GB 31658.19-2022 食品安全国家标准 动物性食品中阿托品、东莨菪碱、山莨菪碱、 利多卡

中华人民共和国国家卫生健康委员会食品安全国家标准动物性食品中阿托品、东莨菪碱、山莨菪碱、利多卡因、普鲁卡因残留量的测定液相色谱-串联质谱法04中华人民共和国国家标准备案号：XXXX-XXXXＩＣＳ67.050X31658.19—2022Nationalfoodsafetystandard—Determinationofatropine,scopolamine,anisodamine,lidocaine,procaineresiduesinanimalderivedfood—Liquidchromatography-tandemmassspectrometricmethodGB20220920发布－－20230201－－实施发布国家市场监督管理总局中华人民共和国农业农村部CCSGB３１６５８􀆰１９—２０２２前　　言本文件按照GB/T１􀆰１—２０２０«标准化工作导则　第１部分:标准化文件的结构和起草规则»的规定起草.本文件系首次发布.ⅠGB３１６５８􀆰１９—２０２２食品安全国家标准动物性食品中阿托品、东莨菪碱、山莨菪碱、利多卡因、普鲁卡因残留量的测定　液相色谱Ｇ串联质谱法１　范围本文件规定了动物性食品中阿托品、东莨菪碱、山莨菪碱、利多卡因、普鲁卡因残留量检测的制样和液相色谱Ｇ串联质谱检测方法.本文件适用于猪、牛、羊的肌肉、肝脏、肾脏和脂肪中阿托品、东莨菪碱、山莨菪碱、利多卡因、普鲁卡因单个或多个药物残留量的测定.２　规范性引用文件下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款.其中,注日期的引用文件,仅该日期对应的版本适用于本文件;不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件.GB/T６６８２　分析实验室用水规格和试验方法３　术语和定义本文件没有需要界定的术语和定义.４　原理试样中残留的待测物经磷酸盐缓冲液提取,PEPＧ２固相萃取柱净化,液相色谱Ｇ串联质谱测定,外标法定量.５　试剂和材料除另有规定外,所有试剂均为分析纯,水为符合GB/T６６８２规定的一级水.５􀆰１　试剂５􀆰１􀆰１　甲醇(CH３OH):色谱纯.５􀆰１􀆰２　乙腈(CH３CN):色谱纯.５􀆰１􀆰３　甲酸(HCOOH):色谱纯.５􀆰１􀆰４　磷酸二氢钾(KH２PO４).５􀆰１􀆰５　磷酸氢二钾(K２HPO４􀅰３H２O).５􀆰１􀆰６　磷酸(H３PO４).５􀆰２　溶液配制５􀆰２􀆰１　０􀆰１mol/L磷酸二氢钾缓冲液:取磷酸二氢钾１３􀆰６g,加水９００mL使溶解,用磷酸调节pH至４􀆰０±０􀆰０５,用水稀释至１０００mL,混匀.５􀆰２􀆰２　０􀆰２mol/L磷酸氢二钾溶液:取磷酸氢二钾２２􀆰８g,加水溶解并稀释至５００mL,混匀.５􀆰２􀆰３　５％甲醇溶液:取甲醇５mL,加水稀释至１００mL,混匀.５􀆰２􀆰４　３０％乙腈溶液:取乙腈３０mL,加水稀释至１００mL,混匀.５􀆰２􀆰５　０􀆰１％甲酸溶液:取甲酸０􀆰５mL,加水稀释至５００mL,混匀.５􀆰３　标准品１GB３１６５８􀆰１９—２０２２阿托品(Atropine,C１７H２３NO３,CAS号:５１Ｇ５５Ｇ８)、东莨菪碱(Scopolamine,C１７H２１NO４,CAS号:５１Ｇ３４Ｇ３)、山莨菪碱(Anisodamine,C１７H２３NO４,CAS号:５５８６９Ｇ９９Ｇ３)、利多卡因(LidocaineC１４H２２N２O,CAS号:１３７Ｇ５８Ｇ６)、普鲁卡因(Procaine,C１３H２０N２O２,CAS号:５９Ｇ４６Ｇ１),含量均≥９９％.标准品也可为相应的盐.