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中华人民共和国出入境检验检疫行业标准SN/T0693—20192019-12-27发布2020-07-01实施中华人民共和国海关总署发布ICS67.050CCSX04出口植物源性食品中烯虫酯残留量的测定Determinationofmethopreneresiduesinplantfoodforexport出口植物源性食品中烯虫酯残留量的测定.indd12020/1/1620:13:20出口植物源性食品中烯虫酯残留量的测定.indd22020/1/1620:13:20ISN/T0693—2019前言本标准按照GB/T1.1—2009给出的规则起草。本标准代替SN0693—1997《出口粮谷中烯虫酯残留量检验方法》本标准与SN0693—1997相比，主要技术性变化如下：——标准名称由《出口粮谷中烯虫酯残留量检验方法》修改为《出口植物源性食品中烯虫酯残留量测定》；——删减了抽样部分；——增加了气相色谱-质谱法，作为第一法。该法与SN0693-1997相比扩大标准检测的适用范围，改进了样品前处理技术，降低了定量限。——原SN0693—1997作为本标准的第二法，即液相色谱-紫外检测器法。——降低了定量限，并针对不同检测对象，给出了不同基质中烯虫酯多个添加水平的回收率范围。请注意本文件的某些内容可能涉及专利，本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任。本标准由中华人民共和国海关总署提出并归口。本标准起草单位：中国检验检疫科学研究院。本标准主要起草人：吴玉平、李淑娟、张洋、李晓娟。本标准所代替标准的历次版本发布情况为：——SN0693—1997。出口植物源性食品中烯虫酯残留量的测定.indd12020/1/1620:13:20出口植物源性食品中烯虫酯残留量的测定.indd22020/1/1620:13:201SN/T0693—2019出口植物源性食品中烯虫酯残留量的测定1范围本标准第一法规定了出口植物源性食品中烯虫酯残留量的气相色谱-质谱测定方法。第二法规定了粮谷中烯虫酯的残留量的液相色谱测定方法本标准第一法适用于大米、小麦、玉米、橙子、葡萄、番茄、马铃薯、菠菜、蘑菇、花生和茶叶中烯虫酯残留量的测定和确证。第二法适用于糙米中烯虫酯残留量的测定。2 规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB/T6682分析实验室用水规格和实验方法第一法气相色谱-质谱法3 原理试样加乙腈振荡提取，经固相萃取法对提取液进行净化，采用气相色谱-质谱法检测，保留时间和选择离子定性，外标法定量。4 试剂和材料除非另有说明，所有试剂均为分析纯，水为GB/T6682规定的一级水。4.1 乙腈。4.2 甲苯：色谱纯。4.3 正己烷：色谱纯。4.4 丙酮：色谱纯。4.5 氯化钠。4.6 无水硫酸钠：650℃灼烧4h，贮于干燥器中，冷却后备用。4.7 丙酮-正己烷溶液（3+7，v/v）：量取60mL丙酮和140mL正己烷，混匀。4.8 乙腈-甲苯溶液（3+1，v/v）：量取60mL乙腈和20mL甲苯，混匀。4.9 烯虫酯标准物质（methoprene）：C19H34O3，CASNO.40596-69-8，纯度大于等于99%。4.10 烯虫酯标准储备液：准确称取10mg（精确至0.1mg）烯虫酯标准品于10mL容量瓶中，用丙酮溶解并定容至刻度，配制成浓度为1mg/mL的标准储备液，于0℃~4℃冰箱内避光保存。4.11 烯虫酯标准中间液：准确吸取适当体积的烯虫酯标准储备液，用丙酮配制成浓度为10.0mg/L的标准中间液，于0℃~4℃冰箱内避光保存。4.12 烯虫酯标准工作液：将烯虫酯标准中间液用正己烷配制成标准工作液，该工作液需现用现配。4.13 中性氧化铝固相萃取柱：1000mg，6mL，或相当者。