GB 31658.21-2022 食品安全国家标准 动物性食品中左旋咪唑残留量的测定 液相色谱-串联

中华人民共和国国家卫生健康委员会食品安全国家标准动物性食品中左旋咪唑残留量的测定液相色谱-串联质谱法04中华人民共和国国家标准备案号：XXXX-XXXXＩＣＳ67.050X31658.21—2022Nationalfoodsafetystandard—Determinationoflevamisoleresidueinanimalderivedfoodbyliquidchromatography-tandemmassspectrometrymethodGB20220920发布－－20230201－－实施发布国家市场监督管理总局中华人民共和国农业农村部CCSGB３１６５８􀆰２１—２０２２前　　言本文件按照GB/T１􀆰１—２０２０«标准化工作导则　第１部分:标准化文件的结构和起草规则»的规定起草.本文件系首次发布.ⅠGB３１６５８􀆰２１—２０２２食品安全国家标准动物性食品中左旋咪唑残留量的测定液相色谱Ｇ串联质谱法１　范围本文件规定了动物性食品中左旋咪唑残留量检测的制样和液相色谱Ｇ串联质谱测定方法.本文件适用于猪、禽、牛、羊的肌肉、肝脏、肾脏和脂肪组织中左旋咪唑残留量的测定.２　规范性引用文件下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款.其中,注日期的引用文件,仅该日期对应的版本适用于本文件;不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件.GB/T６６８２　分析实验室用水规格和试验方法３　术语和定义本文件没有需要界定的术语和定义.４　原理试样中残留的左旋咪唑,在碱性条件下用乙酸乙酯提取,０􀆰１mol/L盐酸溶液萃取,混合型阳离子交换固相萃取柱净化,液相色谱Ｇ串联质谱测定,外标法定量.５　试剂或材料除另有规定外,所有试剂均为分析纯,水为符合GB/T６６８２规定的一级水.５􀆰１　试剂５􀆰１􀆰１　乙腈(CH３CN):色谱纯.５􀆰１􀆰２　甲醇(CH３OH):色谱纯.５􀆰１􀆰３　甲酸(HCOOH):色谱纯.５􀆰１􀆰４　乙酸乙酯(C４H８O２).５􀆰１􀆰５　无水硫酸钠(Na２SO４).５􀆰１􀆰６　碳酸氢钠(NaHCO３).５􀆰１􀆰７　碳酸钠(Na２CO３).５􀆰１􀆰８　盐酸(HCl).５􀆰１􀆰９　氨水(NH３􀅰H２O).５􀆰２　溶液配制５􀆰２􀆰１　碳酸氢钠饱和溶液:取水１００mL,加无水碳酸氢钠至不溶解为止,取上清液,现用现配.５􀆰２􀆰２　碳酸钠饱和溶液:取水１００mL,加碳酸钠至不溶解为止,取上清液,现用现配.５􀆰２􀆰３　碳酸盐缓冲液:取碳酸氢钠饱和溶液９０mL、碳酸钠饱和溶液１０mL,混匀.５􀆰２􀆰４　０􀆰１mol/L盐酸溶液:取盐酸９mL,加水稀释至１０００mL,混匀.５􀆰２􀆰５　４％氨水甲醇溶液:取氨水４mL,用甲醇稀释至１００mL,混匀,现用现配.５􀆰２􀆰６　０􀆰１％甲酸溶液:取甲酸５００μL,用水稀释至５００mL,混匀.１GB３１６５８􀆰２１—２０２２５􀆰２􀆰７　１０％乙腈甲酸溶液:取乙腈１０mL,用０􀆰１％甲酸水溶液稀释至１００mL,混匀.