SNT 5218-2019 出口食品中乙酰蓖麻酸酯含量的测定

中华人民共和国出入境检验检疫行业标准SN/T5218—2019DeterminationofMethylAcetylRicinoleateinfoodforexport2019-12-27发布2020-07-01实施中华人民共和国海关总署发布ICS67.050CCSX04出口食品中乙酰蓖麻酸酯的测定ISN/T5218—2019前言本标准根据GB/T1.1—2009《标准化工作导则第1部分：标准的结构和编写》的要求进行编制。本标准由中华人民共和国海关总署提出并归口。本标准起草单位：中华人民共和国拱北海关。本标准主要起草人：钱振杰、蔡德玲、陈敬、冯家望、蔡勤仁、赵乃漫。1SN/T5218—2019出口食品中乙酰蓖麻酸酯的测定1范围本标准规定了食品中乙酰蓖麻酸酯的测定方法，第一法为气相色谱法，第二法为气相色谱-质谱联用法。本标准第一法适用于胶基糖果（口香糖、泡泡糖）中乙酰蓖麻酸酯含量的测定，第二法适合于果汁、固体饮料（麦乳精）、饼干及食用油脂等食品中乙酰蓖麻酸酯含量的测定。第一法　气相色谱法2　方法提要胶基糖果类食品提取、净化后经气相色谱仪进行分离，采用氢火焰离子化检测器进行检测，以保留时间定性，外标法定量。3　试剂和材料除特殊注明外，所有试剂均为分析纯（储存于玻璃瓶中，避免接触塑料），水为去离子水。3.1　乙酸乙酯：色谱纯。3.2　无水硫酸钠（Na2SO4）：650℃灼烧4h，在干燥器中冷却至室温，储于密封瓶中备用。3.3　乙酰蓖麻酸甲酯（MethylO-Acetylricinoleate）：分子式C21H38O4，CASNo.：140-03-4，纯度大于等于99%。3.4　乙酰蓖麻酸甲酯标准储备液（1g/L）：准确称取0.1g（精确至0.1mg）乙酰蓖麻酸甲酯标准物质，转移至100mL容量瓶中，用乙酸乙酯稀释、定容，4℃冰箱中避光保存。3.5　乙酰蓖麻酸甲酯标准工作液：分别移取0.50mL、1.00mL、2.00mL、5.00mL、10.00mL和20.00mL标准储备液（3.4）于100mL容量瓶中，用乙酸乙酯稀释定容，即得浓度为5mg/L、10mg/L、20mg/L、50mg/L、100mg/L和200mg/L的标准系列溶液，临用前配制。4　仪器和设备4.1　气相色谱仪（GC），配氢火焰离子化检测器（FID）。4.2　分析天平：感量0.1mg、0.01g和0.001g。4.3　氮吹仪。4.4　振荡器。4.5　涡旋混合器。4.6　超声提取器。4.7　组织捣碎机。4.8　冷冻离心机：最高转速不低于4000r/min。2SN/T5218—20195　试样的制备与保存至少取同一批次3个最小完整包装样品（样品总量约100g），分批置于液氮中冷冻约5min，取出立即置于粉碎机中粉碎，迅速取出合并混匀，置于硬质全玻璃器皿中，于0℃~4℃密闭保存，待称样处理。6　测定步骤6.1　提取准确称取混合均匀试样约1g（精确到0.001g）于50mL具塞磨口玻璃试管中，加水10mL将样品分散，加入氯化钠至水相饱和，加入20mL乙酸乙酯，涡旋1min使样品分散，超声提取20min，4000r/min离心2min，收集上清液。重复提取一次，合并上清液，用乙酸乙酯定容至50mL。取适量提取液，置于冷冻离心机中，0℃下4000r/min离心10min，取上清液装瓶，供GC分析。6.2　测定6.2.1　色谱分离条件色谱分离条件如下：a）色谱柱：HP-5石英毛细管柱，30m×0.25mm（内径）×0.25μm（膜厚），或相当者；b）进样口温度：250℃；c）载气为99.999%氮气，恒流模式，流速为1.0mL/min；d）检测器温度：300℃；e）进样量：1.0μL；f）进样方式：不分流进样。g）按表1所列的升温程序可以较好地分离目标分析物。