出口植物源性食品中烯虫酯残留量的测定.indd12020/1/1620:13:202SN/T0693—20194.14 石墨化碳固相萃取柱：250mg，6mL，或相当者。4.15 TPT固相萃取柱1）：2000mg，12mL，或相当者。a5 仪器设备5.1 气相色谱-质谱仪：配有电子轰击源（EI）。5.2 电子天平：感量0.01mg和0.01g。5.3 漩涡混合器。5.4 振荡器。5.5 离心机：最高转速不低于5000r/min。5.6 旋转蒸发仪。5.7 氮吹浓缩仪。5.8 低速离心管：50mL，带盖。5.9 鸡心瓶。6 试样制备与保存6.1 试样制备粮谷、坚果类及茶叶样品：取代表性样品约500g，用粉碎机全部粉碎并通过20目筛；水果、蔬菜及蘑菇类样品：取代表性样品约500g，用匀浆机或组织捣碎机均质。样品制备后分别装入洁净的盛样瓶内，密封并标明标记。6.2 试样保存粮谷、坚果及茶叶类试样于0℃~4℃保存，蔬果、蘑菇类试样于-18℃以下冷冻保存。在抽样及制样的过程中，应防止样品受到污染或发生残留物含量的变化。7 测定步骤7.1 提取7.1.1蔬果、蘑菇类：称取5g试样（精确至0.01g）于50mL离心管中，加入20mL乙腈（4.1）和5g氯化钠（4.5），振荡提取30min，将样品管于5000r/min条件下离心5min。吸取上清液经无水硫酸钠（4.6）过滤后收集于鸡心瓶中，向残渣中再加20mL乙腈（4.1）重复上述提取步骤，合并上清液。将提取液置于40℃水浴条件下旋转蒸发浓缩至近干，再用2mL正己烷（4.3）溶解残渣，待净化。7.1.2粮谷、坚果类：称取5g试样（精确至0.01g）于50mL离心管中，加入10mL水浸泡30min，加入20mL乙腈（4.1）和5g氯化钠（4.5），振荡提取30min，将样品管于5000r/min条件下离心5min。吸取上清液经无水硫酸钠（4.6）过滤后收集于鸡心瓶中，向残渣中再加20mL乙腈（4.1）重复上述步骤，合并上清液。将提取液置于40℃水浴条件下旋转蒸发浓缩至近干，再用2mL正己烷（4.3）溶解残渣，待净化。7.1.3茶叶：称取2g试样（精确至0.01g）于50mL离心管中，加入5mL水浸润30min，加入1）TPT固相萃取柱是Agela公司产品的商品名称，给出这一信息是为了方面本标准的使用者，并不是表示对该产品的认可。如果其他等效产品具有相同的效果，则可使用这些等效产品。出口植物源性食品中烯虫酯残留量的测定.indd22020/1/1620:13:203SN/T0693—201920mL乙腈（4.1）和5g氯化钠（4.5），振荡提取30min，将样品管于5000r/min条件下离心5min。吸取上清液经无水硫酸钠（4.6）过滤后收集于鸡心瓶中，向残渣中再加20mL乙腈（4.1）重复上述步骤，合并上清液。将提取液置于40℃水浴条件下旋转蒸发浓缩至近干，再用2mL正己烷（4.3）溶解残渣，待净化。7.2 净化7.2.1蔬果类和粮谷类：将石墨化碳柱（4.14）串接在中性氧化铝柱（4.13）上端，依次用5mL丙酮-正己烷溶液（4.7）和5mL正己烷（4.3）以1mL/min的流速活化。将待净化液转移至串联固相萃取柱中上样，弃去流出液；再用2.5mL丙酮-正己烷溶液（4.7）洗涤鸡心瓶，并将洗涤液转移至固相萃取柱中，收集洗脱液，重复上述洗脱操作三次，注意在洗脱过程中应始终保持柱子不干涸。收集洗脱液于40℃水浴条件下旋转蒸发浓缩至近干，用正己烷（4.3）定容至1.0mL，供GC-MS测定。7.2.2茶叶：向TPT固相萃取柱（4.15）上加入无水硫酸钠（高度约为2cm），先用10mL乙腈-甲苯溶液（4.8）以1mL/min的流速活化。将待净化液转移至固相萃取柱中上样，再用2.5mL乙腈-甲苯溶液（4.8）洗涤鸡心瓶，并将洗涤液转移至固相萃取柱中，并开始收集洗脱液，重复上述洗涤洗脱操作三次，最后用5mL乙腈-甲苯溶液（4.8）洗脱。收集全部洗脱液于40℃水浴条件下旋转蒸发浓缩至近干，用正己烷（4.3）定容至1.0mL，供GC-MS测定。