GB 31658.24-2022 食品安全国家标准 动物性食品中赛杜霉素残留量的测定 液相色谱-串联

中华人民共和国国家卫生健康委员会食品安全国家标准动物性食品中赛杜霉素残留量的测定液相色谱-串联质谱法04中华人民共和国国家标准备案号：XXXX-XXXXＩＣＳ67.050X31658.24—2022Nationalfoodsafetystandard—DeterminationofSemduramicinresiduesinanimalderivedfoodbyLiquidchromatography-tandemmassspectrometricmethodGB20220920发布－－20230201－－实施发布国家市场监督管理总局中华人民共和国农业农村部CCSGB３１６５８􀆰２４—２０２２前　　言本文件按照GB/T１􀆰１—２０２０«标准化工作导则　第１部分:标准化文件的结构和起草规则»的规定起草.本文件系首次发布.ⅠGB３１６５８􀆰２４—２０２２食品安全国家标准动物性食品中赛杜霉素残留量的测定液相色谱Ｇ串联质谱法１　范围本文件规定了动物性食品中赛杜霉素的超高效液相色谱Ｇ串联质谱测定方法.本文件适用于鸡肌肉和肝脏组织中赛杜霉素残留量的测定.２　规范性引用文件下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款.其中,注日期的引用文件,仅该日期对应的版本适用于本文件;不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件.GB/T６６８２　分析实验室用水规格和试验方法３　术语和定义本文件没有需要界定的术语和定义.４　原理试样中残留的赛杜霉素用乙腈提取,固相萃取柱净化,超高效液相色谱Ｇ串联质谱法检测,外标法定量.５　试剂和材料除特别注明者外均为分析纯试剂;水为符合GB/T６６８２规定的一级水.５􀆰１　试剂５􀆰１􀆰１　乙腈(CH３CN):色谱纯.５􀆰１􀆰２　甲醇(CH３OH):色谱纯.５􀆰１􀆰３　甲酸(HCOOH):色谱纯.５􀆰１􀆰４　二氯甲烷(CH２Cl２).５􀆰２　溶液配制５􀆰２􀆰１　５０％乙腈溶液:取乙腈５０mL,用水溶解并稀释至１００mL,混匀.５􀆰２􀆰２　８０％二氯甲烷甲醇溶液:取二氯甲烷８０mL,加甲醇２０mL,混匀.５􀆰２􀆰３　流动相A:取水１００mL,加甲酸０􀆰１mL,混匀.５􀆰２􀆰４　流动相B:取乙腈１００mL,加甲酸０􀆰１mL,混匀.５􀆰３　标准品赛杜霉素(Semduramicin,分子式:C４５H７５O１６,CAS号:１１３３７８Ｇ３１Ｇ７),含量≥９４􀆰３％.５􀆰４　标准溶液制备５􀆰４􀆰１　标准储备液:精密称取相当于赛杜霉素１０mg的对照品,用乙腈溶解并定容于１０mL容量瓶中,配制成浓度为１mg/mL的赛杜霉素标准储备液.－１８℃以下保存,有效期３个月.５􀆰４􀆰２　１０μg/mL赛杜霉素标准工作液:精密量取标准储备液０􀆰１mL于１０mL容量瓶中,用５０％乙腈水溶液稀释至刻度,配制成１０μg/mL赛杜霉素标准工作液.２℃~８℃保存,有效期１个月.１GB３１６５８􀆰２４—２０２２５􀆰４􀆰３　１μg/mL赛杜霉素标准工作液:精密量取１０μg/mL赛杜霉素标准工作液１􀆰０mL于１０mL容量瓶中,用５０％乙腈水溶液稀释至刻度,配制成１μg/mL赛杜霉素标准工作液.２℃~８℃保存,有效期１个月.５􀆰５　材料５􀆰５􀆰１　固相萃取柱:石墨化碳黑氨基固相萃取柱:５００mg/６mL.５􀆰５􀆰２　滤膜:有机相,０􀆰２２μm.６　仪器和设备６􀆰１　超高效液相色谱Ｇ串联质谱仪:配电喷雾离子源.６􀆰２　分析天平:感量０􀆰０１g和０􀆰００００１g.６􀆰３　高速离心机.６􀆰４　涡旋混合器.６􀆰５　水平振荡器.６􀆰６　均质机.６􀆰７　固相萃取装置.６􀆰８　氮吹仪.７　试样的制备与保存７􀆰１　试样制备取适量新鲜或解冻的空白或供试组织,绞碎,并均质.a)　取均质后的供试样品,作为供试试样;b)　取均质后的空白样品,作为空白试样;c)　取均质后的空白样品,添加适宜浓度的标准工作液,作为空白添加试样.７􀆰２　试样保存－２０℃以下保存.８　测定步骤８􀆰１　提取取试料２g(准确至±０􀆰０５g),于５０mL离心管内,加乙腈１２mL,涡旋混匀１min,振荡１０min,５０００r/min离心５min(肝脏８０００r/min),取上清液,加乙腈１２mL重复提取一次,合并两次提取液,备用.