表1GC方法升温程序升温速率（℃/min）温度（℃）保持时间（min）初始—1501阶段152703阶段23030056.2.2　定量测定将标准系列工作液分别注入气相色谱中，测定乙酰蓖麻酸酯的色谱峰面积，以标准工作液的质量浓度为横坐标，以相应的峰面积为纵坐标，绘制标准曲线。将试样溶液注入仪器，得到乙酰蓖麻酸酯的峰面积，根据标准曲线得到待测液中乙酰蓖麻酸酯的浓度。如果样品中待测物含量超过线性范围，应用乙酸乙酯稀释到合适浓度后分析。在上述色谱条件下乙酰蓖麻酸甲酯的参考保留时间为19.5min，标准工作溶液的气相色谱图参见附录A的图A.1。3SN/T5218—20196.2.3　空白试验除不加试样外，均按上述测定步骤进行。7　结果计算和表述试样中乙酰蓖麻酸酯的含量按式（1）进行计算：()KmVCCX××−=0……………………………（1）式中：X——试样中乙酰蓖麻酸酯的含量，单位为毫克每千克，mg/kg；C——从标准曲线上得到的乙酰蓖麻酸酯的溶液浓度，单位为毫克每升，mg/L；C0——空白样品中乙酰蓖麻酸酯的浓度，单位为毫克每升，mg/L；V——样液最终定容体积，单位为毫升，mL；m——试样质量，单位为克，g；K——稀释倍数。以重复性条件下获得的两次独立测定结果的算术平均值表示，检测结果保留三位有效数字。8　测定低限、回收率8.1　测定低限气相色谱法的测定低限为250mg/kg。8.2　回收率本方法添加浓度及回收率的实验数据见附录C的表C.1。第二法　气相色谱-质谱联用法9　方法提要各类食品经溶剂提取、净化后经气相色谱-质谱联用仪进行测定。采用选择离子监测扫描模式（SIM），以保留时间和定性离子的丰度比定性，外标法定量。10　试剂和材料除特殊注明外，所有试剂均为分析纯（储存于玻璃瓶中，避免接触塑料），水为去离子水。10.1　正己烷：色谱纯。10.2　乙腈：色谱纯。10.3　乙醇：色谱纯。10.4　氯化钠。10.5　无水硫酸钠：同3.2。4SN/T5218—201910.6　乙酰蓖麻酸甲酯（MethylO-Acetylricinoleate）：分子式C21H38O4，CASNo.：140-03-4，纯度大于等于99%。10.7　乙酰蓖麻酸甲酯标准储备液（1g/L）：准确称取0.1g（精确至0.1mg）乙酰蓖麻酸甲酯标准物质，转移至100mL容量瓶中，用正己烷稀释、定容，4℃冰箱中避光保存。10.8　乙酰蓖麻酸甲酯标准中间液（100mg/L）：移取10mL标准储备液（10.7）于100mL容量瓶中，用正己烷稀释定容。10.9　乙酰蓖麻酸甲酯标准工作液：分别移取0.10mL、0.50mL、1.00mL、2.00mL、5.00mL和10.00mL标准工作液（10.8）于100mL容量瓶中，用正己烷稀释定容，即得浓度为0.1、0.5、1.0、5.0和10.0mg/L的标准系列溶液，临用前配制。11　仪器和设备除特殊注明外，其余所用设备均同4.2~4.8。11.1　气相色谱-质谱联用仪（GC-MS），配电子轰击离子源（EI）。12　样品的制备与保存12.1　试样制备12.1.1　液体、半固体样品至少取同一批次3个最小完整包装样品（混合后的液体样品100mL~500mL，半固体样品总量100g~500g），置于硬质全玻璃器皿中，混合均匀，待称样处理。12.1.2　固体或粉状样品取有代表性样品500g，采用粉碎机粉碎，再将其研磨成细粉状，充分混匀后装入洁净的玻璃盛样容器内，密封并标明标记。12.2　试样保存粉状试样于0℃~4℃保存；其它试样于-18℃以下冷冻保存。在制样的操作过程中，避免接触塑料，应防止样品受到污染或发生被测物含量的变化。13　测定步骤13.1　试样处理13.1.1　液体类样品准确称取混合均匀的液体试样5g（精确到0.01g）（含有二氧化碳气体的先除去二氧化碳）于25mL具塞磨口玻璃试管中，加入氯化钠至水相饱和，加入5.0mL正己烷，涡旋1min，4000r/min离心2min，收集上清液，供GC-MS分析。