7.3 测定7.3.1气相色谱-质谱条件7.3.1.1色谱柱：HP-5ms，30.0m×0.25mm×0.25μm，或性能相当者。7.3.1.2柱箱升温程序：50℃保持1min，以10℃/min升温至280℃保持5min。7.3.1.3进样口温度：250℃。7.3.1.4GC-MS接口温度：280℃。7.3.1.5载气：氦气，纯度≥99.999%，恒流模式；流速：1.0mL/min。7.3.1.6进样方式：无分流进样。7.3.1.7进样量：2μL。7.3.1.8离子源温度：230℃；7.3.1.9四级杆温度：150℃；7.3.1.10测定方式：选择离子检测方式（SIM）；7.3.1.11监测离子（m/z）：153，191（定量离子），278。7.3.2定性测定按照7.3.1的条件测定标准溶液及样液，如果样液与标准溶液的质量色谱峰保留时间相差不超过±0.5%；在扣除背景后的质谱图中，所选择的监测离子全部出现，且定性离子的相对丰度（用相对于最强离子丰度的强度百分比表示）与浓度相当的标准工作溶液的相对丰度一致（m/z153：m/z191：m/z278=100：87：26），相对丰度允许偏差不超过表1规定的范围，则可判定样品中存在对应的被测物。表1定性确证时相对离子丰度最大容许误差相对离子丰度（基峰）%＞50＞20~50＞10~20≤10允许的相对偏差%±10±15±20±50出口植物源性食品中烯虫酯残留量的测定.indd32020/1/1620:13:204SN/T0693—20197.3.3定量确证在7.3.1~7.3.2仪器最佳工作状态下，对标准工作溶液进样，以待测物色谱峰峰面积为纵坐标，标准工作溶液浓度为横坐标绘制标准工作曲线，用标准工作曲线对样品中被测物色谱峰进行定量，样品溶液中被测物色谱峰的响应值应在仪器测定的线性范围内；如果超出线性范围，应进行适当稀释后进样测定。在上述色谱条件下，烯虫酯的保留时间约为19.0min，烯虫酯标准品的选择离子色谱图参见附录A中的图A.1。7.4 空白试验除不加试样外，均按7.1~7.3步骤进行。8 结果计算和表述气相色谱-质谱测定采用标准曲线法定量，按式（1）计算试样中烯虫酯的残留量：……………………………（1）式中：X——试样中烯虫酯残留量，单位为毫克每千克（mg/kg）；C——标准工作液中烯虫酯的浓度，单位为微克每毫升（μg/mL）；V——样液最终定容体积，单位为毫升（mL）；m——试样的质量，单位为为克（g）。9 定量限与回收率9.1 定量限气相色谱-质谱检测方法对大米、小麦、玉米、橙子、葡萄、番茄、马铃薯、菠菜、蘑菇和花生中烯虫酯的定量限为0.01mg/kg，茶叶中烯虫酯的定量限为0.025mg/kg。9.2 添加浓度和回收率回收率数据参见附录B。第二法液相色谱法10 原理用丙酮提取试样中烯虫酯残留，提取液经浓缩后，用正己烷溶液溶解，然后过活性炭+中性氧化铝柱净化，用丙酮-正己烷（3+7，v/v）洗脱，洗脱液经浓缩后用甲醇定容。溶液用配有紫外检测器的液相色谱仪测定，外标法定量。11 试剂和材料除非另有说明，所有试剂均为分析纯，水为GB/T6682规定的一级水。出口植物源性食品中烯虫酯残留量的测定.indd42020/1/1620:13:215SN/T0693—201911.1 丙酮。11.2 正己烷。11.3 无水硫酸钠：经丙酮洗涤后，烘干器中备用。11.4 活性炭：色层分析用，经丙酮洗涤后烘干备用。11.5 中性氧化铝：60目~100目，层析用。经659℃灼烧4h，放干燥器内保存。使用时加5%水降活。11.6 丙酮-正己烷溶液（3+7，v/v）：取300mL丙酮，用正己烷稀释至1000mL。11.7 甲醇：色谱纯。11.8 乙腈：色谱纯。11.9 烯虫酯标准物质（methoprene）：C19H34O3，CASNO.40596-69-8，纯度≥99%。。11.10 烯虫酯标准储备液：准确称取10mg（精确至0.1mg）烯虫酯标准品