８􀆰２　净化萃取柱依次用二氯甲烷５mL和乙腈５mL活化,取备用液,过柱,控制流速２mL/min~３mL/min.抽干１０min,用８０％二氯甲烷甲醇溶液６mL洗脱,收集洗脱液,４０℃水浴中氮气吹干.用５０％乙腈水溶液溶解并稀释至２􀆰０mL,过滤,供超高效液相色谱Ｇ串联质谱测定.８􀆰３　基质匹配标准曲线的制备精密量取１μg/mL赛杜霉素标准工作液２０μL、４０μL和１００μL,１０μg/mL赛杜霉素标准工作液２０μL、１００μL和２００μL,分别加入６份按提取和净化处理的空白试料残渣中,用５０％乙腈水溶液溶解并稀释至２mL,配制成浓度为１０ng/mL、２０ng/mL、５０ng/mL、１００ng/mL、５００ng/mL和１０００ng/mL的基质匹配系列标准溶液,４℃１００００r/min离心１０min,取上清液,滤膜过滤,供超高效液相色谱Ｇ串联质谱测定.以测得特征离子色谱峰面积为纵坐标,基质匹配标准溶液浓度为横坐标,绘制基质匹配标准曲线.求回归方程和相关系数.８􀆰４　测定２GB３１６５８􀆰２４—２０２２８􀆰４􀆰１　色谱参考条件a)　色谱柱:C１８色谱柱(１００mm×２􀆰１mm,１􀆰７μm),或相当者;b)　流动相:A为０􀆰１％甲酸溶液,B为０􀆰１％甲酸乙腈溶液;c)　梯度洗脱:梯度洗脱程序见表１;d)　流速:０􀆰３mL/min;e)　柱温:３０℃;f)　进样量:１０μL.表１　梯度洗脱程序时间min流速mL/minA％B％００􀆰３９０１００􀆰５０􀆰３０１００２􀆰００􀆰３０１００２􀆰１０􀆰３９０１０３􀆰５０􀆰３９０１０８􀆰４􀆰２　质谱参考条件a)　离子源:电喷雾离子源;b)　扫描方式:正离子扫描;c)　检测方式:多反应监测;d)　电离电压:３􀆰０kV;e)　源温:１００℃;f)　雾化温度:３５０℃;g)　锥孔气流速:２０L/h;h)　雾化气流速:６００L/h;i)　测试药物定性离子对、定量离子对、锥孔电压和碰撞能量的参考值见表２.表２　赛杜霉素定性离子对、定量离子对、锥孔电压和碰撞能量的参考值药物定性离子对m/z定量离子对m/z锥孔电压V碰撞能量eV赛杜霉素８９５􀆰５＞８３３􀆰７８９５􀆰５＞８５１􀆰７８９５􀆰５＞８３３􀆰７５５３５３５８􀆰５　测定法取试料溶液和基质匹配标准溶液,作单点或多点校准,外标法计算.基质匹配标准溶液及试料溶液中赛杜霉素的特征离子质量色谱峰面积均应在仪器检测的线性范围之内.试样溶液中的相对离子丰度与基质匹配标准溶液中的相对离子丰度相比,符合表３的要求.标准溶液特征离子质量色谱图见附录A.表３　定性测定时相对离子丰度的最大允许偏差单位为百分号相对离子丰度＞５０＞２０~５０＞１０~２０≤１０允许的相对偏差±２０±２５±３０±５０８􀆰６　空白试验取空白试料,除不加药物外,采用完全相同的步骤进行平行操作.９　结果计算和表述试样中赛杜霉素的残留量按公式(１)计算.３GB３１６５８􀆰２４—２０２２X＝CS×A×VAS×m(１)􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺式中:X———试样中赛杜霉素残留量的数值,单位为微克每千克(μg/kg);CS———标准溶液中赛杜霉素浓度的数值,单位为微克每升(μg/L);A———试样溶液中赛杜霉素的峰面积;AS———标准溶液中赛杜霉素的峰面积;V———试样溶液浓缩后定容体积的数值,单位为毫升(mL);m———试样质量的数值,单位为克(g).１０　检测方法灵敏度、准确度和精密度１０􀆰１　灵敏度本方法的检测限为３μg/kg,定量限为１０μg/kg.１０􀆰２　准确度　本方法在１０μg/kg~４００μg/kg添加浓度水平上的回收率为７０％~１２０％.１０􀆰３　精密度本方法批内相对标准偏差≤２０％,批间相对标准偏差≤２０％.４GB３１６５８􀆰２４—２０２２附　录　A(资料性)赛杜霉素的英文名称、CAS号赛杜霉素的英文名称、分子式、CAS号见表A􀆰１表A􀆰１　赛杜霉素的英文名称、分子式、CAS号化合物英文名称分子式CAS号赛杜霉素semduramicinC４５H７５O１６１１３３７８Ｇ３１Ｇ７５GB３１６５８􀆰２４—２０２２附　录　B(资料性)赛杜霉素标准溶液特征离子质量色谱图赛杜霉素标准溶液特征离子质量色谱图见图B􀆰１.图B􀆰１　赛杜霉素标准溶液特征离子质量色谱图(１０μg/L)６