GB 31659.6-2022 食品安全国家标准 牛奶中氯前列醇残留量的测定 液相色谱-串联质谱法

中华人民共和国国家卫生健康委员会食品安全国家标准牛奶中氯前列醇残留量的测定液相色谱-串联质谱法16中华人民共和国国家标准备案号：XXXX-XXXXＩＣＳ67.100X31659.6—2022Nationalfoodsafetystandard—Determinationofcloprostenolresiduesinmilk—Liquidchromatography-tandemmassspectrometricmethodGB20220920发布－－20230201－－实施发布国家市场监督管理总局中华人民共和国农业农村部CCSGB３１６５９􀆰６—２０２２前　　言本文件按照GB/T１􀆰１—２０２０«标准化工作导则　第１部分:标准化文件的结构和起草规则»的规定起草.本文件系首次发布.ⅠGB３１６５９􀆰６—２０２２食品安全国家标准牛奶中氯前列醇残留量的测定　液相色谱Ｇ串联质谱法１　范围本文件规定了牛奶中氯前列醇残留量检测的制样和液相色谱Ｇ串联质谱测定方法.本文件适用于牛奶中氯前列醇残留量的检测.２　规范性引用文件下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款.其中,注日期的引用文件,仅该日期对应的版本适用于本文件;不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件.GB/T６６８２　分析实验室用水规格和试验方法３　术语和定义本文件没有需要界定的术语和定义.４　原理试样中残留的氯前列醇,用乙腈提取,混合阴离子交换固相萃取柱净化,液相色谱Ｇ串联质谱负离子模式测定,外标法定量.５　试剂和材料以下所用的试剂,除特别注明外均为分析纯试剂;水为符合GB/T６６８２规定的一级水.５􀆰１　试剂５􀆰１􀆰１　乙腈(CH３CN):色谱纯.５􀆰１􀆰２　氨水(NH３􀅰H２O).５􀆰１􀆰３　甲酸(CH２O２).５􀆰１􀆰４　无水硫酸钠(Na２SO４).５􀆰１􀆰５　乙酸铵(CH３COONH４):色谱纯.５􀆰２　标准品５􀆰２􀆰１　氯前列醇(Cloprostenol,C２２H２９ClO６,CAS号:４０６６５Ｇ９２Ｇ７),含量≥９８％.５􀆰３　溶液配制５􀆰３􀆰１　０􀆰１％甲酸溶液:取甲酸１mL,用水稀释至１０００mL,混匀.５􀆰３􀆰２　５％氨水溶液:取氨水５０mL,用水稀释至１０００mL,混匀.５􀆰３􀆰３　２％甲酸乙腈溶液:取甲酸２０mL,用乙腈稀释至１０００mL,混匀.５􀆰３􀆰４　０􀆰１mol/L乙酸铵溶液:称取乙酸铵７􀆰７０g,用水溶解并稀释至１０００mL,混匀.５􀆰３􀆰５　５mmol/L乙酸铵溶液:取０􀆰１mol/L乙酸铵溶液５０mL,用水稀释至１０００mL,混匀.５􀆰３􀆰６　乙腈乙酸铵溶液:取乙腈３０mL,加５mmol/L乙酸铵溶液至１００mL,混匀.５􀆰４　标准溶液制备５􀆰４􀆰１　标准储备液:取氯前列醇钠对照品约１０mg,精密称定,加乙腈适量使溶解并稀释定容至１０mL容量瓶,配制成浓度为１mg/mL的氯前列醇标准储备液.－１８℃以下保存,有效期３个月.１GB３１６５９􀆰６—２０２２５􀆰４􀆰２　标准中间液:准确量取标准储备液０􀆰１mL,于１０mL容量瓶,用乙腈稀释至刻度,配制成浓度为１０μg/mL的标准中间液.２℃~８℃保存,有效期１个月.５􀆰４􀆰３　系列标准工作液:准确量取标准中间液适量,用乙酸铵乙腈稀释配制成浓度为５ng/mL、１０ng/mL、２０ng/mL、５０ng/mL、１００ng/mL、５００ng/mL的系列标准工作溶液.现用现配.５􀆰５　材料５􀆰５􀆰１　混合阴离子交换固相萃取柱:６０mg/３mL或其性能相当者.５􀆰５􀆰２　滤膜:０􀆰２２μm,有机相.５􀆰５􀆰３　离心管:１０mL,５０mL.６　仪器和设备６􀆰１　高效液相色谱Ｇ串联质谱仪:配有电喷雾离子源(ESI).６􀆰２　分析天平:感量０􀆰０１g和０􀆰００００１g.６􀆰３　涡旋混合器.６􀆰４　超声仪.６􀆰５　冷冻离心机.６􀆰６　氮吹仪.６􀆰７　固相萃取装置.７　试样的制备与保存７􀆰１　试样的制备取适量新鲜或解冻的空白或供试试样,并均质.a)　取均质的供试样品,作为供试试样;b)　取均质的空白样品,作为空白试样;c)　取均质的空白样品,添加适宜浓度的标准工作液,作为空白添加试样.７􀆰２　试样的保存－１８℃以下储存.