13.1.2　不含油固体类试样准确称取不含油脂固体试样5g（精确到0.01g）于50mL具塞磨口玻璃试管中，加水10mL（视试样状况调整加水量），加入氯化钠至水相饱和，再加入10mL乙腈，涡旋1min，超声提取20min，5SN/T5218—2019离心2min，收集上清液。重复提取一次，合并上清液。将提取液于（40±2）℃氮吹至近干，用正己烷溶解残渣，定容至5.00mL，过有机滤膜，供GC-MS分析。13.1.3　含油固体类试样准确称取含油脂固体试样5g（精确到0.01g）于25mL具塞磨口玻璃试管中，加入5mL乙腈，涡旋1min，超声提取20min，离心2min，收集上清液。重复提取一次，合并上清液。放入-18℃冷冻2h，4000r/min下离心2min。取清液于（40±2）℃氮吹至近干，用正己烷溶解残渣，定容至5.00mL，过有机滤膜，供GC-MS分析。13.1.4　食用油脂类试样准确称取混合均匀试样1g（精确到0.01g）于25mL具塞磨口玻璃试管中，加入5mL乙腈，涡旋1min，4000r/min离心2min，收集上清液。重复提取一次，合并上清液。将提取液于（40±2）℃氮吹至近干，用正己烷定容至5.00mL，过滤，供GC-MS分析。13.2　测定13.2.1　色谱条件同6.2.1中表1。13.2.2　质谱条件质谱条件如下：a）色谱柱：HP-5MS石英毛细管柱，30m×0.25mm（内径）×0.25μm（膜厚），或相当者；b）进样口温度：280℃；c）载气为99.999%氦气，恒流模式，流速为1.0mL/min；d）离子源温度：230℃；e）电离能量：70eV；f）接口（传输线）温度：280℃，；g）电子轰击电离源（EI），选择离子监测模式（SIM）；h）定量离子：294，参考离子：262、150；i）溶剂延迟时间：5min；j）进样量：1.0μL；k）进样方式：不分流进样。13.2.3　定性测定如果样液保留时间与标准溶液相一致（±0.5%），并且在扣除背景后的样品质谱图中，所选择的离子均出现，而且所选择的离子峰度比与标准样品的离子峰度比相一致，则可判断样品中存在这种被测物。使用气相色谱-质谱定性分析时，相对离子丰度最大允许误差见表2。表2　定性时相对离子丰度的最大允许偏差相对离子丰度＞50%＞20%至50%＞10%至20%≤10%允许的相对偏差±10%±15%±20%±50%6SN/T5218—201913.2.4　定量测定根据试样中被测物的含量情况，选取响应值适宜的标准工作液进行色谱分析，标准曲线工作液应至少有5个浓度水平，应包括零点。标准工作液和待测液中两种药物的响应值均应在仪器线性响应范围内。如果样品中待测物含量超过线性范围，应用乙酸乙酯稀释到合适浓度后分析。在上述色谱条件下乙酰蓖麻酸甲酯的参考保留时间为19.5min，标准工作溶液的气相色谱-质谱选择离子色谱图参见附录B的图B.1，质谱图参见附录B的图B.2。13.2.5　空白试验除不加试样外，均按上述测定步骤进行。14　结果计算和表述试样中乙酰蓖麻酸酯的含量按式（2）进行计算：()KmVCCX××−=0……………………………（2）式中：X——试样中乙酰蓖麻酸酯的含量，单位为毫克每千克，mg/kg；C——从标准曲线上得到的乙酰蓖麻酸酯的溶液浓度，单位为毫克每升，mg/L；C0——空白样品中乙酰蓖麻酸酯的浓度，单位为毫克每升，mg/L；V——样液最终定容体积，单位为毫升，mL；m——试样质量，单位为克，g；K——稀释倍数。注：计算结果应扣除空白值。15　测定低限、回收率15.1　测定低限气相色谱-质谱联用法中一般性样品的测定低限为0.1mg/kg，食用油脂类的测定低限为0.5mg/kg。15.2　回收率本方法添加浓度及回收率的实验数据参见附录C的表C.2。7SN/T5218—2019附录A（资料性附录）乙酰蓖麻酸酯标准物质的气相色谱图图A.1　乙酰蓖麻酸酯标准物质的气相色谱图8SN/T5218—2019附录B（资料性附录）乙酰蓖麻酸酯标准物质的气相色谱-质谱选择离子色谱图图A.1　溴化植物油衍生物的标准离子色谱图图B.2　乙酰蓖麻酸酯标准物质的