GB 31656.16-2022 食品安全国家标准 水产品中氯霉素、甲砜霉素、氟苯尼考和氟苯尼考胺残

中华人民共和国国家卫生健康委员会食品安全国家标准水产品中氯霉素、甲砜霉素、氟苯尼考和氟苯尼考胺残留量的测定气相色谱法20中华人民共和国国家标准备案号：XXXX-XXXXＩＣＳ67.120.30X31656.16—2022Nationalfoodsafetystandard—Determinationofchloramphenicol,thiamphenicol,florfenicolandandflorfenicol-amineresiduesinaquaticproductsbygaschromatographyGB20220920发布－－20230201－－实施发布国家市场监督管理总局中华人民共和国农业农村部CCSGB３１６５６􀆰１６—２０２２前　　言本文件按照GB/T１􀆰１—２０２０«标准化工作导则　第１部分:标准化文件的结构和起草规则»的规定起草.本文件系首次发布.ⅠGB３１６５６􀆰１６—２０２２食品安全国家标准水产品中氯霉素、甲砜霉素、氟苯尼考和氟苯尼考胺残留量的测定气相色谱法１　范围本文件规定了水产品中氯霉素、甲砜霉素、氟苯尼考和氟苯尼考胺残留量测定的制样和气相色谱测定方法.本文件适用于鱼、虾、鳖、贝、海参等水产品可食组织中氯霉素、甲砜霉素、氟苯尼考及氟苯尼考胺残留量的测定.２　规范性引用文件下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款.其中,注日期的引用文件,仅该日期对应的版本适用于本文件;不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件.GB/T６６８２　分析实验室用水规格和试验方法GB/T３０８９１—２０１４　水产品抽样规范３　术语和定义本文件没有需要界定的术语和定义.４　原理试样中残留的氯霉素、甲砜霉素、氟苯尼考和氟苯尼考胺,在碱性条件下用乙酸乙酯提取,正己烷去脂,固相萃取柱净化,硅烷化试剂衍生化,气相色谱法检测,外标法定量.５　试剂与材料除另有规定外,所有试剂均为分析纯,水为符合GB/T６６８２规定的一级水.５􀆰１　试剂５􀆰１􀆰１　乙腈(CH３CN):色谱纯.５􀆰１􀆰２　甲醇(CH３OH):色谱纯.５􀆰１􀆰３　正己烷(C６H１４):色谱纯.５􀆰１􀆰４　乙酸(CH３COOH):色谱纯.５􀆰１􀆰５　乙酸乙酯(C４H８O２):色谱纯.５􀆰１􀆰６　甲苯(C７H８):色谱纯.５􀆰１􀆰７　浓氨水(NH３􀅰H２O).５􀆰１􀆰８　N,OＧ双(三甲基硅烷基)三氟乙酰胺(BSTFA):C８H１８F３NOSi２.５􀆰１􀆰９　三甲基氯硅烷(TMCS):C３H９ClSi.５􀆰２　溶液配制５􀆰２􀆰１　乙酸乙酯Ｇ氨水:取浓氨水２mL,用乙酸乙酯稀释至１００mL.现用现配.５􀆰２􀆰２　甲醇Ｇ氨水:取浓氨水２mL,用甲醇稀释至１００mL.现用现配.５􀆰２􀆰３　５％乙酸溶液:取乙酸５mL,用水稀释至１００mL.１GB３１６５６􀆰１６—２０２２５􀆰２􀆰４　衍生化试剂:取N,OＧ双(三甲基硅烷基)三氟乙酰胺(BSTFA)与三甲基氯硅烷(TMCS),按体积比９９∶１混合.现用现配.５􀆰３　标准品氯霉素、甲砜霉素、氟苯尼考、氟苯尼考胺,含量均≥９８％.具体见附录A.