５􀆰３　标准品盐酸左旋咪唑(Levamisolehydrochloride,C１１H１２N２S􀅰HCl,CAS号:１６５９５Ｇ８０Ｇ５),含量≥９９％.５􀆰４　标准溶液制备５􀆰４􀆰１　标准储备液:取盐酸左旋咪唑标准品适量(相当于左旋咪唑约１０mg),精密称定,加甲醇适量使溶解并稀释定容至１０mL容量瓶,配制成浓度为１mg/mL的左旋咪唑标准储备液.－１８℃保存,有效期６个月.５􀆰４􀆰２　标准工作液:精密量取标准储备液１mL,于１００mL容量瓶,用甲醇稀释至刻度,配制成浓度为１０μg/mL的左旋咪唑标准工作液.４℃保存,有效期３个月.５􀆰５　材料５􀆰５􀆰１　混合型阳离子交换固相萃取柱:６０mg/３mL,或相当者.５􀆰５􀆰２　陶瓷均质子.５􀆰５􀆰３　微孔尼龙滤膜:０􀆰２２μm.６　仪器设备６􀆰１　液相色谱Ｇ串联质谱仪:配电喷雾电离源.６􀆰２　分析天平:感量０􀆰００００１g和０􀆰０１g.６􀆰３　涡旋混合器.６􀆰４　涡旋振荡器.６􀆰５　高速冷冻离心机:转速≥１００００r/min.６􀆰６　固相萃取装置.６􀆰７　氮吹仪.７　试样的制备与保存７􀆰１　试样制备取适量新鲜或解冻的空白或供试组织,绞碎,并均质.a)　取均质后的供试样品,作为供试试样;b)　取均质后的空白样品,作为空白试样;c)　取均质后的空白样品,添加适宜浓度的标准溶液,作为空白添加试样.７􀆰２　试样保存－１８℃以下保存.８　测定步骤８􀆰１　提取取试料２g(准确至±０􀆰０５g),于５０mL聚丙烯离心管中(脂肪样品需在６０℃水浴下加热２０min),加入一粒陶瓷均质子,加碳酸盐缓冲液０􀆰５mL,无水硫酸钠２g,乙酸乙酯１０mL,涡旋１min,振荡５min,６０００r/min离心５min,取上层乙酸乙酯至另一离心管,残渣用乙酸乙酯１０mL重复提取一次,合并两次提取液,加０􀆰１mol/L盐酸溶液５mL,振荡５min,６０００r/min离心５min,取下层水相至另一离心管中,有机相中再加０􀆰１mol/L盐酸溶液５mL重复萃取一次,合并两次萃取液,备用.８􀆰２　净化取混合型阳离子交换固相萃取柱,依次用甲醇３mL、０􀆰１mol/L盐酸溶液３mL活化.取备用液过柱,流速控制在１mL/min~２mL/min,依次用水３mL、甲醇３mL淋洗,抽干,４％氨水甲醇溶液３mL洗脱,抽干,收集洗脱液,４０℃下氮气吹干.用１０％乙腈甲酸溶液１􀆰０mL溶解残余物,超声１min,过２GB３１６５８􀆰２１—２０２２０􀆰２２μm微孔尼龙滤膜,供液相色谱Ｇ串联质谱仪测定.８􀆰３　基质匹配标准曲线的制备精密量取标准工作液适量,用甲醇稀释,配制成浓度分别为１０ng/mL、２０ng/mL、５０ng/mL、１００ng/mL、２００ng/mL和５００ng/mL的系列标准溶液,各取１００μL,分别加于经提取、净化步骤处理的空白试料洗脱液中,于４０℃下氮气吹干,用１０％乙腈甲酸水溶液１􀆰０mL溶解残余物,超声１min,混匀.配制成浓度分别为１ng/mL、２ng/mL、５ng/mL、１０ng/mL、２０ng/mL和５０ng/mL的基质匹配标准溶液,过微孔尼龙滤膜,供液相色谱Ｇ串联质谱仪测定.以左旋咪唑定量离子质量色谱峰面积为纵坐标,基质匹配标准溶液浓度为横坐标,绘制基质匹配标准曲线.求回归方程和相关系数.