D３N３O３１１７３０２０Ｇ８６Ｇ４５GB３１６５６􀆰１５—２０２２附　录　B(资料性)标准溶液特征离子质量色谱图标准溶液中甲苯咪唑、羟基甲苯咪唑、氨基甲苯咪唑及氘代甲苯咪唑和氘代羟基甲苯咪唑特征离子质量色谱图见图B􀆰１.标引序号说明:１———氨基甲苯咪唑特征离子质量色谱图(２３８􀆰０＞１０５􀆰１);２———羟基甲苯咪唑特征离子质量色谱图(２９８􀆰０＞１６０􀆰０);３———甲苯咪唑特征离子质量色谱图(２９６􀆰０＞１０５􀆰０);４———氘代羟基甲苯咪唑特征离子质量色谱图(３０１􀆰１＞２６６􀆰０);５———氘代甲苯咪唑特征离子质量色谱图(２９９􀆰０＞１０５􀆰１).图B􀆰１　标准溶液中甲苯咪唑、羟基甲苯咪唑、氨基甲苯咪唑及氘代甲苯咪唑和氘代羟基甲苯咪唑特征离子质量色谱图(５ng/mL)６