５􀆰４　标准溶液配制５􀆰４􀆰１　标准储备液:取阿托品、东莨菪碱、山莨菪碱、利多卡因、普鲁卡因标准品各适量(相当于各活性成分约１０mg),精密称定,加甲醇适量使溶解并稀释定容至１０mL容量瓶,配制成浓度为１mg/mL的标准储备液.－１８℃避光保存,有效期６个月.５􀆰４􀆰２　混合标准中间液:准确量取标准储备液各１mL,于１００mL容量瓶中,用甲醇稀释至刻度,配制成浓度为１０μg/mL的混合标准工作液.－１８℃避光保存,有效期１个月.５􀆰４􀆰３　系列标准工作液:准确量取混合标准中间液适量,用３０％乙腈溶液稀释,配制成浓度分别为１ng/mL、２ng/mL、５ng/mL、１０ng/mL、２０ng/mL、５０ng/mL和１００ng/mL的系列标准溶液.现配现用.５􀆰５　材料１)　此处列出PEPＧ２固相萃取柱仅是为了提供参考,并不涉及商业目的,鼓励标准使用者尝试采用不同厂家或型号的固相萃取柱.５􀆰５􀆰１　PEPＧ２固相萃取柱１):填料为官能化聚苯乙烯/二乙烯苯,６０mg/３mL,或相当者.５􀆰５􀆰２　微孔尼龙滤膜:０􀆰２２μm.６　仪器和设备６􀆰１　液相色谱Ｇ串联质谱仪:配电喷雾离子源.６􀆰２　分析天平:感量０􀆰０１g和０􀆰００００１g.６􀆰３　涡旋混合器.６􀆰４　涡旋振荡器.６􀆰５　高速冷冻离心机:转速可达１００００r/min.６􀆰６　固相萃取装置.６􀆰７　组织匀浆机.６􀆰８　pH计.７　试料的制备与保存７􀆰１　试料的制备取适量新鲜或解冻的空白或供试组织,绞碎,并使均质.a)　取均质后的供试样品,作为供试试料;b)　取均质后的空白样品,作为空白试料;c)　取均质后的空白样品,添加适宜浓度的标准溶液,作为空白添加试料.７􀆰２　试料的保存－１８℃以下保存.８　测定步骤８􀆰１　提取取试料２g(准确至±０􀆰０５g)于５０mL离心管中,准确加入０􀆰１mol/L磷酸二氢钾缓冲液２０mL(脂肪样品在６０℃水浴加热１０min),涡旋１min,振荡１０min,４℃下１００００r/min离心１０min.准确移取１０mL上清液至另一离心管中,加入０􀆰２mol/L磷酸氢二钾溶液５mL,混匀后备用.若溶液浑浊,１００００r/min离心１０min,取上清液备用.２GB３１６５８􀆰１９—２０２２８􀆰２　净化PEPＧ２固相萃取柱分别用甲醇３mL、水３mL活化,移取全部备用液,过柱,用水３mL、５％甲醇溶液３mL淋洗,抽干,准确移取３０％乙腈溶液２mL洗脱,抽干,收集洗脱液,过微孔尼龙滤膜,供液相色谱Ｇ串联质谱测定.８􀆰３　基质匹配标准曲线的制备准确移取系列标准工作液各１００μL,用经８􀆰１~８􀆰２步骤处理后的空白试样洗脱液稀释至１mL,配制成浓度为０􀆰１ng/mL、０􀆰２ng/mL、０􀆰５ng/mL、１ng/mL、２ng/mL、５ng/mL和１０ng/mL的系列基质匹配标准溶液,过微孔尼龙滤膜后,供液相色谱Ｇ串联质谱测定.以各药物特征离子质量色谱峰面积为纵坐标,基质匹配标准溶液浓度为横坐标,绘制基质匹配标准曲线,求回归方程和相关系数.８􀆰４　测定８􀆰４􀆰１　液相色谱参考条件a)　色谱柱:C１８色谱柱(１００mm×２􀆰１mm,１􀆰７μm),或相当者;b)　柱温:３５℃;c)　进样量:２μL;d)　流速:０􀆰３mL/min;e)　流动相:A为０􀆰１％甲酸溶液;B为甲醇.梯度洗脱程序见表１.表１　流动相梯度洗脱程序时间minA％B％０９０１００􀆰５９０１０３􀆰０５９５３􀆰９５９５４􀆰０９０１０６􀆰０９０１０８􀆰４􀆰２　质谱参考条件a)　离子源:电喷雾离子源;b)　扫描方式:正离子扫描;c)　检测方式:多反应监测;d)　喷雾电压:１􀆰０kV;e)　鞘气:３０Arb;f)　辅助气:５Arb;g)　离子迁移管温度:３２５℃;h)　雾化温度:３００℃;i)　待测药物的保留时间、定性离子对、定量离子对、锥孔电压和碰撞能量的参考值见表２.