８􀆰４　测定８􀆰４􀆰１　液相色谱参考条件a)　色谱柱:C１８色谱柱(５０mm×２􀆰１mm,１􀆰７μm),或相当者;b)　柱温:３５℃;c)　进样量:２μL;d)　流速:０􀆰３０mL/min;e)　流动相:A为０􀆰１％甲酸溶液;B为甲醇;梯度洗脱程序见表１.表１　梯度洗脱程序时间minA％B％０９５５１􀆰０９５５３􀆰５５９５４􀆰５５９５４􀆰６９５５６􀆰０９５５８􀆰４􀆰２　质谱参考条件a)　离子源:电喷雾离子源;b)　扫描方式:正离子扫描;c)　检测方式:多反应监测;d)　离子源温度:１５０℃;e)　脱溶剂温度:５００℃;f)　毛细管电压:０􀆰８kV;g)　定性离子对、定量离子对及锥孔电压和碰撞能量见表２.表２　左旋咪唑的质谱参考参数被测物名称定性离子对m/z定量离子对m/z锥孔电压V碰撞能量eV左旋咪唑２０５􀆰０＞１７８􀆰１２０５􀆰０＞１２３􀆰０２０５􀆰０＞１７８􀆰１５２２０２６８􀆰４􀆰３　测定法８􀆰４􀆰３􀆰１　定性测定在同样测试条件下,试料溶液中左旋咪唑的保留时间与基质匹配标准工作液中的保留时间相对偏差在±２􀆰５％以内,且检测到的相对离子丰度,应当与浓度相当的基质匹配标准溶液相对离子丰度一致.其允许偏差应符合表３要求.３GB３１６５８􀆰２１—２０２２表３　定性确证时相对离子丰度的最大允许误差单位为百分号相对离子丰度允许偏差＞５０±２０＞２０~５０±２５＞１０~２０±３０≤１０±５０８􀆰４􀆰３􀆰２　定量测定取试料溶液和相应的基质匹配标准工作液,作单点或多点校准,按外标法以峰面积定量,基质匹配标准工作液及试料溶液中的左旋咪唑响应值均应在仪器检测的线性范围内.在上述色谱Ｇ质谱条件下,左旋咪唑基质匹配标准溶液的特征离子质量色谱图见附录A.８􀆰５　空白试验除不加试料外,采用完全相同的测定步骤进行测定.９　结果计算和表述试样中待测物残留量按标准曲线或公式(１)计算.X＝Cs×A×VAs×m(１)􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺式中:X———试样中左旋咪唑残留量的数值,单位为微克每千克(μg/kg);　A———试样中左旋咪唑定量离子峰面积;As———基质匹配标准溶液中左旋咪唑定量离子峰面积;Cs———基质匹配标准溶液中左旋咪唑浓度的数值,单位为纳克每毫升(ng/mL);V———最终试样定容体积的数值,单位为毫升(mL);m———试样质量的数值,单位为克(g).１０　检测方法灵敏度、准确度和精密度１０􀆰１　灵敏度本方法的检测限为０􀆰５μg/kg,定量限为１􀆰０μg/kg.１０􀆰２　准确度本方法左旋咪唑在肌肉、肾脏和脂肪组织１􀆰０μg/kg~１０μg/kg添加浓度水平上的回收率为６０％~１２０％,１０μg/kg~２０μg/kg添加浓度水平上的回收率为７０％~１１０％;在肝脏组织１􀆰０μg/kg~１０μg/kg添加浓度水平上的回收率为６０％~１２０％,１０μg/kg~２００μg/kg添加浓度水平上的回收率为７０％~１１０％.１０􀆰３　精密度本方法批内相对标准偏差≤２０％,批间相对标准偏差≤２０％.４GB３１６５８􀆰２１—２０２２附　录　A(资料性)左旋咪唑肝脏基质匹配标准溶液特征离子质量色谱图左旋咪唑肝脏基质匹配标准溶液(２ng/mL)特征离子质量色谱图见图A􀆰１.图A􀆰１　左旋咪唑肝脏基质匹配标准溶液特征离子质量色谱图(２ng/mL)５