GB 31659.5-2022 食品安全国家标准 牛奶中利福昔明残留量的测定 液相色谱-串联质谱法

中华人民共和国国家卫生健康委员会食品安全国家标准牛奶中利福昔明残留量的测定液相色谱-串联质谱法16中华人民共和国国家标准备案号：XXXX-XXXXＩＣＳ67.100X31659.5—2022Nationalfoodsafetystandard—Determinationofrifaximinresidueinmilkbyliquidchromatography-tandemmassspectrometricmethodGB20220920发布－－20230201－－实施发布国家市场监督管理总局中华人民共和国农业农村部CCSGB３１６５９􀆰５—２０２２前　　言本文件按照GB/T１􀆰１—２０２０«标准化工作导则　第１部分:标准化文件的结构和起草规则»的规定起草.本文件系首次发布.ⅠGB３１６５９􀆰５—２０２２食品安全国家标准牛奶中利福昔明残留量的测定　液相色谱Ｇ串联质谱法１　范围本文件规定了牛奶中利福昔明残留检测的制样和液相色谱Ｇ串联质谱测定方法.本文件适用于牛奶中利福昔明残留量的测定.２　规范性引用文件下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款.其中,注日期的引用文件,仅该日期对应的版本适用于本文件;不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件.GB/T６６８２　分析实验室用水规格和试验方法３　术语和定义本文件没有需要界定的术语和定义.４　原理试料中残留的利福昔明经乙腈提取后,用固相萃取柱净化,液相色谱Ｇ串联质谱法测定,基质匹配标准溶液外标法定量.５　试剂和材料５􀆰１　试剂除另有规定外,所有试剂均为分析纯,水为符合GB/T６６８２规定的一级水.５􀆰１􀆰１　乙腈(CH３CN):色谱纯.５􀆰１􀆰２　甲酸(CH２O２):色谱纯.５􀆰１􀆰３　无水硫酸钠(Na２SO４).５􀆰２　溶液配制５􀆰２􀆰１　２０％乙腈溶液:取２０mL乙腈,用水稀释至１００mL.５􀆰２􀆰２　０􀆰１％甲酸乙腈溶液:取１mL甲酸,用乙腈稀释至１０００mL.５􀆰２􀆰３　０􀆰１％甲酸溶液:取１mL甲酸,用水稀释至１０００mL.５􀆰３　标准品利福昔明(Rifaximin,C４３H５１N３O１１,CAS号:８０６２１Ｇ８１Ｇ４),含量≥９４􀆰０％.５􀆰４　标准溶液的制备５􀆰４􀆰１　标准储备液:取利福昔明标准品约１０mg,精密称定,于１０mL容量瓶中,用乙腈溶解并稀释至刻度,配制成浓度为１􀆰０mg/mL的利福昔明标准储备液.－１８℃以下保存,有效期６个月.５􀆰４􀆰２　标准中间液:精密量取利福昔明标准储备液０􀆰１mL,于１０mL容量瓶中,用乙腈稀释至刻度,配制浓度为１０μg/mL的标准中间液液.２℃~８℃保存,有效期３个月.５􀆰４􀆰３　标准工作液:精密量取利福昔明标准中间液０􀆰１mL,于１０mL容量瓶中,用２０％乙腈溶液稀释至刻度,配制浓度为１００ng/mL的标准工作液.２℃~８℃保存,有效期３个月.５􀆰５　材料５􀆰５􀆰１　亲水亲脂固相萃取柱:５００mg/６mL,或相当者.１GB３１６５９􀆰５—２０２２５􀆰５􀆰２　亲水型微孔滤膜:０􀆰２２μm.６　仪器和设备６􀆰１　液相色谱Ｇ串联质谱仪:配有电喷雾离子源(ESI).６􀆰２　分析天平:感量０􀆰００００１g.６􀆰３　天平:感量０􀆰０１g.６􀆰４　涡旋混合器.６􀆰５　高速离心机.６􀆰６　氮吹仪.６􀆰７　水平振荡器.７　试样的制备与保存７􀆰１　试样的制备取适量新鲜或解冻的空白或供试样品,混匀.a)　取混匀后的供试样品,作为供试试样;b)　取混匀后的空白样品,作为空白试样;c)　取混匀后的空白样品,添加适宜浓度的标准工作液,作为空白添加试样.７􀆰２　试样的保存－１８℃以下保存.