表２　待测药物的保留时间、定性离子对、定量离子对、锥孔电压和碰撞能量的参考值药物保留时间min定性离子对m/z定量离子对m/z锥孔电压V碰撞能量eV阿托品２􀆰９７２９０􀆰３＞１２４􀆰２２９０􀆰３＞９３􀆰２２９０􀆰３＞１２４􀆰２８９２４２９东莨菪碱２􀆰７０３０４􀆰２＞１３８􀆰２３０４􀆰２＞１５６􀆰２３０４􀆰２＞１３８􀆰２７７２２１７山莨菪碱３􀆰０７３０６􀆰２＞１４０􀆰２３０６􀆰２＞１２２􀆰２３０６􀆰２＞１４０􀆰２９４２４２８利多卡因２􀆰２４２３５􀆰２＞８６􀆰２２３５􀆰２＞５８􀆰２２３５􀆰２＞８６􀆰２６３１８３１３GB３１６５８􀆰１９—２０２２表２(续)药物保留时间min定性离子对m/z定量离子对m/z锥孔电压V碰撞能量eV普鲁卡因２􀆰８０２３７􀆰２＞１００􀆰２２３７􀆰２＞１６４􀆰１２３７􀆰２＞１００􀆰２５８１６１７８􀆰４􀆰３　测定法８􀆰４􀆰３􀆰１　定性测定在同样测试条件下,试料溶液中待测物药物峰的保留时间与基质匹配标准溶液相应峰的保留时间相对偏差在±２􀆰５％以内,且检测到的相对离子丰度,应当与浓度相当的基质匹配标准溶液相对离子丰度一致.其允许偏差应符合表３要求.表３　定性确证时相对离子丰度的最大允许偏差单位为百分号相对离子丰度允许偏差＞５０±２０＞２０~５０±２５＞１０~２０±３０≤１０±５０８􀆰４􀆰３􀆰２　定量测定取试料溶液和相应的基质匹配标准溶液,作单点或多点校准,按外标法以色谱峰面积定量.基质匹配标准工作液及试样溶液中待测物响应值均应在仪器检测的线性范围内.在上述色谱Ｇ质谱条件下,基质匹配标准溶液的特征离子质量色谱图见附录A.８􀆰５　空白试验取空白试料,除不加药物外,采用相同的测定步骤进行测定.９　结果计算和表述试样中待测物残留量按标准曲线或公式(１)计算:X＝CS×A×V×V２AS×m×V１(１)􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺式中:X———试样中待测物残留量的数值,单位为微克每千克(μg/kg);CS———基质标准溶液中待测物浓度的数值,单位为纳克每毫升(ng/mL);A———试样溶液中待测物的峰面积;AS———基质标准溶液中待测物的峰面积;V———洗脱液体积的数值,单位为毫升(mL);V１———净化用提取液体积的数值,单位为毫升(mL);V２———试样提取液总体积的数值,单位为毫升(mL);m———试样质量的数值,单位为克(g).１０　检测方法灵敏度、准确度和精密度１０􀆰１　灵敏度本方法在猪、牛、羊的肌肉和脂肪组织中的检测限为０􀆰２μg/kg,定量限为０􀆰５μg/kg;在猪、牛、羊的肾脏和肝脏组织中的检测限为０􀆰５μg/kg,定量限为１􀆰０μg/kg.１０􀆰２　准确度本方法在猪、牛、羊的肌肉和脂肪组织０􀆰５μg/kg~５μg/kg添加浓度水平上的回收率为６０％~４GB３１６５８􀆰１９—２０２２１２０％;在猪、牛、羊的肾脏和肝脏组织１􀆰０μg/kg~１０μg/kg添加浓度水平上的回收率为６０％~１２０％.１０􀆰３　精密度本方法批内相对标准偏差≤１５％,批间相对标准偏差≤１５％.５GB３１６５８􀆰１９—２０２２附　录　A(资料性)猪肝基质匹配标准溶液特征离子色谱图猪肝基质匹配标准溶液特征离子质量色谱图见图A􀆰１.标引序号说明:１———阿托品特征离子质量色谱图(２９０􀆰２７＞１２４􀆰１５);２———东莨菪碱特征离子质量色谱图(３０４􀆰２４＞１３８􀆰１７);３———利多卡因特征离子质量色谱图(２３５􀆰２４＞８６􀆰１５);４———普鲁卡因特征离子质量色谱图(２３７􀆰１８＞１００􀆰２２);５———山莨菪碱特征离子质量色谱图(３０６􀆰２４＞１４０􀆰１５).图A􀆰１　猪肝基质匹配标准溶液特征离子质量色谱图(０􀆰５ng/mL)６