５􀆰４　标准溶液制备５􀆰４􀆰１　标准储备液:取氯霉素、甲砜霉素、氟苯尼考、氟苯尼考胺标准品各１５mg,精密称定,分别加乙腈适量使溶解并稀释定容至１００mL棕色容量瓶,配制成浓度均为１５０μg/mL的标准储备液.－１８℃以下保存,有效期３个月.５􀆰４􀆰２　混合标准工作液:分别准确量取氯霉素标准储备液１mL,甲砜霉素、氟苯尼考和氟苯尼考胺各１０mL于５０mL容量瓶,用乙腈稀释至刻度,制成氯霉素浓度为３μg/mL,甲砜霉素、氟苯尼考和氟苯尼考胺浓度均为３０μg/mL的混合标准工作液.－１８℃以下保存,有效期１个月.５􀆰５　材料５􀆰５􀆰１　MCX固相萃取柱:６０mg/３mL,或相当者.５􀆰５􀆰２　移液器:２０μL~２００μL,２００μL~１０００μL.５􀆰５􀆰３　鸡心瓶:１００mL.５􀆰５􀆰４　聚乙烯离心管:１５mL、５０mL,具塞.５􀆰５􀆰５　玻璃离心管:１０mL,具塞.５􀆰５􀆰６　棕色反应瓶:规格２mL.６　仪器和设备６􀆰１　气相色谱仪,配６３Ni电子捕获检测器.６􀆰２　均质机.６􀆰３　旋转蒸发仪.６􀆰４　离心机.６􀆰５　涡旋混合器.６􀆰６　分析天平:感量０􀆰００００１g和０􀆰０１g.６􀆰７　氮吹仪.６􀆰８　超声波清洗器.６􀆰９　固相萃取装置.７　试样的制备与保存７􀆰１　试样的制备按GB/T３０８９１—２０１４附录B的要求制样.a)　取均质后的供试样品,作为供试试样;b)　取均质后的空白样品,作为空白试样;c)　取均质后的空白样品,添加适宜浓度的标准工作液,作为空白添加试样.７􀆰２　试样的保存－１８℃以下保存.８　测定步骤８􀆰１　提取取试料５g(准确至±０􀆰０５g),置５０mL具塞玻璃离心管中,加乙酸乙酯Ｇ氨水２０mL,立即涡旋２GB３１６５６􀆰１６—２０２２１min,超声１５min,４０００r/min离心５min,取上清液于１００mL鸡心瓶中,重复提取１次,合并上清液,加入５％乙酸溶液３mL,振荡混匀,４０℃旋转蒸发至约１􀆰５mL,备用.８􀆰２　净化取备用液于１０mL离心管,用５％乙酸１􀆰５mL洗涤鸡心瓶,洗液并于离心管.加正己烷５mL,涡旋混合１min,４０００r/min离心５min,取水层,用正己烷５mL重复脱脂１次,取水层,备用.取MCX固相萃取柱,依次用甲醇３mL、水３mL活化,取经正己烷脱脂后的备用液,过柱,用５％乙酸溶液２mL淋洗,弃去淋洗液,用甲醇Ｇ氨水６mL洗脱,收集洗脱液,６５℃氮气吹至近干,再依次用甲醇１mL、乙酸乙酯１mL洗涤离心管壁,氮气吹至近干,备用.８􀆰３　衍生８􀆰３􀆰１　试料的衍生化取吹干的提取物,加乙腈１００μL复溶,移至２mL棕色反应瓶中,再用１００μL清洗并合并至棕色反应瓶中,加衍生化试剂１００μL,盖塞并涡旋混合１０s,６０℃烘箱中反应３０min.冷却至室温,５０℃~５５℃氮气吹干,准确加入甲苯１􀆰０mL,涡旋混匀,供气相色谱仪测定.８􀆰３􀆰２　标准工作液的衍生化取氯霉素、甲砜霉素、氟苯尼考和氟苯尼考胺混合标准工作液适量于２mL棕色反应瓶中,置５０℃氮吹仪吹干.以下按８􀆰３􀆰１的步骤操作.８􀆰４　标准曲线的制备分别精密量取氯霉素、甲砜霉素、氟苯尼考、氟苯尼考胺标准工作液适量,用乙腈稀释氯霉素浓度为１􀆰０μg/L、１􀆰５μg/L、５􀆰０μg/L、１５􀆰０μg/L、５０􀆰０μg/L、１５０􀆰０μg/L,甲砜霉素、氟苯尼考、氟苯尼考胺浓度均为１０􀆰０μg/L、１５􀆰０μg/L、５０􀆰０μg/L、１５０􀆰０μg/L、５００􀆰０μg/L、１５００􀆰０μg/L的系列标准溶液,经衍生化后,供气相色谱测定.