８　测定步骤８􀆰１　提取取试料２g(准确至±０􀆰０５g)于５０mL离心管中,加乙腈５mL,无水硫酸钠２g,涡旋混匀,超声提取１０min,于４℃１００００r/min离心１０min,取上清液于１０mL离心管中,重复提取１次,合并２次上清液.４０℃氮气吹干,残余物用１mL乙腈溶解,加０􀆰１％甲酸水溶液３mL,涡旋混匀,备用.８􀆰２　净化取混合阴离子交换固相萃取柱,用乙腈３mL活化,水３mL平衡.取备用液过柱,用５％氨水溶液３mL淋洗,抽干.用２％甲酸乙腈溶液３mL洗脱,收集洗脱液,４０℃氮气吹干,残余物用１mL乙腈乙酸铵溶液溶解,用微孔滤膜过滤,供液相色谱Ｇ串联质谱测定.８􀆰３　基质匹配标准曲线的制备准确量取氯前列醇的标准工作液各１mL,分别溶解经提取、净化及吹干后的空白试料残余物,滤膜过滤,配制成氯前列醇浓度为５ng/mL、１０ng/mL、２０ng/mL、５０ng/mL、１００ng/mL、５００ng/mL的系列基质匹配标准溶液,供液相色谱Ｇ串联质谱测定,以特征离子质量色谱峰面积为纵坐标、对应的标准溶液浓度为横坐标,绘制标准曲线.求回归方程和相关系数.２GB３１６５９􀆰６—２０２２８􀆰４　测定８􀆰４􀆰１　色谱条件参考条件a)　色谱柱:C１８柱长１５０mm,内径２􀆰１mm,粒径５μm,或性能相当者;b)　流动相:A为５mmol/L乙酸铵溶液;B为乙腈;c)　流速:０􀆰３mL/min;d)　进样量:５μL;e)　柱温:３０℃;f)　流动相梯度及洗脱程序见表１.表１　梯度洗脱程序时间,minA,％B,％０􀆰００９０１００􀆰５０９０１０３􀆰００１０９０６􀆰００１０９０６􀆰０１９０１０１１􀆰００９０１０８􀆰４􀆰２　质谱参考条件a)　离子源:电喷雾离子源,负离子模式;b)　检测方式:多反应监测(MRM);c)　鞘气压力(GS１):３４４􀆰７５kPa(５０psi);d)　辅助气压力(GS２):３４４􀆰７５kPa(５０psi);e)　碰撞气压力(collisiongas):３４􀆰４７５kPa(５psi);f)　卷帘气压力(curtaingas):２０６􀆰８５kPa(３０psi);g)　负离子模式电喷雾电压(IS):－４５００V;h)　雾化温度:５００℃;i)　鞘气、辅助气、碰撞气均为高纯氮气.喷雾电压、碰撞能等参数应优化至最优灵敏度;j)　监测离子参数情况见表２.表２　氯前列醇特征离子参考质谱条件化合物定性离子对m/z定量离子对m/z锥孔电压V碰撞能eV氯前列醇４２３􀆰１＞１２６􀆰８４２３􀆰１＞１８９􀆰３４２３􀆰１＞１２６􀆰８－１２０－４０－３４８􀆰４􀆰３　测定法取试料溶液和基质匹配标准溶液,按８􀆰４􀆰１和８􀆰４􀆰２设定仪器条件操作,作单点或多点校准,外标法计算.基质匹配标准溶液及试料溶液中目标药物的特征离子质量色谱峰峰面积均应在仪器检测的线性范围之内.试料溶液中待测物质的保留时间与基质匹配标准工作液中待测物质的保留时间之比,偏差在±２􀆰５％以内,且试料溶液中的离子相对丰度与基质匹配标准溶液中的离子相对丰度相比,符合表３的要求,则可判定为样品中存在对应的待测物质.相关谱图见附录A.表３　定性确证时相对离子丰度的最大允许偏差单位为百分号相对离子丰度允许的相对偏差＞５０±２０＞２０~５０±２５３GB３１６５９􀆰６—２０２２表３(续)相对离子丰度允许的相对偏差＞１０~２０±３０≤１０±５０８􀆰５　空白试验取空白试料,除不加药物外,采用完全相同的测定步骤进行平行操作.９　结果计算与表述试样中氯前列醇的残留量按标准曲线或公式(１)计算.X＝A×CS×VAS×m(１)􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺式中:X———试样中氯前列醇残留量的数值,单位为微克每毫升(μg/kg);A———试样溶液中氯前列醇的峰面积;AS———基质匹配标准溶液中氯前列醇的峰面积;CS———基质匹配标准溶液中氯前列醇浓度的数值,单位为纳克每毫升(μg/L);V———试样溶液最终定容体积的数值,单位为毫升(mL);m———供试试样质量的数值,单位为克(g).１０　检测方法的灵敏度、准确度、精密度１０􀆰１　灵敏度本方法检测限为１􀆰５μg/kg,定量限为５μg/kg.１０􀆰２　准确度本方法在５μg/kg~５００μg/kg添加浓度的水平上其回收率为８０％~１２０％.１０􀆰３　精密度本方法的批内相对标准偏差≤１５％,批间相对标准偏差≤１５％.４GB３１６５９􀆰６—２０２２附　录　A(资料性)氯前列醇标准溶液特征离子质量色谱图氯前列醇标准溶液特征离子质量色谱图见图A􀆰１.图A􀆰１　氯前列醇标准溶液特征离子质量色谱图(１０ng/mL)５