８　测定步骤８􀆰１　提取称取试料２g(准确至±０􀆰０５g),置于５０mL离心管内,加入８mL乙腈,再加无水硫酸钠２g,涡旋后,２００转/min水平振荡１０min.６０００r/min离心８min,取上清液,备用.８􀆰２　净化与浓缩亲水亲脂固相萃取柱用５mL乙腈活化后,取备用液过柱,并接于１５mL玻璃管内,再用３mL乙腈一并洗脱于同一玻璃管内,挤干,于５０℃氮气吹干.残余物用２０％乙腈溶液１􀆰０mL溶解后,过０􀆰２２μm微孔滤膜后上机测定.８􀆰３　基质匹配标准曲线的制备在空白试料经提取、净化、氮气吹干后的残余物中,依次加入用２０％乙腈溶液配制的浓度为１０ng/mL、２０ng/mL、５０ng/mL、１００ng/mL、２００ng/mL系列标准溶液各１􀆰０mL,充分溶解,得到基质匹配标准溶液,过滤膜后上机测定.以特征离子质量色谱峰面积为纵坐标、基质匹配标准溶液浓度为横坐标,绘制标准曲线.８􀆰４　测定８􀆰４􀆰１　液相色谱参考条件a)　色谱柱:C１８(５０mm×２􀆰１mm,１􀆰７μm),或性能相当者.b)　流动相:A为０􀆰１％甲酸乙腈溶液,B为０􀆰１％甲酸溶液.梯度洗脱程序:０min~３min,３０％A线性变化至８０％A;３min~４􀆰５min保持３０％A.c)　流速:０􀆰３mL/min.d)　进样量:１０μL.e)　柱温:３０℃.８􀆰４􀆰２　串联质谱参考条件a)　离子源:电喷雾离子源;２GB３１６５９􀆰５—２０２２b)　扫描方式:正离子扫描;c)　检测方式:多反应离子监测(MRM);d)　电离电压:３􀆰０kV;e)　源温:１１０℃;f)　雾化温度:３５０℃;g)　锥孔气流速:５０L/h;h)　雾化气流速:６５０L/h.利福昔明定性、定量离子对和对应的锥孔电压、碰撞能量参考值见表１.表１　利福昔明定性、定量离子对和对应的锥孔电压、碰撞能量药物定性离子对m/z定量离子对m/z锥孔电压V碰撞能量eV利福昔明７８６􀆰６＞７５４􀆰７７８６􀆰６＞１５０􀆰８７８６􀆰６＞７５４􀆰７３０３０５０８􀆰４􀆰３　测定法试样溶液的保留时间在基质匹配标准溶液保留时间的±２􀆰５％之内.试样溶液中的离子相对丰度与基质匹配标准溶液中的离子相对丰度相比,符合表２的要求.表２　试样溶液中离子相对丰度的允许偏差范围单位为百分号相对丰度允许偏差＞５０±２０２０~５０±２５１０~２０±３０≤１０±５０取基质匹配标准溶液和试样溶液,作单点或多点校准,按外标法,以峰面积计算.基质匹配标准溶液及试样溶液中利福昔明的峰面积应在仪器检测的线性范围之内,超出线性范围时应进行适当倍数稀释后再进行分析.基质匹配标准溶液中特征离子质量色谱图见附录A中图A.８􀆰５　空白试验取空白试料,除不加药物外,采用完全相同的测定步骤进行测定.９　结果计算和表述试样中利福昔明的残留量按标准曲线或公式(１)计算.X＝C×A×VAs×m×１０００１０００(１)􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺式中:X———试样中利福昔明残留量的数值,单位为微克每千克(μg/kg);C———基质匹配标准溶液中利福昔明浓度的数值,单位为纳克每毫升(ng/mL);A———试样溶液中利福昔明的峰面积;V———溶解残余物所用溶液体积的数值,单位为毫升(mL);As———基质匹配标准溶液中利福昔明的峰面积;m———试样质量的数值,单位为克(g).１０　检测方法的灵敏度、准确度和精密度１０􀆰１　灵敏度利福昔明在牛奶中的检测限为５μg/kg,定量限为１０μg/kg.３GB３１６５９􀆰５—２０２２１０􀆰２　准确度本方法对于牛奶样品在１０μg/kg~１２０μg/kg添加浓度上的回收率为７０％~１２０％.１０􀆰３　精密度本方法批内相对标准偏差≤１５％,批间相对标准偏差≤１５％.４GB３１６５９􀆰５—２０２２附　录　A(资料性)利福昔明特征离子质量色谱图空白牛奶基质匹配标准溶液中利福昔明特征离子质量色谱图见图A􀆰１.图A􀆰１　空白牛奶基质匹配标准溶液中利福昔明特征离子质量色谱图(２０ng/mL)５