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书书书犐犆犛０７．０８０犃２１中华人民共和国国家标准犌犅／犜３８０８９—２０１９生物产品降解有机磷类农药功效评价技术规范犜犲犮犺狀犻犮犪犾狊狆犲犮犻犳犻犮犪狋犻狅狀狅犳犲犳犳犻犮犪犮狔犲狏犪犾狌犪狋犻狅狀犳狅狉犱犲犵狉犪犱犪狋犻狅狀狅犳狅狉犵犪狀狅狆犺狅狊狆犺狅狉狅狌狊狆犲狊狋犻犮犻犱犲狊犫狔犫犻狅犾狅犵犻犮犪犾狆狉狅犱狌犮狋狊２０１９１０１８发布２０１９１０１８实施国家市场监督管理总局中国国家标准化管理委员会发布书书书前 言 本标准按照ＧＢ／Ｔ１．１—２００９给出的规则起草。本标准由中国标准化研究院提出并归口。本标准起草单位：河北农业大学、中国标准化研究院、河北科技大学、北京工商大学、北京萨姆伯科技有限公司、浙江东杰生物科技有限责任公司、中国生物技术发展中心。本标准主要起草人：霍书英、程书梅、马爱进、贾英民、孙纪录、王志新、郝帅、杨志坚、郑刚、何蕊。Ⅰ犌犅／犜３８０８９—２０１９生物产品降解有机磷类农药功效评价技术规范１ 范围本标准规定了生物产品降解有机磷类农药功效评价的一般原则、基本要求、评价方法和结果表述。本标准适用于生物产品降解有机磷类农药功效评价。２ 规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。ＧＢ／Ｔ６６８２ 分析实验室用水规格和试验方法ＮＹ／Ｔ７６１ 蔬菜和水果中有机磷、有机氯、拟除虫菊酯和氨基甲酸酯类农药多残留的测定３ 术语和定义下列术语和定义适用于本文件。３．１生物产品 犫犻狅犾狅犵犻犮犪犾狆狉狅犱狌犮狋狊由生物技术制备的产品。 注：本标准中的生物产品特指具有降解有机磷类农药功能的微生物及酶产品。３．２有机磷类农药 狅狉犵犪狀狅狆犺狅狊狆犺狅狉狅狌狊狆犲狊狋犻犮犻犱犲狊含有磷原子的有机酯类化合物农药。 注：包括六类，即：一硫代磷酸酯、二硫代磷酸酯、磷酸酯、膦酸酯、磷酰胺、硫代磷酰胺。４ 一般原则４．１ 生物产品标签或说明书有明确的微生物和酶名称的方可开展评价。４．２ 科学、公正开展功效评价工作，评价过程及评价方法科学。４．３ 评价结果准确、可靠，采用科学的统计方法进行比较，不得伪造、变造检验报告或者数据、结果。５ 基本要求５．１ 按照相关法律法规和标准要求对样品进行接收、保管、交接、配制、回收、退还／销毁处理，并制定相应的管理制度和程序。５．２ 应具备与功效评价相适应的专业技术人员。５．３ 实验室环境条件应满足评价要求，开展微生物评价的实验室应符合生物安全一级要求。５．４ 功效评价使用的仪器与设备种类、数量、性能、量程、精度应能满足功效评价的需要。微生物产品１犌犅／犜３８０８９—２０１９功效评价需要的器皿材料应经过无菌处理。５．５ 功效评价使用的试剂应为分析纯，水应符合ＧＢ／Ｔ６６８２中规定的二级水。５．６ 功效评价选用的有机磷类农药纯度应大于或等于９５％。应根据微生物种类选择培养基。５．７ 实验结束后，实验材料应经过无害化处理，保证实验环境的洁净与安全要求。６ 评价方法６．１ 试验设计应符合表１要求。表１ 试验设计项目产品种类微生物产品酶产品处理设计供试样品、失活样品、空白对照有机磷类农药选择根据评价需要选择一种或几种重复次数不少于３次反应体系按正交试验结果确定ａ ａ微生物和酶产品说明书中有明确反应体系的按说明书要求进行。６．２ 溶液制备准确称取一定量的有机磷类农药标准品用丙酮配制成１００ｍｇ／Ｌ的农药储备液或直接购买带标准物质证书、浓度为１００ｍｇ／Ｌ的农药标准品，４℃冷藏，用锡箔纸避光保存。试验时稍微加热溶解完全，用缓冲液稀释成一定浓度的工作液，现用现配。６．３ 样品处理６．３．１ 供试样品供试微生物和酶产品若为块状固体产品应进行研磨处理，称取一定质量的供试固体样品，采用不同ｐＨ的缓冲液按要求稀释为不同浓度（ｇ／ｍＬ）备用；若供试样品为液体，用不同ｐＨ的缓冲液按要求稀释为不同浓度（ｍＬ／ｍＬ）备用。６．３．２ 失活样品取部分供试样品在１２１℃处理３０ｍｉｎ，备用。６．３．３ 空白样品用不同ｐＨ的缓冲液代替待测生物产品，备用。６．４ 反应体系确定设计正交实验，宜选取底物浓度、样品浓度、ｐＨ、温度、时间等影响微生物或酶产品作用的因素确定反应体系。２犌犅／犜３８０８９—２０１９６．５ 降解处理６．５．１ 微生物产品降解处理取２５０ｍＬ三角瓶９个，其中空白样品３个、供试样品３个、失活样品３个。按照最佳反应体系确定的底物浓度、微生物添加量，制备成反应体系为１００ｍＬ的培养液，在最佳反应体系条件下进行降解反应。６．５．２ 酶产品降解处理取５０ｍＬ离心管９个，空白样３个，供试样品３个，失活样品３个。按照最佳反应体系确定的酶的添加量、底物浓度，制备成反应体系为１５ｍＬ的反应液，在最佳反应体系条件下进行降解反应。６．６ 测定降解处理结束后，取１５ｍＬ的反应液，加入３０ｍＬ乙腈，按照ＮＹ／Ｔ７６１要求进行处理和气相色谱测定。６．７ 降解率计算按照式（１）计算：犚＝（ρｉ－ρａ）－（ρｉ－ρｂ）－（ρｉ－ρｃ）ρｉ×１００………………（１） 式中：犚———降解率，％；ρｉ———底物原始浓度，单位为毫克每升（ｍｇ／Ｌ）；ρａ———供试样品降解反应终点底物浓度，单位为毫克每升（ｍｇ／Ｌ）；ρｂ———失活样品降解反应终点底物浓度，单位为毫克每升（ｍｇ／Ｌ）；ρｃ———空白样品降解反应终点底物浓度，单位为毫克每升（ｍｇ／Ｌ）。以平行样的平均值为最终的降解率值，计算结果保留到小数点后两位。７ 结果表述７．１ 评价结果应包括降解率和降解效果，见表２。表２ 评价结果降解率（犚）降解效果犚≥８０％好６０％≤犚＜８０％良好４０％≤犚＜６０％较好２０％≤犚＜４０％一般犚＜２０％差７．２ 应表述出评价产品的名称、生产组织名称、降解有机磷类农药的名称、降解有机磷类农药的浓度、降解率、反应体系参数（包括ｐＨ值、温度、时间等）、降解效果（好、良好、较好、一般、差）。犌犅／犜３８０８９—２０１９