以测得峰面积为纵坐标、对应的标准溶液浓度为横坐标,绘制标准曲线.求回归方程和相关系数.８􀆰５　测定８􀆰５􀆰１　色谱条件a)　色谱柱:DBＧ５MS石英毛细管柱(３０m×０􀆰２５mm,膜厚０􀆰２５μm),或相当者;b)　进样方式:不分流进样;c)　载气:氮气,纯度９９􀆰９９９％;d)　柱流速:１􀆰０mL/min,尾吹为２５mL/min;e)　进样口温度２３０℃,检测器温度３１０℃;f)　柱温程序:起始８０℃保持１min,以３０℃/min升温至２８０℃,保持５min;g)　进样量:１􀆰０μL.８􀆰５􀆰２　测定法取试料溶液和相应的标准溶液,作单点或多点校准,按外标法,以峰面积计算.标准溶液及试料溶液中氯霉素、甲砜霉素、氟苯尼考和氟苯尼考胺响应值应在仪器检测的线性范围之内.在上述色谱条件下,标准溶液气相色谱图见附录B.８􀆰５􀆰３　空白试验取空白试样,除不加药物外,采用完全相同的测定步骤进行平行操作.９　结果计算和表述试样中待测物的残留量,按标准曲线或公式(１)计算.X＝Cs×A×VAs×m(１)􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺式中:X———试样中待测物残留量的数值,单位为微克每千克(μg/kg);３GB３１６５６􀆰１６—２０２２Cs———标准溶液中待测物浓度的数值,单位为微克每升(μg/L);A———试样溶液中待测物色谱峰面积;As———标准溶液中待测物色谱峰面积;V———试样溶液最终定容体积的数值,单位为毫升(mL);m———供试试样质量的数值,单位为克(g).１０　方法灵敏度、准确度和精密度１０􀆰１　灵敏度本方法氯霉素的检测限为０􀆰１μg/kg,甲砜霉素、氟苯尼考和氟苯尼考胺的检测限均为１􀆰０μg/kg.氯霉素的定量限为０􀆰３μg/kg,甲砜霉素、氟苯尼考和氟苯尼考胺的定量限均为３􀆰０μg/kg.１０􀆰２　准确度本方法氯霉素在０􀆰３μg/kg~３０􀆰０μg/kg添加水平上的回收率７０％~１２０％;甲砜霉素、氟苯尼考和氟苯尼考胺在３􀆰０μg/kg~３００μg/kg添加水平上的回收率均为７０％~１２０％.１０􀆰３　精密度本方法批内相对标准偏差≤２０％,批间相对标准偏差≤２０％.４GB３１６５６􀆰１６—２０２２附　录　A(资料性)氯霉素、甲砜霉素、氟苯尼考及氟苯尼考胺的英文名称、分子式和CAS号氯霉素、甲砜霉素、氟苯尼考及氟苯尼考胺英文名称、分子式和CAS号见表A􀆰１.表A􀆰１　氯霉素、甲砜霉素、氟苯尼考及氟苯尼考胺英文名称、分子式和CAS号化合物英文名分子式CAS号氯霉素ChloramphenicolC１１H１２Cl２N２O５５６Ｇ７５Ｇ７甲砜霉素ThiamphenicolC１１H１５Cl２NO５S１５３１８Ｇ４５Ｇ３氟苯尼考FlorfenicolC１２H１４Cl２FNO４S７３２３１Ｇ３４Ｇ２氟苯尼考胺FlorfenicolamineC１０H１４FNO３S７６６３９Ｇ９３Ｇ５５GB３１６５６􀆰１６—２０２２附　录　B(资料性)氯霉素类药物标准溶液色谱图氯霉素类药物标准溶液色谱图见图B􀆰１.注:出峰顺序从左到右依次为５０􀆰０μg/L氟苯尼考胺、５􀆰０μg/L氯霉素、５０􀆰０μg/L氟苯尼考、５０􀆰０μg/L甲砜霉素.图B􀆰１　氯霉素类药物标准溶液色谱图６